一种急性主动脉夹层检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术具体涉及建立一种同时检测急性主动脉夹层标志物高迁移率组框蛋白B（HMGB1）和可溶性生长刺激表达基因2蛋白（sST2）免疫层析试剂盒，主要成分为免疫层析试纸条，由PVC底板上依次粘附样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。其中硝酸纤维素膜固定HMGB1抗体形成检测线1(T1线)，固定sST2抗体形成检测线2(T2线)，固定抗IgG抗体形成质控线(C线)。本发明专利技术同时公开了HMGB1和sST2抗体偶联微球过程，基于双抗体夹心法检测原理进行检测。本发明专利技术可以实现对两种急性主动脉夹层胸痛新型生物标志物HMGB1和sST2的同时检测，其操作简单、快速，能够用于急性主动脉夹层胸痛及其治疗监测的快速诊断。急性主动脉夹层胸痛及其治疗监测的快速诊断。

【技术实现步骤摘要】
一种急性主动脉夹层检测试剂盒及制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂
，具体一种同时检测急性主动脉夹层标志物HMGB1和sST2的量子点荧光中空微球免疫层析试剂盒及制备方法。

技术介绍

[0002]急性主动脉夹层（acute aortic dissection，AAD）是一种致死率极高的心血管急症。在经过验证、确诊的AAD病例中，医生正确诊断的概率只有15 %至43 %。如果不及时治疗，发病前48小时内死亡率接近50 %，大多数人甚至在到达急诊室之前就已经死亡。主动脉是一个相当复杂的器官，它的壁由三层解剖结构组成——内层（内膜）、中间层（中膜）和外层（外膜），其主要作用是将富含氧气和营养的血液从心脏输送到身体其他部位。主动脉夹层的发病诱因包括：高血压、马氏综合征（Marfan syndrome，MFS）、医源性原因、高龄、老化、心脏手术史、二叶型主动脉瓣（Bicuspidaortic valve）病变、糖尿病等。然而，AAD确切的发病机制仍然没有完全明确。一般任务，持续暴露在高的动脉压力和剪切力下，会导致易感患者的主动脉壁的强度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能同时快速检测急性主动脉夹层两种特异性标志物（高迁移率组框蛋白1，简称HMGB1）和（可溶性生长刺激表达基因2蛋白，简称sST2）的荧光量子点中空微球免疫层析试剂盒，包括样品垫、喷涂有包被抗体（也称为捕获抗体）的硝化纤维素（NC）膜、吸水垫和支撑垫，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上固定有羊抗鼠IgG形成质控线（C线），固定有HMGB1包被抗体Ab1*形成检测线（称“T1线”），固定有sST2包被抗体Ab2*形成检测线（称“T2线”）。2.根据权利要求1所述能同时快速检测HMGB1、sST2的荧光量子点中空微球免疫层析试纸，其特征在于，HMGB1包被抗体Ab1*、sST2包被抗体Ab2*的制备方法，包括以下步骤：1）向荧光量子点中空微球的MES分散液中添加浓度为N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺（或者N
‑
羟基琥珀酰亚胺）、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺进行活化反应；分离出的沉淀物，经2
‑
(N
‑
吗啉)
‑
乙磺酸缓冲液（MES）洗涤后，再分散在磷酸盐缓冲液（PBS）中，得到活化荧光量子点中空微球分散液，浓度为0.1
–
10 mg/mL；2）将活化量子点中空微球分散于PBS缓冲液，滴加HMGB1抗体或者sST2抗体（称为标记抗体）进行偶联反应；3）加入血清白蛋白封闭液终止偶联反应，封闭反应时间为10
–
180 min；4）用PBS缓冲液洗涤3
–
5次后，用抗体保护液重新悬浮HMGB1抗体
‑
荧光中空微球和sST2抗体
‑
荧光中空微球，在2
‑
8℃下低温保存备用。3.HMGB1/sST2荧光免疫层析试剂卡制备过程，步骤如下：1）制备检测线和质控线：HMGB1包被抗体液Ab1*、sST2包被抗体液Ab2*和抗IgG抗体液，以0.1
–
5.0 μL/cm的速率喷涂在硝酸纤维素膜上，形成T1线、T2线和C线，在25
–
39℃条件下，干燥0.5
–
24小时；2）免疫层析试纸条组装：将硝酸纤维素膜附着在支撑垫的中间，再把吸收垫和样品垫分别压印在支撑垫的结尾和开始部分，每个部分的末端都重叠1
–
4 mm的截面；3）将这些组合条切割成2
–
7 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄忠兵，兰红，李东泽，廖晓明，蒲曦鸣，贾禹，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：