基于反射率测量的干式试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于反射率测量的干式试纸条及其制备方法和应用。本发明专利技术基于反射率测量制备了一种干试纸条，并建立了一种定量检测方法，该方法采用便携式手持分光测色仪测量干式试纸条显色前后表面反射光谱，依据库贝尔卡

【技术实现步骤摘要】
基于反射率测量的干式试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基于反射率测量的干式试纸条及其制备方法和应用，属于体外诊断


技术介绍

[0002]全血或血浆中生化分析物的检测对于疾病、感染和生理状况的判断是一种强有力的诊断工具。通常情况下，其在血液中的浓度通常在mmol/L或更低的浓度范围内，导致其浓度难以精确定量，或者需要复杂的检测设备和熟练的实验室人员。大部分生化分析物可通过比色法检测其浓度，主要原理是通过与一系列酶催化反应后产生过氧化氢，再利用过氧化物酶催化氧化显色底，使底物显色。制作这种试条的主要成本是活性酶和显色底物，将这些反应所需的物质固定在不同膜材上，通过滴加液体进行显色反应的干式试纸条是血液临床检测中的一种常见方法。干式方法相对湿法通常只需要更少体积的样本，操作简便，可以缩短检测时间，提高检测效率。
[0003]基于比色法的干式试纸条通常在固相载体中进行生化反应并显色，需要检测膜表面漫反射光的反射率进行定量。反射率的测量由于固体表面反射光与透射光都存在着明显的散射现象，导致其并不如液体透射率与浓度有较好的线性关系。为了消除上述的非线性关系导致的误差，一些检测仪器采用双波长法、两点法等方法来提高检测精度。但这种干式生化定量检测对大型生化分析仪有较强的依赖性，虽然具有准确度高、重复性好等优点，但检测所需样本量较大，对操作人员和仪器的要求较高。这种情况下，患者需要在采样后的若干个小时乃至几天后才能得到结果。这在家用自检等场景中的推广造成阻碍。而市售自检干式试纸条检测原理多以电化学方法为主，存在检测成本较高，检测项目较少等问题。
[0004]因此，亟需提出一种操作简便，无需大型生化分析仪和专业操作人员，具有快速获得稳定结果能力和宽线性范围的比色法干式试纸条定量检测分析方法。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术所解决的问题在于提供一种基于反射率测量的能够快速、定量、而且能准确检测试剂的含量的干式试纸条。
[0006]本专利技术还要解决的技术问题是提供了所述干式试纸条的制备方法。
[0007]本专利技术最后要解决的技术问题是提供了一种定量检测分析方法。本方法利用小型手持分光测色仪收集数据，操作简便，无需经过专业培训，以解决需要大型生化分析仪和专业人员操作才能实现干式试纸条定量测量的问题，并且能进一步拓宽检测线性范围。
[0008]技术方案：为解决上述技术问题，采用如下技术方案：本专利技术提供了一种基于反射率测量的干式试纸条，所述干式试纸条从上至下依次包括过滤层、反应层和支持层，所述反应层是将反应膜材依次通过前处理液、酶液和显色液处理后得到，所述前处理液为含有表面活性剂的缓冲溶液，所述酶液为含有葡萄糖氧化酶和过氧化物酶的缓冲溶液，所述显色液由底物显色对组成。
[0009]其中，所述过滤层为聚砜膜、聚酯纤维膜或玻璃纤维膜，用于全血或浑浊液体的预处理。
[0010]其中，所述支持层为PVC胶板。
[0011]其中，所述反应层为尼龙膜或定性滤纸。
[0012]其中，所述壳聚糖浓度为0.25％
‑
2％(w/v)，所述聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或聚乙烯醇浓度为0.5％
‑
5％(w/v)。
[0013]其中，所述葡萄糖氧化酶的浓度为50
‑
500U/mL。
[0014]其中，所述过氧化物酶包括天然辣根过氧化物酶或普鲁士蓝纳米酶，所述天然辣根过氧化物酶浓度为50
‑
400U/mL，所述普鲁士蓝纳米酶浓度为15
‑
180μg/mL。
[0015]其中，所述显色对包括4
‑
氨基安替比林(4
‑
AAP)+N
‑
乙基
‑
N
‑
(2
‑
羟基
‑3‑
磺丙基)
‑3‑
甲基苯胺钠盐(TOOS)、4
‑
AAP+N
‑
乙基
‑
N
‑
(2
‑
羟基
‑3‑
磺丙基)
‑
3，5
‑
二甲基苯胺钠盐(MAOS)或4
‑
AAP+2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸(TBHBA)，所述底物的浓度为5
‑
30mg/mL，所述4
‑
AAP与TOOS、4
‑
AAP与MAOS、4
‑
AAP与TBHBA的摩尔比为1：(1
‑
3)。
[0016]其中，所述缓冲溶液包括醋酸
‑
醋酸钠溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠溶液或磷酸二氢钠
‑
磷酸氢二钠溶液，pH为3.5
‑
7.5，缓冲溶液浓度为10
‑
200mmol/L。
[0017]优选的，所述反应层上方设置过滤层，用于全血或浑浊液体的预处理。
[0018]优选的，所述反应层下方设置支持层，用于固定和保护反应层。
[0019]其中，所述的干式试纸条的制备方法包括如下步骤：
[0020]1)制备反应层：
[0021](1.1)配置前处理液，将未处理的反应膜材浸泡入前处理液中，待充分吸收后，取出烘干。
[0022](1.2)配置酶液和显色液，将步骤(1.1)处理后的膜材依次浸泡其中，待充分吸收后，取出烘干备用；
[0023]2)从下至上依次按照支持层、反应层和过滤层组装制得干式试纸条。
[0024]本
技术实现思路
还包括所述的基于反射率测量的干式试纸条的定量检测分析方法，包括如下步骤：
[0025]S1、利用分光测色仪测量空白试纸条表面的反射光谱；
[0026]S2、将含目标检测物的样本滴加到干式试纸条上，反应至底物充分显色；
[0027]S3、利用分光测色仪测量反应后试纸条表面的反射光谱；
[0028]S4、选取反射峰处的反射率值，换算为试纸条显色表面吸光系数K和散射系数S的比值K/S；
[0029]S5、换算得到的K/S值根据预储存的标准曲线定量计算出目标检测物浓度。
[0030]其中，步骤S3中，所述的分光测色仪检测窗口为直径5
‑
10mm的圆形，所述的分光测色仪检测波长范围在400
‑
700nm。
[0031]其中，步骤S4中参数K/S与显色底物浓度成正比，其换算公式如下：
[0032][0033]其中R
peak
为反应后试纸条表面反射光谱吸收峰处的反射率大小，为反应前
空白试纸条表面反射光谱吸收峰处的反射率大小。
[0034]其中，步骤S5中，所述的标准曲线包括6
‑
12个采样点，拟合方式为线性拟合，线性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述干式试纸条从上至下依次包括过滤层、反应层和支持层，所述反应层是将反应膜材依次通过前处理液、酶液和显色液处理后得到，所述前处理液为含有表面活性剂的缓冲溶液，所述酶液为含有葡萄糖氧化酶和类过氧化物酶的缓冲溶液，所述显色液包括显色底物对组成。2.根据权利要求1所述的基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述过滤层包括聚砜膜、聚酯纤维膜或玻璃纤维膜中的一种。3.根据权利要求1所述的基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述表面活性剂包括壳聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或聚乙烯醇中的一种，其中所述壳聚糖浓度为0.25％
‑
2％(w/v)，所述聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇或聚乙烯醇浓度为0.5％
‑
5％(w/v)。4.根据权利要求1所述的基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶浓度为50
‑
500U/mL，所述类过氧化物酶包括天然辣根过氧化物酶或普鲁士蓝纳米酶中的一种，所述天然辣根过氧化物酶浓度为50
‑
400U/mL，所述普鲁士蓝纳米酶浓度为15
‑
180μg/mL。5.根据权利要求1所述的基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述显色对包括4
‑
AAP+TOOS、4
‑
AAP+MAOS或4
‑
AAP+TBHBA，所述底物的浓度为5
‑
30mg/mL，所述4
‑
AAP与TOOS、4
‑
AAP与MAOS、4
‑
AAP与TBHBA的摩尔比为1∶(1
‑
3)。6.根据权利要求1所述的基于反射率测量的干式试纸条，其特征在于，所述缓冲溶液包括醋酸
‑
醋酸钠溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠溶液或磷酸二氢钠
‑
磷酸氢...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，王管诚，董海姣，马明，王建国，
申请(专利权)人：徐州淮海生命科学产业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：