人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及钙离子拮抗剂检测技术领域，提供了一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒。本发明专利技术包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。本发明专利技术具备高灵敏度，高特异性，高准确度检测结果，还可以同时检测多种具有抗高血压作用的CCBs，并拥有操作简单方便，容易推广的CCBs直接检测方法及试剂盒，以减小基质效应和化合物不稳定性对实验结果的影响，从而提高临床检测质量。从而提高临床检测质量。从而提高临床检测质量。

【技术实现步骤摘要】
人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒


[0001]本专利技术属于钙离子拮抗剂检测
，具体是一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒。

技术介绍

[0002]钙离子拮抗剂，又称钙通道阻滞剂(calcium channel blockers，CCBs)用于治疗动脉高血压、室上性心律失常、心绞痛、偏头痛和外周血管痉挛。在过去十年中，CCBs的使用有所增加；这些药物用于多种心血管疾病，占抗高血压药物使用量的30％以上。钙通道阻滞剂中毒存在较高的发病率和死亡率，是治疗性心血管药物中毒和死亡的最常见原因之一。
[0003]CCBs阻断L型电压门控钙通道，二氢吡啶类药物对血管平滑肌中的L型通道具有更大的亲和力。在治疗剂量下，二氢吡啶引起血管舒张；在中毒的情况下，药物可能会失去这种药理选择性，导致显著的不良反应，包括恶心、呕吐、低血压(由于血管扩张和/或心肌抑制)、意识改变和心脏传导障碍，如窦性心动过缓、心脏传导阻滞、其他缓慢心律失常和心搏停止。因此，使用足够浓度的钙离子拮抗剂对于促进患者的最佳血液水平以实现准确用药至关重要。
[0004]目前，大多数钙离子拮抗剂浓度监测是通过生物样品的液相色谱
‑
质谱(LC
‑
MS)分析进行的，它具有高灵敏度、高选择性和高通量的特点。其他分析方法包括紫外线检测高效液相色谱法(HPLC
‑
UV)、气相色谱
‑
质谱(GC
‑
MS)、气相色谱
‑
电子捕获检测法(GC/>‑
ECD)。单独使用液相色谱法已不能满足检测灵敏度的要求，因为具有复杂基质的样品具有许多杂峰，无法有效分离。同时，气相色谱
‑
质谱检测药物需要样品的衍生物和耗时的处理。
[0005]生物样本，如血液、尿液、牛奶和组织液，具有需要处理适当分离和纯化技术的复杂基质。迄今为止，已经报告了蛋白质沉淀(PP)、液
‑
液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)和其他萃取技术，用于分析生物样品中的精神药物。然而，一些技术，如LLE、SPE或衍生化，都有工作流程耗时、样品或化学品消耗的缺点。QuEChERS技术由Anastassiades和Lehotay基于固相萃取和基质固相分散技术提出，该方法简单快速，提取过程所需溶剂少，环境污染少。与传统的提取方法相比，改良的QuEChERS方法简单且廉价，处理时间短，溶剂消耗低，色素纯化率高。
[0006]因此，临床检测亟需一种不仅具备高灵敏度，高特异性，高准确度检测结果，还可以同时检测多种具有抗高血压作用的CCBs，并拥有操作简单方便，容易推广的CCBs直接检测方法及试剂盒，以减小基质效应和化合物不稳定性对实验结果的影响，从而实现对分析物的快速、高通量定量监测，为临床用药指导提供支持。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是针对以上问题，提供了一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装
盒。
[0008]优选的，校准品：使用甲醇稀释液，同时加入氨氯地平、非洛地平、尼群地平、尼莫地平和硝苯地平的标准品，配制成6个浓度剂量点的校准品A
‑
F，其中硝苯地平的浓度为1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、40ng/mL，氨氯地平和尼莫地平的浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL，尼群地平的浓度为6ng/mL、15ng/mL、30ng/mL、60ng/mL、150ng/mL、240ng/mL，非洛地平的浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、800ng/mL；
[0009]质控品：使用甲醇稀释液，同时加入氨氯地平、非洛地平、尼群地平、尼莫地平和硝苯地平的标准品，配制成3个浓度的质控品C1
‑
C3，其中硝苯地平浓度为2.5ng/mL、10ng/mL、40ng/mL，氨氯地平和尼莫地平的浓度为5ng/mL、20ng/mL、80ng/mL，尼群地平的浓度为15ng/mL、60ng/mL、240ng/mL，非洛地平的浓度为50ng/mL、200ng/mL、800ng/mL；
[0010]内标准液：使用甲醇作为稀释液，将普萘洛尔稀释至终浓度为20ng/mL；
[0011]提取剂：1mL
‑
2.5mL乙腈；
[0012]QuEChERS净化材料：40
‑
70mg PSA，用隔水包装袋封装；
[0013]盐析剂：250
‑
400mg无水硫酸镁，用隔水包装袋封装；
[0014]流动相A：为纯乙腈；
[0015]流动相B：由乙酸铵与纯化水配制而成，乙酸铵的含量为5
‑
10mmol/L；
[0016]复溶液：由甲醇和纯化水配制而成，甲醇的含量为50％
‑
100％。
[0017]优选的，所述提取剂中乙腈的用量为2mL；
[0018]所述PSA的用量为70mg；
[0019]所述盐析剂中无水硫酸镁的用量为350mg；
[0020]所述流动相B中乙酸铵的含量为5mmol/L；
[0021]所述复溶液中甲醇的含量为50％。
[0022]优选的，其使用方法包括以下步骤：
[0023](1)准备工作液：用甲醇分别稀释试剂盒中的校准品、质控品、内标准液，分别制成校准品工作液、质控品工作液、内标工作液；
[0024](2)样品前处理：取50μL的血浆样品与100μL的内标工作液混合，依次加入提取剂、QuEChERS净化材料和盐析剂，混合均匀后离心分离上清，氮气室温彻底吹干，加入500μL复溶液至溶解完全；
[0025](3)混匀：将步骤(2)中得到的溶液用涡旋混匀器充分混合1min；
[0026](4)设置色谱和质谱条件：根据实际仪器型号分别设置超高效液相色谱和串联质谱仪的工作参数和条件；
[0027](5)样品检测：将处理好的校准品工作液、质控品工作液和血浆样品各5μL注入高超效液相色谱
‑
串联质谱仪进行检测分析，并记录色谱图和检测样品中氨氯地平，非洛地平，硝苯地平，尼莫地平和尼群地平的峰面积与内标峰面积；
[0028](6)结果分析：绘制标准曲线和计算曲线回归方程，分别计算出样品中氨氯地平，非洛地平，硝苯地平，尼莫地平和尼群地平的浓度。
[0029]优选的，所述步骤(1)中，内标工作液按照按内标准液∶甲醇＝1∶99配制而成。
[0030]优选的，所述步骤(5)中的色谱条件为：
[0031]色谱柱：Agilent本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、内标准液、提取剂、QuEChERS净化材料、盐析剂、流动相A液、流动相B液、复溶液、隔水包装袋及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒；校准品：使用甲醇稀释液，同时加入氨氯地平、非洛地平、尼群地平、尼莫地平和硝苯地平的标准品，配制成6个浓度剂量点的校准品A
‑
F，其中硝苯地平的浓度为1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、40ng/mL，氨氯地平和尼莫地平的浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、80ng/mL，尼群地平的浓度为6ng/mL、15ng/mL、30ng/mL、60ng/mL、150ng/mL、240ng/mL，非洛地平的浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、800ng/mL；质控品：使用甲醇稀释液，同时加入氨氯地平、非洛地平、尼群地平、尼莫地平和硝苯地平的标准品，配制成3个浓度的质控品C1
‑
C3，其中硝苯地平浓度为2.5ng/mL、10ng/mL、40ng/mL，氨氯地平和尼莫地平的浓度为5ng/mL、20ng/mL、80ng/mL，尼群地平的浓度为15ng/mL、60ng/mL、240ng/mL，非洛地平的浓度为50ng/mL、200ng/mL、800ng/mL。2.根据权利要求1所述的一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，内标准液：使用甲醇作为稀释液，将普萘洛尔稀释至终浓度为20ng/mL；提取剂：1mL
‑
2.5mL乙腈；QuEChERS净化材料：40
‑
70mg PSA，用隔水包装袋封装；盐析剂：250
‑
400mg无水硫酸镁，用隔水包装袋封装；流动相A：为纯乙腈；流动相B：由乙酸铵与纯化水配制而成，乙酸铵的含量为5
‑
10mmol/L；复溶液：由甲醇和纯化水配制而成，甲醇的含量为50％
‑
100％。3.根据权利要求2所述的一种人体血浆钙离子拮抗剂串联质谱检测试剂盒，其特征在于，所述提取剂中乙腈的用量为2mL；所述PSA的用量为70mg；所述盐析剂中无水硫酸镁的用量为350mg；所述流动相B中的含乙酸铵量为5mmol/L；所述复溶液中甲醇的含量为50％。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李挥，赵婷婷，甄晓兰，邵文亮，邢娣娣，
申请(专利权)人：河北医科大学，
类型：发明
国别省市：