用于创伤弧菌快速检测的引物对、crRNA、反应体系、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于病原诊断技术领域，具体涉及用于创伤弧菌快速检测的引物对、crRNA、反应体系、试剂盒及其应用；本发明专利技术利用SHERLOCK技术建立了一种快速检测致病性创伤弧菌的检测方法，该方法可检测创伤弧菌的vvhA致病基因，特异性强，灵敏度高，并且操作简便快捷，结果读取准确迅速，克服了现有检测方法检测时间过长且灵敏度不高的问题。灵敏度不高的问题。灵敏度不高的问题。

【技术实现步骤摘要】
用于创伤弧菌快速检测的引物对、crRNA、反应体系、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于病原诊断
，具体涉及用于创伤弧菌快速检测的引物对、crRNA、反应体系、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]创伤弧菌（vibrio vulnificus）为弧菌属，嗜盐性革兰阴性弧菌，是公认的人兽共患病的重要致病菌之一。创伤弧菌分布于近海或入海口水体、海底沉积物及贝类中。通常人类感染该细菌是因为生食海鲜或者伤口接触了带菌的海水或海洋动物，感染后病情进展迅速，可发展为感染性休克、多器官衰竭，死亡率高达70%，其早期诊断尤为重要。
[0003]创伤弧菌主要毒力因子有溶细胞素（vvhA）、铁载体、荚膜多糖、脂多糖、MARTX毒素、以及金属蛋白酶等；其中，vvhA基因是创伤弧菌中的一种特异性基因，是用于检测的主要靶标。针对该基因，目前已经开发出了多种检测方法和产品，基于核酸检测的聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR和基因芯片、基于等温扩增的核酸序列恒温扩增（NASBA）、环介导等温扩增（LAMP）和实时重组酶扩增（RPA）、以及基于抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测创伤弧菌的特异性引物对，其特征在于，所述引物对包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物。2.用于创伤弧菌检测的特异性crRNA，其特征在于，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。3.用于检测创伤弧菌的反应体系，其特征在于，反应体系为SHERLOCK反应体系，所述体系包括权利要求1所述的引物对和/或权利要求2所述的crRNA。4.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述引物对中各引物的浓度为10~20μM，所述crRNA的浓度为22.5~30nM。5.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括荧光标记分子和LwCas13a蛋白，所述荧光标记分子的浓度为250~300nM，所述LwCas13a蛋白浓度为45nM。6.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括反应缓冲液（Reaction Buffer）、Basic E
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mix、Core ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明义，潘晔，吕鹏，丛海燕，
申请(专利权)人：威海市立医院，
类型：发明
国别省市：