脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，包括如下步骤：在顶空瓶中，首先，采用3

【技术实现步骤摘要】
脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法


[0001]本专利技术属于脱蛋白生物骨杂质检测
，具体涉及一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法。

技术介绍

[0002]这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术。
[0003]骨修复材料主要包括天然骨材料、骨移植替代材料两大类，其中脱蛋白生物骨材料是采用异种天然骨材料经脱脂、脱蛋白的方法制备而成，具有与人类多孔骨类似的宏观与微观多孔结构，其三维立体多孔结构类似于人的松质骨，具有良好的生物相容性及骨传导性，有助于维持成骨环境的稳定及新生组织血管化，对再生骨有一定的引导作用，被广泛应用于临床。为了保证产品的质量，任何影响脱蛋白生物骨材料的杂质均应得到控制，一旦控制不当，都有可能传递到产品中从而影响产品的安全性和有效性，甚至产生副作用从而危害人体健康。
[0004]脱蛋白生物骨材料多采用在加热条件下、乙二胺循环提取的方式来去除异种天然骨中的蛋白。乙二胺作为主要提取试剂，同时也可能作为杂质残留在脱蛋白生物骨材料中，从而影响脱蛋白生物骨材料的纯度。乙二胺属于胺类有机物，过量的乙二胺会在体内形成致癌物，所以对乙二胺残留的控制尤为重要。但是目前还没有关于脱蛋白生物骨材料中乙二胺残留量测定的相关研究。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0007]一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，包括如下步骤：
[0008]在顶空瓶中，首先，采用3
‑
8g/L的氢氧化钠水溶液对脱蛋白生物骨样品进行超声提取3
‑
10min，然后向其中加入N,N
‑
二甲基甲酰胺，N,N
‑
二甲基甲酰胺的体积大于氢氧化钠水溶液的体积，旋紧瓶盖，摇匀，在98
‑
105℃平衡20
‑
40min，后进行顶空气相色谱检测；
[0009]所述脱蛋白生物骨为乙二胺加热循环提取蛋白后的生物骨。
[0010]上述本专利技术的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
[0011]现有技术中一般采用甲醇和N,N
‑
二甲基甲酰胺作为乙二胺的溶剂进行检测分析。但是经过试验发现，采用甲醇、乙醇和N,N
‑
二甲基甲酰胺作为溶剂对脱蛋白生物骨中残留的乙二胺进行提取时，无法检测到目标产物，而首先采用3
‑
8g/L的氢氧化钠水溶液对脱蛋白生物骨样品进行超声提取，再加入N,N
‑
二甲基甲酰胺时，则可以顺利得到游离乙二胺，进而可以顺利对残留乙二胺进行检测，其原因为：脱蛋白生物骨有一定的吸附作用，游离的钙也会与乙二胺发生络合，通过实验表明，微量的乙二胺残留量未能用甲醇直接提取出来。加入氢氧化钠溶液，为其提供一个强碱环境，使其夺走N上的H
+
，使有机胺游离出来。
[0012]该方法的精密度好，准确度高，适用于动物脱蛋白骨中乙二胺残留量的准确测定和质量控制。
附图说明
[0013]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0014]图1为实施例1加标样品得到的乙二胺色谱图；
[0015]图2为实施例1空白试验得到的乙二胺色谱图；
[0016]图3为实施例1条件下的校正曲线；
[0017]图4为对比例1得到的乙二胺色谱图；
[0018]图5为对比例2得到的乙二胺色谱图；
[0019]图6为对比例3得到的乙二胺色谱图；
[0020]图7为对比例4得到的乙二胺色谱图；
[0021]图8为对比例5得到的乙二胺色谱图；
[0022]图9为对比例6得到的乙二胺色谱图；
[0023]图10为对比例7得到的乙二胺色谱图；
[0024]图11为对比例8得到的乙二胺色谱图。
具体实施方式
[0025]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0026]一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，包括如下步骤：
[0027]在顶空瓶中，首先，采用3
‑
8g/L的氢氧化钠水溶液对脱蛋白生物骨样品进行超声提取3
‑
10min，然后向其中加入N,N
‑
二甲基甲酰胺，N,N
‑
二甲基甲酰胺的体积大于氢氧化钠水溶液的体积，旋紧瓶盖，摇匀，在98
‑
105℃平衡20
‑
40min，后进行顶空气相色谱检测；
[0028]所述脱蛋白生物骨为乙二胺加热循环提取蛋白后的生物骨。
[0029]脱蛋白生物骨材料中的乙二胺杂质由脱蛋白原料引入，在生产过程中需进行控制，一旦控制不当，必将引入到终产品中，故为了保障最终产品的安全性，需用有效的检测方法对其进行研究和控制，将乙二胺残留量控制在允许范围内，因此根据产品的特性，开发建立了顶空气相色谱法测定脱蛋白生物骨中乙二胺残留。
[0030]提取溶剂的选择：现有技术中多采用甲醇和N,N
‑
二甲基甲酰胺作为溶剂进行的分析。而根据脱蛋白生物骨的化学性质，分别考察了含1g/L氢氧化钠的N,N
‑
二甲基甲酰胺溶液、N,N
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二甲基甲酰胺、甲醇对脱蛋白生物骨材料中乙二胺的提取率，结果表明，在仪器条件最佳下，采用N,N
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二甲基甲酰胺、甲醇进行提取，结果无目标峰相应(见对比例6和对比例8)；采用含1g/L氢氧化钠的N,N
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二甲基甲酰胺溶液，结果出现了目标峰。故最终选用了含1g/L氢氧化钠的N,N
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二甲基甲酰胺溶液作为提取液，解决了通用提取方式无法将乙二胺游离出的难题。
[0031]进样方式的选择：现有技术中均采用直接进样法来对产品中的乙二胺进行分析，
该方法适用的前提是待测物基质可溶于提取介质中。针对脱蛋白生物骨，其主要成分为羟基磷灰石，难溶于水、有机溶剂中，难采用直接进样法来对其进行检测。故本研究采用顶空进样方式对其进行进样。
[0032]在一些实施例中，加入的氢氧化钠水溶液的体积为1mL，N,N
‑
二甲基甲酰胺的体积为4mL。
[0033]优选的，氢氧化钠的浓度为4
‑
6g/L。
[0034]在一些实施例中，超声提取的时间为3
‑
6min。
[0035]在一些实施例中，在99
‑
102℃，平衡25
‑
35min后进行顶空气相色谱检测。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：在顶空瓶中，首先，采用3
‑
8g/L的氢氧化钠水溶液对脱蛋白生物骨样品进行超声提取3
‑
10min，然后向其中加入N,N
‑
二甲基甲酰胺，N,N
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二甲基甲酰胺的体积大于氢氧化钠水溶液的体积，旋紧瓶盖，摇匀，在98
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105℃平衡20
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40min，后进行顶空气相色谱检测；所述脱蛋白生物骨为乙二胺加热循环提取蛋白后的生物骨。2.根据权利要求1所述的脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：加入的氢氧化钠水溶液的体积为1mL，N,N
‑
二甲基甲酰胺的体积为4mL。3.根据权利要求2所述的脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：氢氧化钠的浓度为4
‑
6g/L。4.根据权利要求1所述的脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：根据权利要求1所述的脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：超声提取的时间为3
‑
6min。5.根据权利要求1所述的脱蛋白生物骨中乙二胺残留量的检测方法，其特征在于：在99
‑
102℃，平衡25
‑
35min后进行顶空气相色谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：高秀伟，任孝敏，王京燕，郑红霞，姜红，张玉娜，姚安燕，
申请(专利权)人：山东隽秀生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：