用于化学发光免疫检测的抗体检测液及外泌体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于化学发光免疫检测的抗体检测液及外泌体检测试剂盒。所述抗体检测液包含亲和素、化学发光标记物标记的生物素、抗体标记的生物素，所述亲和素含有4个生物素结合位点，其中一个位点与抗体标记的生物素结合、其他三个位点与化学发光标记物标记的生物素结合，通过所述抗体与目标物免疫结合从而实现对目标物的化学发光检测。本发明专利技术提供的试剂盒是利用所述抗体检测液对外泌体进行检测的试剂盒，具体还包括磁珠悬液、发光激发液、标准品、稀释液、洗涤液。本发明专利技术利用链霉亲和素为四聚体分子的性质，使一个CD9抗体分子可以桥接三个吖啶酯分子，将发光信号扩大三倍，提高了试剂盒的灵敏度。了试剂盒的灵敏度。了试剂盒的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
用于化学发光免疫检测的抗体检测液及外泌体检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物免疫检测
，具体涉及一种用于化学发光免疫检测的抗体检测液及外泌体检测试剂盒。

技术介绍

[0002]外泌体(exosome)是活细胞释放到细胞外的微小囊泡，直径在30
‑
160nm。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，它们广泛存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等体液中，被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯。研究表明，外泌体与免疫反应、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中枢神经系统相关疾病和癌症进展有关。外泌体具有细胞类似的拓扑结构，包含DNA，RNA，蛋白质，脂质和小分子代谢物等物质，这些蛋白，脂质，RNA，miRNA等组分可作为癌症诊断和预兆。通过对体液中外泌体的分离，使用组合的标志物反映疾病状态，可以增加疾病诊断的特异性和敏感性。外泌体膜表面具有标记物如CD9、CD63、CD81等，这些标记物有助于我们分离鉴定外泌体。
[0003]目前，市场上外泌体定量的试剂盒很少，且主要采用Westernblot、ELISA和流式细胞术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于化学发光免疫检测的抗体检测液，其特征在于：所述抗体检测液包含亲和素、化学发光标记物标记的生物素、抗体标记的生物素，所述亲和素含有4个生物素结合位点，其中一个位点与抗体标记的生物素结合、其他三个位点与化学发光标记物标记的生物素结合，通过所述抗体与目标物免疫结合从而实现对目标物的化学发光检测。2.如权利要求1所述的用于化学发光免疫检测的抗体检测液，其特征在于：所述亲和素为链霉亲和素，所述化学发光标记物为吖啶酯。3.权利要求2所述的抗体检测液的制备方法，包括如下步骤：1)将生物素和抗体混合后孵育，透析过滤，得到抗体标记的生物素；2)将抗体标记的生物素与链霉亲和素按(0.8
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1.2)：1的摩尔比混合孵育，采用分子筛过滤掉链霉亲和素上连接多个抗体的复合分子，保留链霉亲和素上仅连接一个抗体的复合分子；3)将吖啶酯与生物素混合孵育，获得吖啶酯标记的生物素；4)将吖啶酯标记的生物素与步骤2)中的链霉亲和素连接一个抗体的复合分子按照(3
‑
3.5)：1的摩尔比混合孵育，分子筛过滤，获得链霉亲和素上一个位点连接抗体、三个位点连接吖啶酯的抗体复合物；将该抗体复合物加入缓冲液中，即得到抗体检测液。4.一种外泌体检测试剂盒，其特征在于：包含权利要求1
‑
2任一项所述的抗体检测液。5.如权利要求4所述的一种外泌体检测试剂盒，其特征在于：所述抗体检测液中的抗体为外泌体特异性蛋白CD9或CD81抗体，优选为CD9抗体。6.如权利要求4所述的一种外泌体检测试剂盒，其特征在于：所述抗体检测液中的抗体与生物素、亲和素、化学发光标记物连接在一起组成化学发光物标记的抗体复合物，所述抗体复合物的浓度为0.01
‑
0.05μg/mL。7.如权利要求6所述的一种外泌体检测试剂盒，其特征在于：所述抗体检测液包括3
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5g/L磷酸二氢钠、2
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4g/L磷酸氢二钠、4
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6g/L的氯化钠、4
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6g/L的小牛血清蛋白、250
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300mg/L鼠IgG、pH6.0
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6.5，溶剂为水。8.如权利要求4所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡瑶，马跃，赵小玉，雷静雯，张亚楠，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：