一种治疗新生血管性视网膜疾病的小干扰RNA及其DNA四面体复合物制造技术

本发明专利技术涉及一种小干扰RNA及其用途，所述小干扰RNA特异性靶向Runt相关转录因子1基因及其同型mRNA，通过沉默其互补基因的表达，下调RUNX1表达量。将本发明专利技术的siRNA用于制备治疗新血管生成性眼科疾病的药物，具有十分良好的应用前景。本发明专利技术还将siRNA与TDNs设计成具有空间四面体结构的TDNs

【技术实现步骤摘要】
一种治疗新生血管性视网膜疾病的小干扰RNA及其DNA四面体复合物


[0001]本专利技术涉及针对新生血管性视网膜疾病的药物领域，具体而言，其涉及沉默Runt相关转录因子1(RUNX1)基因的基因药物领域。

技术介绍

[0002]新生血管形成(新血管生成)是很多眼部疾病的共同病理改变，常发生于角膜、虹膜、脉络膜和视网膜，导致的疾病包括角膜新生血管、脉络膜新生血管、视网膜新生血管等病变，常见的由此导致的眼部疾患包括例如：糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)、早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity，ROP)、年龄相关性黄斑变性(age
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related macular degeneration，AMD)(包括湿性AMD和干性AMD，湿性AMD的病理改变为脉络膜新生血管)、新生血管性青光眼等。新生血管可以在角膜、虹膜睫状体、脉络膜、视网膜、黄斑及视盘等几乎眼内所有组织中出现，它能够引起这些部位的组织出血、渗出及增生等一系列病理改变，因而造成眼球结构和功能的破坏，严重损害视功能。眼底新生血管性疾病患者人数在4000万以上，且随着人口老龄化程度加重，患者人数还在不断上升。眼底新生血管性疾病的患者几乎每月都要复诊或注射相关药物，否则视力的受损会严重影响生活。已有研究对于上述疾病的病因探究主要集中于因缺血、缺氧等因素触发炎性反应并刺激该区域促血管生成因子如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血小板源性生长因子(platelet
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derived growth factor，PDGF)等产生，诱导脉络膜、视网膜新生血管形成，并迅速增加微血管的通透性，从而导致黄斑水肿、视网膜出血、玻璃体积血等严重危害视力的并发症。
[0003]RUNX1又称为AML1，是人类白血病中染色体易位最常见的靶位点。RUNX1是十分重要的转录因子，在多种造血细胞系中广泛表达，在造血细胞的分化中起着关键作用，亦可调节造血相关基因的表达。RUNX1基因异常表达和突变常与人类白血病的发生相关。许多研究表明RUNX1是造血细胞生成过程中重要的调节因子，RUNX1蛋白可接受多种翻译后修饰，包括磷酸化、乙酰化等，其活性可受这些翻译后修饰的影响，从而调节造血细胞的分化、凋亡及自我更新。
[0004]近年来，相关研究挖掘出RUNX1靶点与眼新生血管之间的关系，如文献Identification of RUNX1 as a Mediator of Aberrant Retinal Angiogenesis[J].Diabetes,2017:1950
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1956.中将Runt相关转录因子1(RUNX1)鉴定为通过转录组学分析从人PDR纤维血管膜(FVM)获得的CD31(+)血管内皮细胞中上调的基因。使用人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的体外研究表明，在高葡萄糖反应中，RUNX1RNA和蛋白质表达增加，而RUNX1抑制降低了HRMEC的迁移，增殖和管形成。RUNX1的免疫组织化学染色显示，氧诱导视网膜病变小鼠视网膜中患者来源的FVM血管和血管生成簇的血管生成血管具有反应性，这表明RUNX1上调是视网膜血管生成异常的标志。文献Inhibition of Runx1 by the Ro5
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3335 benzodiazepine derivative reduces aberrant retinal angiogenesis
NO:2所示的反义链；或如SEQ ID NO:3所示的正义链、如SEQ ID NO:4所示的反义链；或如SEQ ID NO:5所示的正义链、如SEQ ID NO:6所示的反义链。
[0019]本专利技术的siRNA可使用本领域技术人员已知的常规技术获得，包括但不限于化学合成或重组产生。在某些实施方式中，siRNA可使用适当地保护的核糖核苷亚磷酰胺和常规DNA/RNA合成仪来化学合成，或者还可使用任何适当的启动子从重组环状或线性DNA质粒表达siRNA。在某些实施方式中，可利用标准技术从培养的细胞表达系统分离从重组质粒表达的siRNA，或可在体内在新血管形成的区域或附近细胞内表达siRNA。
[0020]本专利技术第二方面是提供本专利技术的siRNA或含有其的药物组合物在制备预防和/或治疗新生血管性眼科疾病的药物中的应用。所述新生血管性眼科疾病包括但不限于:糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎、年龄相关性黄斑变性、高度近视黄斑出血、中心性渗出性视网膜脉络膜病变和其他血管生成性疾病。
[0021]本专利技术第三方面提供了一种治疗新血管生成性眼科疾病(新生血管性眼科疾病)的药物组合物，包括治疗有效量的siRNA化合物和药学上可接受的辅料(媒介、载体)，所述siRNA核苷酸序列包含如SEQ ID NO:1所示的RNA正义链，如SEQ ID NO:2所示的RNA反义链(对应表1中siRNA
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3)；或如SEQ ID NO:3所示的RNA正义链、如SEQ ID NO:4所示的RNA反义链(对应表1中siRNA
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4)；或如SEQ ID NO:5所示的RNA正义链、如SEQ ID NO:6所示的RNA反义链(对应表1中siRNA
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6)。
[0022]在某些实施方式中，通过考虑诸如受试者的大小和体重等因素,本领域技术人员可以容易地确定要给予给定受试者的siRNA的有效量。所述有效量的siRNA是足以引起细胞中的靶mRNA的RNAi介导的降解的量。临床上有效量是，当给受试者施用时，将通过RNA沉默抑制受试者的血管生成的进展的量。
[0023]根据本专利技术的再一方面，本专利技术也提供新血管生成性眼科疾病的治疗方法，特别是视网膜新血管性眼科疾病(新生血管性视网膜疾病)的治疗方法，包括将预防和/或治疗有效量的siRNA或含有siRNA的药物组合物施用于有需要的个体。
[0024]在某些实施方式中，可以将siRNA或含有siRNA的药物组合以预防和/或治疗的有效剂量施用于患眼的整体、局部，特别是玻璃体。制剂方式可以是任何适于眼部局部施用的剂型，包括但不限于注射剂、滴眼剂等。
[0025]施用所述药物组合物能够降低RUNX1的基因表达，进而抑制患眼相关部位新血管生成，并促进患眼血管的正常化。
[0026]DNA四面体
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siRNA复合物
[0027]目前已有研究的针对AMD、DME等眼底新生血管疾病的siRNA药物有3款，针对的靶点均为VEGF。然而，siRNA药物用于治疗有两大挑战：一个是siRNA暴露血液会有稳定性问题并造成免疫原性，一个是大分子量负电的siRNA无法自己跨膜进入胞内。因此，siRNA往往需要通过载体递送入胞来发挥功能，其中使用最丰富的是腺相关病毒载体(AAV)递送平台，然而，不断有权威研究表明AAV可将外源基因片段插入到染本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小干扰RNA，所述小干扰RNA特异性靶向Runt相关转录因子1基因及其同型mRNA，通过沉默其互补基因的表达，下调RUNX1表达量，所述的小干扰RNA选自：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸组成的有义链和如SEQ ID NO.2所示的核苷酸组成的反义链；(b)如SEQ ID NO.3所示的核苷酸组成的有义链和如SEQ ID NO.4所示的核苷酸组成的反义链；和(c)如SEQ ID NO.5所示的核苷酸组成的有义链和如SEQ ID NO.6所示的核苷酸组成的反义链。2.一种药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1所述的小干扰RNA。3.权利要求1所述的小干扰RNA或权利要求2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗新生血管性眼科疾病的药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其中所述的新生血管性眼科疾病选自糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎、年龄相关性黄斑变性、高度近视黄斑出血或中心性渗出性视网膜脉络膜病变。5.一种用于治疗新生血管性视网膜疾病的DNA四面体药物复合物，所述DNA四面体药物复合物包括：(1)小干扰RNA，所述小干扰RNA特异性靶向Runt相关转录因子1基因及其同型mRNA，通过沉默其互补基因的表达，下调RUNX1表达量，所述的小干扰RNA选自：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸组成的有义链和如SEQ ID NO.2所示的核苷酸组成的反义链；(b)如SEQ ID NO.3所示的核苷酸组成的有义链和如SEQ ID NO.4所示的核苷酸组成的反义链；和(c)如SEQ ID NO.5所示的核苷酸组成的有义链和...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗德伦，徐枭潇，吴大颖，
申请(专利权)人：成都景润泽基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：