一种高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及核酸提取技术领域，具体涉及一种高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒。本发明专利技术提供的高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒包含裂解液、结合液、洗涤液、洗脱液、磁珠悬液和蛋白酶K的试剂组合，同时还提供了使用该试剂盒提取污水样本核酸的方法。本发明专利技术提供的磁珠法试剂盒，既可以配合传统富集方法对污水病毒浓缩样本进行核酸提取，又可以略过富集步骤对污水样本中的微生物直接进行核酸提取，样本仅需1

【技术实现步骤摘要】
一种高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒


[0001]本专利技术涉及核酸提取
，具体涉及一种高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒。

技术介绍

[0002]随着人口的增加、经济的高速发展和人民生活水平的提高，我国污水排放总量不断增加。城市污水处理厂是保障水环境安全和实现城市可持续发展的重要基础设施。我国城市污水处理厂普遍采用活性污泥法处理污水，其中微生物是去除污水中污染物的主体，是系统稳定运行的基础，因此理解污水处理中微生物的群落结构和功能，对控制和提高污水处理的稳定性具有重要作用。检测污水中存在的微生物核酸可作为判断污水微生物种类及浓度的重要依据。
[0003]污水中的病毒种类很多，不同的病毒，甚至是同一种病毒，其致病能力和存活能力都不一样，对人体的危害也是不同的。全球许多机构都在进行病毒监控方法的研究。其中，利用污水监测该病毒在地区或城市层面的传播，现已被证明是一种可行的方法。污水监测作为社区感染变化的一个领先指标，可以有效的帮助相关部门在疫情蔓延之前进行病毒的防控工作。目前，对于水体病毒性污染的评估尚无统一的标准，通过深入了解其在水体中的分布和分布特征，对于防治病毒性污染、保障水质安全、减少人体健康风险，都有很大的实际价值。研究表明，检测污水中存在的病毒核酸可作为判断污水病毒种类及浓度的重要依据。
[0004]污水中病毒检测的主要步骤为通过提取污水中的病毒核酸，然后对核酸进行qPCR或测序等方法进行检测。对于污水中病毒核酸提取的方法，现在市面上常用的主要为先富集后提取的方法。富集方法包括免疫捕获法、絮凝沉淀法、离心超滤法等；提取方法主要有包括硅基质膜柱提法试剂盒与磁珠法试剂盒两种。一般的病毒富集方法存在以下缺点，1)如絮凝沉淀法在浓缩病毒的同时，也可能会富集许多干扰物质如重金属、腐殖酸等，或者引入新的干扰物质如EDTA等，这会干扰后续的核酸提取与检测；2)部分病毒浓缩方法耗材成本高，耗时较长，富集浓缩加上核酸提取总时间在三到四小时以上，更适合作为实验室少量样本的科研项目使用，不适合大批量的污水样本处理与核酸提取。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒，本专利技术提供的高效提取污水样本核酸的磁珠法试剂盒能够快速高效的提取污水中微生物核酸，适用于大批量的污水样本处理与核酸提取。
[0006]本专利技术提供了污水样本核酸提取试剂组合，包括裂解液、结合液、洗涤液A和洗涤液B；
[0007]所述裂解液包括水、硫氰酸胍、氯化钠、Triton X
‑
100、月桂酰肌氨酸钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、CTAB、PVP 360、盐酸胍、吐温
‑
20和柠檬酸钠；
[0008]所述结合液包括水、盐酸胍、氯化钠、聚乙烯醇、乙酸、乙酸钠和异丙醇，所述聚乙烯醇选自聚乙烯醇PEG 8000、聚乙烯醇PEG 6000和聚乙烯醇PEG2000中的至少一种；
[0009]所述洗涤液A包括水、硫氰酸胍、盐酸胍、聚乙烯醇PEG 8000、氯化钠、吐温
‑
20、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠和异丙醇；
[0010]所述洗涤液B包括水、硫氰酸胍、盐酸胍、吐温
‑
20、Triton X
‑
100和异丙醇。
[0011]相比其他提取试剂，本专利技术提供的污水样本核酸提取试剂组合既可以配合传统富集方法对污水浓缩样本进行核酸提取，又可以选择略过富集步骤对污水样本直接进行核酸提取，能够较好的保证高浓度或低浓度样品中核酸的提取效果，从而获得更准确的技术效果，在实际使用时所覆盖的样品使用范围更广，更利于推广使用。
[0012]优选的，所述裂解液中，各组分的浓度为：所述裂解液由水、1～4M硫氰酸胍、0.2～0.5M氯化钠、0.1vol％～12vol％Triton X
‑
100、0.1wt％～5wt％月桂酰肌氨酸钠、1～50mM三羟甲基氨基甲烷、1～50mM乙二胺四乙酸二钠、0.5vol％～2vol％CTAB、1vol％～5vol％PVP 360、0.1～5M盐酸胍、0.01vol％～1vol％吐温
‑
20和0.1wt％～5wt％柠檬酸钠组成。
[0013]一些实施例中，所述裂解液中，各组分的浓度为：所述裂解液由水、0.5～4M硫氰酸胍、0.1～2M氯化钠、0.1vol％～12vol％Triton X
‑
100、0.1wt％～1wt％月桂酰肌氨酸钠、10～50mM三羟甲基氨基甲烷、5～25mM乙二胺四乙酸二钠、0.5vol％～2vol％CTAB、5vol％PVP 360、1M盐酸胍、0.5vol％～1vol％吐温
‑
20和0.2wt％～1wt％柠檬酸钠组成。在此浓度范围内，所述裂解液的各组分之间配合紧密，能够更高效的裂解污水样本，并使其中的核酸游离于裂解液体系中，从而获得更高的核酸提取效果。
[0014]在一些具体的实施例中，所述裂解液由水、3M硫氰酸胍、0.5M氯化钠、1vol％Triton X
‑
100、1wt％月桂酰肌氨酸钠、20mM三羟甲基氨基甲烷、20mM乙二胺四乙酸二钠、2vol％CTAB、5vol％PVP 360、1M盐酸胍、1vol％吐温
‑
20和1wt％柠檬酸钠组成。实验表明，在此浓度范围内，使用所述裂解液提取高浓度或低浓度的污水样本的核酸效果最好。
[0015]优选的，所述结合液中，各组分的浓度为：所述结合液由水、0.5～5M盐酸胍、0.1～2M氯化钠、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 8000、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 6000、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 2000、1vol％～10vol％乙酸、0.1～2M乙酸钠和10vol％～60vol％异丙醇组成。
[0016]一些实施例中，所述结合液中，各组分的浓度为：所述结合液由水、2～4M盐酸胍、0.5M氯化钠、5wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 8000、5wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 6000、5wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 2000、1vol％～5vol％乙酸、0.5M乙酸钠和30vol％～35vol％异丙醇组成。在此浓度范围内，所述结合液的各组分之间配合紧密，在磁珠法核酸提取中能够更好的配合磁珠吸附样品中经裂解后的核酸，从而获得更高的核酸提取效果。
[0017]在一些具体的实施例中，所述结合液由水、4M盐酸胍、0.5M氯化钠、5wt％聚乙烯醇PEG 8000、5wt％聚乙烯醇PEG 6000、5wt％聚乙烯醇PEG2000、5vol％乙酸、0.5M乙酸钠和35vol％异丙醇组成。实验表明，在此浓度范围内，使用所述结合液提取高浓度或低浓度的污水样本的核酸效果最好。
[0018]优选的，所述洗涤液A中，各组分浓度为：所述洗涤液A由水、0.5～4M硫氰酸胍、0.1～2M盐酸胍、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.污水样本核酸提取试剂组合，其特征在于，包括裂解液、结合液、洗涤液A和洗涤液B；所述裂解液包括水、硫氰酸胍、氯化钠、Triton X
‑
100、月桂酰肌氨酸钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、CTAB、PVP 360、盐酸胍、吐温
‑
20和柠檬酸钠；所述结合液包括水、盐酸胍、氯化钠、聚乙烯醇、乙酸、乙酸钠和异丙醇，所述聚乙烯醇选自聚乙烯醇PEG 8000、聚乙烯醇PEG 6000和聚乙烯醇PEG2000中的至少一种；所述洗涤液A包括水、硫氰酸胍、盐酸胍、聚乙烯醇PEG 8000、氯化钠、吐温
‑
20、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠和异丙醇；所述洗涤液B包括水、硫氰酸胍、盐酸胍、吐温
‑
20、Triton X
‑
100和异丙醇。2.如权利要求1所述的污水样本核酸提取试剂组合，其特征在于，所述裂解液中，各组分的浓度为：所述裂解液由水、0.5～4M硫氰酸胍、0.1～2M氯化钠、0.1vol％～12vol％Triton X
‑
100、0.1wt％～5wt％月桂酰肌氨酸钠、1～50mM三羟甲基氨基甲烷、1～50mM乙二胺四乙酸二钠、1vol％～5vol％CTAB、1vol％～5vol％PVP 360、0.1～5M盐酸胍、0.01vol％～1vol％吐温
‑
20和0.1wt％～5wt％柠檬酸钠组成。3.如权利要求1所述的污水样本核酸提取试剂组合，其特征在于，所述结合液中，各组分的浓度为：所述结合液由水、0.5～5M盐酸胍、0.1～2M氯化钠、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 8000、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 6000、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 2000、1vol％～10vol％乙酸、0.1～2M乙酸钠和10vol％～60vol％异丙醇组成。4.如权利要求1所述的污水样本核酸提取试剂组合，其特征在于，所述洗涤液A中，各组分浓度为：所述洗涤液A由水、0.5～4M硫氰酸胍、0.1～2M盐酸胍、1wt％～10wt％聚乙烯醇PEG 8000、0.1～10M氯化钠、0.01vol％～5vol％吐温
‑
20、1～50mM三羟甲基氨基甲烷、1～50mM乙二胺四乙酸二钠和10vol％～60vol％异丙醇组成。5.如权利要求1所述的污水样本核酸提取试剂组合，其特征在于，所述洗涤液B中，各组分浓度为：所述洗涤液B由水...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞经昊，黄明贤，任辉，
申请(专利权)人：苏州海狸生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：