CROT在制备耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂和治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及CROT在制备耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂和治疗药物中的应用。本发明专利技术运用高通量测序、qPCR和WB等多种实验方法，证实了CROT在上皮性卵巢癌细胞和耐紫杉醇卵巢癌细胞中表达较正常的卵巢上皮细胞明显降低且程度不同，表明其可作为诊断上皮性卵巢癌和耐紫杉醇卵巢癌的标志物。同时发现CROT的表达量与耐紫杉醇卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈正相关，则可说明过表达CROT能逆转耐紫杉醇卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性，增加紫杉醇的临床化疗疗效，且CROT的上调还会抑制上皮性卵巢癌细胞增殖，侵袭和迁移，促进上皮性卵巢癌细胞的凋亡，表明CROT可作为药物抑制上皮性卵巢癌细胞的生存。本发明专利技术为上皮性卵巢癌/耐紫杉醇卵巢癌的诊断和治疗提供了新的临床手段。诊断和治疗提供了新的临床手段。诊断和治疗提供了新的临床手段。

【技术实现步骤摘要】
CROT在制备耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂和治疗药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体地说，涉及制备检测CROT分子达到诊断卵巢癌和提高CROT表达治疗耐紫杉醇卵巢癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌的全球发病率居女性生殖系统恶性肿瘤的第二位，卵巢癌中最常见的病理类型是上皮性卵巢癌，临床上治疗起来比较棘手，因为卵巢位于盆腔深部，早期上皮性卵巢癌没有特异性的症状，导致这部分患者在就诊时候，往往已经出现了腹水或者腹部包块，也就是晚期的情况，目前70％的患者在就诊时已经处于晚期，且常伴有复发和耐药，这类癌症的发病率是妇科恶性肿瘤中的第三位，但是它的死亡率却高居第一位，这就说明跟它发现的期别晚，预后差是相关的，因此早期诊断和解决复发及耐药成为改善上皮性卵巢癌患者预后亟待解决的难题。
[0003]目前标准一线治疗为肿瘤减灭术后辅以铂类联合紫杉醇化疗方案，紫杉醇发挥作用的机制是促进微管聚合，使其无法解聚，故无法与微管组织中心相互连接，因此不能形成纺锤体，使正常的细胞分裂周期无法完成，导致细胞死亡。在紫杉醇耐药的机制中，关于微管蛋白改变介导紫杉醇耐药的研究发现，微管发生乙酰化修饰会导致微管的稳定性降低，从而促进紫杉醇耐药的发生。不仅如此，β微管蛋白的突变使微管横向加固作用减弱，稳定性降低，导致紫杉醇抵抗的发生，但只是在体外试验中证实，尚未在人体内证实存在该突变。诸如此类，还存在其他微管相关蛋白的表达改变，最终都是通过影响微管稳定性从而发挥影响紫杉醇敏感性的作用。
[0004]其中，针对卵巢癌的紫杉醇耐药，研究者们探索出了多种介导卵巢癌紫杉醇耐药的机制，包括：一、微管蛋白的改变；二、p
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gp的上调；三、抗凋亡蛋白的过表达或凋亡蛋白的抑制；四、细胞因子及信号通路的改变；五、GSH的脱毒作用。p
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gp的上调已被证实介导多种化疗药物的抵抗，p
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gp是一种跨膜糖蛋白，作为药物转运体，其表达上调会导致导致紫杉醇的排除增多，药效减弱，导致治疗效果不佳。抗凋亡蛋白的过表达或凋亡蛋白的抑制，主要是紫杉醇介导的细胞凋亡被抑制，细胞死亡减少，药效减弱。细胞因子和信号通路的改变介导紫杉醇耐药的研究较为宽泛，如磷酸肌醇3
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激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路已被证明在多种癌症中发挥关键的驱动作用，同时其过度激活也被证实介导紫杉醇抵抗的发生。谷胱甘肽(GSH)的脱毒作用在紫杉醇耐药中也发挥一定的作用，紫杉醇不仅通过稳定微管，影响细胞正常的分裂，它作为一种细胞毒性药物，还会引起细胞的应激反应，此时细胞内的活性氧(ROS)产生增多，发挥氧化损伤作用，而细胞内存在许多抗氧化的分子，GSH已知的经典功能就是抗氧化损伤，能抵消紫杉醇导致的细胞内的活性氧的增多，从而减弱紫杉醇的杀伤作用，也被称为“脱毒剂”。为此，也提出了几种逆转卵巢癌对紫杉醇抵抗性的方法。
[0005]卵巢癌的标准治疗是手术辅助铂类联合紫杉醇化疗的方案，患者在治疗初期多获得明显效果，但大多数会在2年内复发，复发性卵巢癌几乎对所有化疗药物耐药，这极大地限制了化疗临床疗效和应用范围，也是卵巢癌治疗失败的主要原因。目前临床上尚无可用
的逆转卵巢癌紫杉醇耐药的有效辅助药物。
[0006]CROT是一种肉碱O
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辛酰基转移酶，可以催化脂肪酰基在乙酰辅酶A(CoA)和肉碱之间的可逆转移。它负责调控超长链脂肪酸的分解，主要是在将中长度的酰基链从过氧化为酶体转移到细胞质和线粒体进一步分解的过程中发挥关键的作用。现研究结果显示，CROT具有促进脂肪酸代谢和线粒体功能障碍的功能，高通量测序结果及生物信息学分析结果显示，CROT与前列腺癌的预后及乳腺癌的紫杉醇耐药具有相关性；另外通过分析高通量测序，发现CROT与乳腺癌的紫杉醇耐药具有相关性，但尚无相关生物功能实验结论支持。
[0007]目前，尚无CROT抑制上皮性卵巢癌细胞存活及增加卵巢癌对紫杉醇敏感性的报道，然而，通过实验证实CROT具备抑制上皮性卵巢癌细胞生长，侵袭转移，增加卵巢癌对紫杉醇的敏感性的作用是十分必要的。

技术实现思路

[0008]本申请专利技术人运用高通量测序、qPCR和WB等多种实验检测发现，CROT与耐紫杉醇卵巢癌的耐药性和上皮性卵巢癌的生存有关联，基于此完成了本专利技术。
[0009]第一方面，本专利技术提供了CROT基因或蛋白作为诊断标志物在制备上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0010]第二方面，本专利技术提供了检测CROT基因或蛋白含量的试剂在制备上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0011]作为本专利技术的另一优选例，所述检测CROT基因或蛋白含量的试剂选自特异性扩增CROT基因的引物；或特异性识别CROT基因或其转录本的探针；或特异性抗CROT蛋白的抗体。
[0012]作为本专利技术的一个优选例，所述的试剂盒还包括用于检测CROT基因或蛋白的引物对，所述引物对如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
[0013]作为本专利技术的另一优选例，所述上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒包括：核酸抽提试剂；和/或聚合酶链反应试剂；和/或蛋白免疫印迹试剂；和/或酶联免疫反应试剂。
[0014]作为本专利技术的另一优选例，所述上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒的诊断样品为组织、血清、血浆和尿液。
[0015]第三方面，本专利技术提供了CROT蛋白或它们的增效剂在制备治疗上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌的药物中的应用。
[0016]作为本专利技术的一个优选例，所述增效剂选自小分子化合物或生物大分子。
[0017]作为本专利技术的另一优选例，所述的增效剂选自激动剂、上调剂或稳定剂。CROT增效剂及其用途。
[0018]所述的“CROT增效剂”包括了激动剂、上调剂、稳定剂等，是指任何可提高CROT的活性、提高CROT的稳定性、上调CROT的表达、增加CROT有效作用时间的物质，这些物质均可用于本专利技术。它们可以是化合物、化学小分子、生物分子等。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，蛋白水平的，也可以是上调CROT表达的病毒产品等。
[0019]本专利技术优点在于：
[0020]本专利技术运用高通量测序、qPCR和WB等多种实验检测方法，证实了CROT在上皮性卵巢癌细胞/耐紫杉醇卵巢癌细胞中表达降低，卵巢癌细胞中CROT的上调会抑制卵巢癌细胞
增殖，侵袭和迁移，促进卵巢癌细胞的凋亡，且CROT的表达量与耐紫杉醇卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈正相关，能逆转耐紫杉醇卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性，增加紫杉醇的临床化疗疗效，同时，CROT表达水平下降程度的不同能让试剂盒检测出是耐紫杉醇卵巢癌还是卵巢癌，提高耐紫杉醇卵巢癌和卵巢癌患者早期检出率，有利于早期预防和治疗，提高患者生存率。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CROT基因或蛋白作为诊断标志物在制备上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒中的应用。2.检测CROT基因或蛋白含量的试剂在制备上皮性卵巢癌或上皮性卵巢癌预后或耐紫杉醇卵巢癌诊断试剂或试剂盒中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测CROT基因或蛋白含量的试剂选自特异性扩增CROT基因的引物；或特异性识别CROT基因或其转录本的探针；或特异性抗CROT蛋白的抗体。4.根据权利要求1
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3所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒还包括用于检测CROT基因或蛋白的引物对，所述引物对如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。5.根据权利要求2所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许国雄，李昕，
申请(专利权)人：复旦大学附属金山医院上海市金山区眼病防治所，上海市金山区核化伤害应急救治中心，
类型：发明
国别省市：