一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，提供了一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法。本发明专利技术以麋鹿的基因组序列为参考序列，对其SNP进行注释，并对富集SNP区域的候选基因序列进行挖掘，开发鉴定鹿科及麋鹿的核酸分子、引物组、试剂盒及方法，为麋鹿的皮毛、茸、肉等制品的鉴定提供基础依据，实现通过电泳鉴定DNA扩增产物，即可进行麋鹿的物种鉴定，解决了鹿科产品及其麋鹿制品快速鉴定的问题。产品及其麋鹿制品快速鉴定的问题。产品及其麋鹿制品快速鉴定的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]我国是一个鹿类资源极其丰富的国家，占世界鹿类资源的41％，由于生态环境的破坏、栖息地丧失和非法捕猎等因素的共同作用，鹿科动物中的麋鹿野生种群数量在急剧减少，麋鹿已被列为濒危物种，属于国家I级重点保护野生动物。同时鹿相关的产品制品快速增加，开展麋鹿产品及其深加工制品的成分鉴别检测十分必要。
[0003]目前，国内外对物种间鉴定的方法主要为传统形态学技术、基于蛋白质免疫组学的生化鉴定技术和基于分子生物学的现代分子检测技术。分子检测技术利用荧光定量PCR、片段长度多态性检测，测序技术以及特异位点检测技术等多种检测手段，具有稳定性好、重复性高、高效特异、灵敏快速的特点，广泛应用于物种鉴定。
[0004]随着高通量重测序的快速发展，利用测序技术对鹿类动物的系统分化和分类的研究逐渐开展起来，这些研究从分子水平为解决鹿类动物的物种鉴定问题提供基础数据。然而，目前对于有效鉴定鹿科产品及其麋鹿的特异位点还未明确，也无简便易行的检测方法。另外，由于之前所用的物种鉴定引物多为线粒体序列，扩增产物需经测序或者SNP检测设计盒进行检测，费时费力。而基于PCR为基础的检测技术由于简单、快速、特异、灵敏、准确等优势,成为物种鉴定中最常用的也是最核心的方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法，以达到快速鉴定麋鹿样本，比较麋鹿及其亲缘种、近缘种的基因的目的。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种用于鉴定麋鹿的检测标志物，所述核酸分子如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
[0008]SEQ ID NO：1所示核酸分子序列在麋鹿及其亲缘种麋鹿，梅花鹿，黇鹿，白唇鹿和马鹿5种鹿科动物的检测样本中具有高度的保守一致性，而在鹿的近缘物种的检测样本中具有高度的差异性，可用于制备鉴定麋鹿及其亲缘种麋鹿，梅花鹿，黇鹿，白唇鹿和马鹿5种鹿科动物的检测标志物。
[0009]SEQ ID NO：2所示核酸分子序列在麋鹿的检测样本、麋鹿的亲缘种梅花鹿等以及近缘物种野马，牛等的检测样本中具有高度的差异性，可用于制备鉴定麋鹿的检测标志物。
[0010]本专利技术还提供了鉴别麋鹿的引物组，其能够扩增如SEQ ID NO：1所示的核酸分子。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，所述引物组由SEQ ID NO：3所示的上游引物和SEQ ID NO：4所示的下游引物组成，扩增得到SEQ ID NO：1所示鉴定麋鹿的检测标志物。
[0012]同时，本专利技术还提供了鉴别麋鹿的引物组，其能够扩增如SEQ ID NO：2所示的核酸
分子。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，所述引物组由SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQ ID NO：6所示的下游引物组成，扩增得到SEQ ID NO：2所示特异性鉴定麋鹿的检测标志物。
[0014]本专利技术还提供了一种鉴别麋鹿的试剂盒，包括上述鉴别麋鹿的引物组。
[0015]进一步的，在本专利技术的一些实施方案中，所述鉴别麋鹿的试剂盒还包括扩增反应试剂。
[0016]在一些具体实施例中，所述扩增反应试剂包括DNA聚合酶、镁离子和/或dNTP。
[0017]本专利技术还提供了上述用于鉴别麋鹿的检测标志物、鉴别麋鹿的引物组在制备鉴别麋鹿的产品中的应用。
[0018]其中，所述产品为试剂盒，所述试剂盒包括用于扩增上述检测标志物的引物对。
[0019]在一些实施方案中，所述引物对包括SEQ ID NO：3所示的上游引物和SEQ ID NO：4所示的下游引物，或包括SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQ ID NO：6所示的下游引物。
[0020]所述检测样本包括组织或血液。
[0021]此外，本专利技术还提供了一种鉴别麋鹿的方法，
[0022](1)以上述的鉴定麋鹿的引物组扩增检测样本；
[0023]或(2)以上述的试剂盒扩增检测样本。
[0024]如果以上述能够扩增如SEQ ID NO：1所示的核酸分子的鉴别麋鹿的引物组扩增，获得对应扩增产物，则待测样本来源于麋鹿或其亲缘种，如麋鹿，梅花鹿，黇鹿，白唇鹿和马鹿；如果以上述能够扩增如SEQ ID NO：2所示的核酸分子的鉴别麋鹿的引物组扩增，获得对应扩增产物，则待测样本来源于麋鹿。
[0025]由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种鉴定麋鹿的检测标志物、引物组、试剂盒及方法。本专利技术以麋鹿的基因组序列为参考序列，对其SNP进行注释，并对富集SNP区域的候选基因序列进行挖掘，开发鉴定鹿科及麋鹿的核酸分子、引物组、试剂盒及方法，为麋鹿的皮毛、茸、肉等制品的鉴定提供基础依据，实现通过电泳鉴定DNA扩增产物，即可进行麋鹿的物种鉴定，解决了鹿科产品及其麋鹿制品快速鉴定的问题。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0027]图1示引物M1在5种鹿科动物(麋鹿、梅花鹿、黇鹿、白唇鹿和马鹿)以及近缘物种野马、斑羚和牛的特异性扩增结果，其中，泳道1为麋鹿，泳道2为梅花鹿，泳道3为黇鹿，泳道4为白唇鹿，泳道5为马鹿，泳道6为野马，泳道7为斑羚，泳道8为牛，M为DL2000 Marker；
[0028]图2示引物M2在5种鹿科动物(麋鹿、梅花鹿、黇鹿、白唇鹿和马鹿)以及近缘物种野马、斑羚和牛的特异性扩增结果，其中，泳道1为麋鹿，泳道2为梅花鹿，泳道3为黇鹿，泳道4为白唇鹿，泳道5为马鹿，泳道6为野马，泳道7为斑羚，泳道8为牛，M为DL2000 Marker。
具体实施方式
[0029]本专利技术基于对麋鹿，梅花鹿，黇鹿基因组重测序工作，以麋鹿的基因组信息为参考
序列，通过对3种鹿科动物的基因组进行筛选，选择在三种鹿科动物SNP热点富集的基因序列为特征序列，共筛选到200条序列，对其设计引物并进行筛选，共获得2对有效物种鉴定引物。利用该2对引物在5种鹿科动物(麋鹿、梅花鹿、黇鹿、白唇鹿和马鹿)以及近缘关系的野马、斑羚和牛物种中，共60个个体中进行扩增。结果显示，引物M1在5种鹿科动物的基因组中均可得到有效扩增，获得成功扩增的目的片段；而在野马、斑羚和牛基因组中均不能成功扩增出目的片段。引物M2仅在麋鹿基因组中获得有效扩增，获得成功扩增的目的片段，而在梅花鹿、黇鹿、白唇鹿和马鹿等4种鹿科动物以及近缘种的基因组中均不能成功扩增出目的片段。本专利技术可实现通过电泳鉴定DNA扩增产物即可进行麋鹿的物种鉴定，解决了鹿科产品及其麋鹿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定麋鹿的检测标志物，其特征在于，核酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO：2所示。2.一种鉴定麋鹿的引物组，其特征在于，包括SEQ ID NO：3所示的上游引物和SEQ ID NO：4所示的下游引物，或包括SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQ ID NO：6所示的下游引物。3.权利要求2所述的鉴定麋鹿的引物组，其特征在于，包括SEQ ID NO：3所示的上游引物和SEQ ID NO：4所示的下游引物，以及SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQ ID NO：6所示的下游引物。4.一种鉴定麋鹿的试剂盒，其特征在于，含有权利要求2或权利要求3所述的引物组。5.权利要求4所述的鉴定麋鹿的试剂盒，其特征在于，还包括扩增反应试剂。6.权利要求1所述用于鉴定麋鹿的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：张树苗，田恒玖，李夷平，陈颀，陈星，白加德，李俊芳，
申请(专利权)人：北京麋鹿生态实验中心，
类型：发明
国别省市：