基于Pictet-Spengler反应的多巴胺检测试剂及应用、多巴胺的检测方法技术

本发明专利技术提供一种基于Pictet

【技术实现步骤摘要】
基于Pictet
‑
Spengler反应的多巴胺检测试剂及应用、多巴胺的检测方法


[0001]本专利技术涉及多巴胺检测
，具体而言涉及一种基于Pictet
‑
Spengler反应的多巴胺检测试剂及应用、多巴胺的检测方法。

技术介绍

[0002]多巴胺(DOP)是儿茶酚胺和苯乙胺家族中一种在脑和身体中扮演重要作用的有机化学物。在大脑中多巴胺作为神经递质，通过神经元释放一种化学物质将信号发送到其它神经细胞；在身体中，多巴胺作为局部化学信使的功能。在血管中它抑制去甲肾上腺素的释放，并作为血管扩张剂；在肾脏中它增加钠和尿的排泄；在胰脏中它减少胰岛素生产；在消化系统中它减少胃肠蠕动和保护肠粘膜；并在免疫系统中它减少淋巴细胞的活性。所以多巴胺与我们的生命活动息息相关，能够检测多巴胺的存在并确定其浓度，对人们的健康而言具有重要意义。
[0003]多巴胺、尿酸和抗坏血酸共存于人体体液中，尿酸和抗坏血酸的存在将会干扰对多巴胺的检测，使得多巴胺检测灵敏度较低，进而使得检测多巴胺的结果不准确，导致对疾病的诊断、预防和治疗产生很严重的影响。高灵敏、简单地检测多巴胺的浓度对于生理功能研究和临床疾病诊断具有重要应用价值。目前，检测多巴胺的方法主要有高效液相色谱法、比色法、荧光光谱法和毛细管电泳法、电化学法等。
[0004]高效液相色谱法(HPLC)是集分离、定性、定量为一体的分析方法，该方法可以用于分离分析多种共存物质，因此也常被用于DOP及其类似物的检测，该方法具有很高的选择性和灵敏性(检出限达7.0ng
·
mL
‑1)，虽然HPLC在混合物的分离、分析中体现了明显的优势，但是HPLC方法的分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用高，分析时间一般比较长。
[0005]荧光光谱法具有操作简单且快速、灵敏等优点，在分析领域得到了广泛地应用，虽然荧光光谱法的检测灵敏度较高，但仍存在荧光淬灭效应、散射光的干扰等问题。同时，用于复杂体系中的DOP测定是比较困难。
[0006]毛细管电泳法(CE)对于混合物质的检测与分离具有分离时间短、分离效率高、系统体积小且易实现不同操作单元的集成等优点，但是分离能力较弱，对pH值要求较高，而且更为关键的是该方法的重现性差。
[0007]电化学分析方法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等优点，同时，其还可以对活体进行分析，这一优势是其它方法都无法比拟的，由于DOP具有良好的电化学响应性能，在电流作用下，其分子中苯环上的羟基被氧化生成醌，之后醌会被还原回去，从而实现电化学方法检测。但是，由于抗坏血酸(AA)和尿酸(UA)与DOP共存于大脑和体液中，在裸电极上三者的氧化电位相近，容易对DOP的检测造成干扰。因此，在直接电化学检测时，必须考虑AA与UA对DOP检测的影响。同时，电化学分析方法虽然快速简单但其稳定性还不够好。
[0008]比色法无需通过精密的设备，可直接用肉眼观察颜色变化并结合其它仪器如紫外可见分光光度计、荧光光谱仪或者颜色处理软件来测定相关组分浓度，具有经济、快速等优
点。但是目前的比色法检测多巴胺仍然存在准确度不高，体系颜色不稳定，已被干扰的问题，从而不能快速有效的检测出多巴胺。

技术实现思路

[0009]本专利技术目的在于针对现有技术的不足，提供一种基于Pictet
‑
Spengler反应的多巴胺检测试剂，以及多巴胺的检测方法，通过该检测试剂对多巴胺进行检测，具有选择性好、不需要依赖大型复杂仪器且操作方便的有点，克服了目前现有检测多巴胺技术中存在的选择性较差、操作复杂、设备要求高等缺陷。
[0010]根据本专利技术目的的第一方面，提出一种多巴胺的检测方法，包括以下步骤：
[0011]配置不同浓度的多巴胺标准溶液，使用预制的多巴胺检测试剂与每个浓度的多巴胺标准溶液分别混合，得到含有不同浓度多巴胺的混合溶液，通过醛基与多巴胺中的氨基发生Pictet
‑
Spengler反应，使含有不同浓度多巴胺的混合溶液体系发生颜色变化，建立颜色响应比色基准；
[0012]使用前述预制的多巴胺检测试剂，与待测溶液混合，得到第一混合溶液，通过醛基与多巴胺中的氨基发生Pictet
‑
Spengler反应，使体系发生颜色变化，通过与所述颜色响应比色基准对比，从而甄别待测溶液中是否含有多巴胺，以及获得多巴胺的浓度范围。
[0013]作为可选的示例，所述预制的多巴胺检测试剂包括含有含醛基化合物的缓冲液，其中，以含醛基化合物最为多巴胺检测的有效检测成分，并通过缓冲液提供检测成分与多巴胺的催化环境。
[0014]作为可选的示例，所述缓冲液提供pH值为4.5～7.2范围内的催化环境。
[0015]作为可选的示例，所述含醛基化合物包括CH3(CH2)
n
CHO、CHO(CH2)
n
CHO、PEG
‑
CHO、CHO
‑
PEG
‑
CHO或醛基化的泊洛沙姆化合物，其中n＝1
‑
10，PEG为直链，四臂或八臂，PEG的分子量为200
‑
20000。
[0016]作为可选的示例，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液。
[0017]作为可选的示例，所述含醛基化合物在缓冲液中的浓度为1％～20％。
[0018]作为可选的示例，例如在多巴胺检测显色响应不明显(如浓度低等)或者需要确定相对明确的多巴胺浓度值时，进一步的方法中，通过紫外吸光度进行测试与检测比对，步骤如下：
[0019]测定所述含有不同浓度多巴胺的混合溶液的紫外
‑
可见光吸收，并将测试所得的吸光度与对应的多巴胺浓度值进行曲线拟合，得到标准曲线；
[0020]测定第一混合溶液的紫外
‑
可见光吸收，得到待测溶液的吸光度，将待测溶液的吸光度代入所述标准曲线，得到待测溶液中多巴胺的浓度值。
[0021]作为可选的示例，所述多巴胺标准溶液的浓度范围为50～1600μM。
[0022]根据本专利技术目的的第二方面，提出一种多巴胺检测试剂，所述检测试剂包括含有含醛基化合物的缓冲液，其中，以含醛基化合物最为多巴胺检测的有效检测成分，并通过缓冲液提供有效检测成分与多巴胺的催化环境；
[0023]所述检测试剂被配置成在其与待测溶液混合时能够基于Pictet
‑
Spengler反应从而使含有多巴胺的混合溶液体系发生颜色变化。
[0024]作为可选的示例，所述缓冲液提供pH值为4.5～7.2范围内的催化环境。
[0025]作为可选的示例，所述含醛基化合物包括CH3(CH2)
n
CHO、CHO(CH2)
n
CHO、PEG
‑
CHO、CHO
‑
PEG
‑
CHO或醛基化的泊洛沙姆化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多巴胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：配置不同浓度的多巴胺标准溶液，使用预制的多巴胺检测试剂与每个浓度的多巴胺标准溶液分别混合，得到含有不同浓度多巴胺的混合溶液，通过醛基与多巴胺中的氨基发生Pictet
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Spengler反应，使含有不同浓度多巴胺的混合溶液体系发生颜色变化，建立颜色响应比色基准；使用前述预制的多巴胺检测试剂，与待测溶液混合，得到第一混合溶液，通过醛基与多巴胺中的氨基发生Pictet
‑
Spengler反应，使体系发生颜色变化，通过与所述颜色响应比色基准对比，从而甄别待测溶液中是否含有多巴胺，以及获得多巴胺的浓度范围。2.根据权利要求1所述多巴胺的检测方法，其特征在于，所述预制的多巴胺检测试剂包括含有含醛基化合物的缓冲液，其中，以含醛基化合物最为多巴胺检测的有效检测成分，并通过缓冲液提供检测成分与多巴胺的催化环境；所述缓冲液提供pH值为4.5～7.2范围内的催化环境。3.根据权利要求2所述多巴胺的检测方法，其特征在于，所述含醛基化合物包括CH3(CH2)
n
CHO、CHO(CH2)
n
CHO、PEG
‑
CHO、CHO
‑
PEG
‑
CHO或醛基化的泊洛沙姆化合物，其中n＝1
‑
10，PEG为直链，四臂或八臂，PEG的分子量为200
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20000；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液。4.根据权利要求2或3所述多巴胺的检测方法，其特征在于，所述含醛基化合物在缓冲液中的浓度为1％～20％。5.根据权利要求1所述多巴胺的检测方法，其特征在于，所述方法包括通过紫外吸光度进行测试与检测比对，步骤如下...

【专利技术属性】
技术研发人员：何一燕，宋吉亮，秦加骏，赵一帆，顾忠伟，
申请(专利权)人：江苏瑞盈新材料科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：