一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法技术

本发明专利技术公开了一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法，属于小鼠辅助生殖技术领域。本发明专利技术方法采用超数排卵、体外受精和胚胎移植技术，通过改进供体鼠获得、优化繁育方法除能提供实验研究所需大量同一周龄阳性子代鼠外，还能同步得到同一周龄同窝阴性对照子代鼠，解决了现有的扩繁方法在应用于小鼠实验时，须同步开展同窝阴性对照实验操作的问题，为实验研究者同步提供大量同一周龄子代阴性鼠，并能适用于多基因编辑鼠的快速扩繁过程，在生物医学研究领域具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法


[0001]本专利技术属于小鼠辅助生殖
，具体涉及一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法。

技术介绍

[0002]体外受精(In Vitro Fertilization,IVF)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF
‑
ET。随着技术的发展进步，体外受精技术现在已经比较成熟，主要用于解决：
①
需要得到大批量的同日龄小鼠；
②
雄鼠丧失交配能力但需要获得其后代；
③
普通级动物需净化为SPF级动物；
④
冷冻精子复苏后体外受精。
[0003]快速扩繁是指使用极少数的雄鼠来获得大量同一周龄子代小鼠，快速扩繁可以根据实验者的需求得到更多的阳性鼠，以期快速扩大繁育规模，或者采用二次快速扩繁，整个过程不采用自然交配，只使用体外受精和胚胎移植技术；快速扩繁＝超数排卵+体外受精+胚胎移植。国内现有的快速扩繁方法大多针对阳性鼠获得实验所需大量同一周龄子代鼠，而未能在此过程中同步提供同一周龄阴性鼠作为对照，还需同步开展同窝阴性对照实验。

技术实现思路

[0004]针对
技术介绍
中所提及现有技术的缺陷与不足，本专利技术的目的在于提供一种基因编辑小鼠快速扩繁获得大量同一周龄子代鼠的方法。本专利技术解决的技术问题是当前市场上以体外受精技术方法为主的、解决基因编辑小鼠快速扩繁的辅助生殖技术，是以获得较多数量同一周龄的实验组即基因编辑阳性小鼠为目的，缺少实验研究中不可或缺的对照组即基因编辑阴性小鼠为目的导向。本专利技术针对条件基因敲除小鼠的快速扩繁方法作了优化改进，并在此过程中能够同步提供同一周龄阴性鼠作为对照，无需同步开展同窝阴性对照实验。
[0005]为达成上述目的，本专利技术具体是通过如下技术方案实现的：
[0006]本专利技术提供了一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法，包括如下步骤：
[0007]步骤1)：取适配周龄的基因编辑小鼠与cre小鼠通过体外受精扩繁，得到cre阳性的基因编辑杂合子子代小鼠；
[0008]步骤2)：将步骤1)得到的cre阳性的基因编辑杂合子子代小鼠与基因编辑小鼠通过体外受精扩繁，得到cre阳性的基因编辑纯合子与cre阴性的基因编辑纯合子子代小鼠。
[0009]作为上述方案的进一步优选，步骤1)所述适配周龄指的是8
‑
10周。
[0010]作为上述方案的进一步优选，步骤1)所述基因编辑小鼠为条件基因敲除的小鼠。
[0011]作为上述方案的进一步优选，步骤1)所述基因编辑小鼠为纯合子或杂合子。
[0012]作为上述方案的进一步优选，步骤2)所述基因编辑小鼠为基因编辑杂合子小鼠或步骤1)扩繁获得cre阳性的基因编辑杂合子子代小鼠的同时将基因编辑杂合子小鼠自交得到的基因编辑纯合子子代小鼠。
[0013]作为上述方案的进一步优选，步骤2)所得cre阳性的基因编辑纯合子子代小鼠与cre阴性的基因编辑纯合子子代小鼠能够分别与基因编辑纯合子小鼠再次通过体外受精扩繁得到更多的同窝后代。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0015]本专利技术提供了满足基因编辑小鼠快速扩繁获得大量同一周龄基因编辑阳性小鼠及同窝对照阴性小鼠需求的快速扩繁方法；本专利技术通过改进供体鼠获得、优化繁育方法除能提供实验研究所需大量同一周龄阳性子代鼠外，还能同步得到同一周龄同窝阴性对照子代鼠；本专利技术方法能够适用于多基因编辑小鼠的快速扩繁过程，为实验者提供便利。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0017]除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语与本专利技术
的技术人员通常理解的含义相同。在本专利技术的说明书所使用的术语只是为了描述具体实施例的目的，并非用于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0018]实施例1：a
‑
flox/b
‑
cre多基因鼠的扩繁
[0019]一、准备10只8
‑
10周龄的a
‑
flox的纯合雌鼠、1只8
‑
10周龄的a
‑
flox的纯合雄鼠备用(供体鼠获取由外购或内部制作得到的基因工程小鼠，经繁育传代获得稳定遗传的纯合雄、雌鼠。本实施例所用a
‑
flox的纯合鼠：
①
外购获得的纯合或杂合小鼠，达到体成熟周龄8
‑
10周龄即同胞交配，妊娠19
‑
21天出生子代，经子代基因型鉴定得到稳定遗传的子代纯合雄雌鼠；
②
内部制作的基因工程小鼠首代鼠F0鼠，达到体成熟周龄8
‑
10周龄经多次回交、同胞交配，妊娠19
‑
21天出生子代，经子代基因型鉴定得到稳定遗传的子代纯合雄雌鼠)。以所选的10只雌鼠为卵子供体，采用超数排卵：于下午17
‑
18点给每只小鼠腹腔注射5
‑
10IU的PMSG(孕马血清促性腺激素)，48h后再注射5
‑
10IU的HCG(人绒毛膜促性腺激素)，注射HCG后第二天处死雌鼠，取输卵管收集卵子。以所选的1只雄鼠为精子供体，进行精子采集和获能：供体雌鼠注射HCG后第二天上午8点，处死雄鼠取附睾，将精子团挤出后把精子转入获能皿并放入培养箱获能1h。
[0020]二、在矿物油中将卵团挑出并引入授精滴，精子获能1h后，将适量获能滴边缘的精子加入授精滴，进行体外受精；受精6
‑
7h后，将胚胎从授精滴中挑出，洗净放入KSOM培养滴中培养，查看原核及细胞期胚胎发育情况，等待移植。体式显微镜下，将胚胎植入假孕雌鼠的输卵管中，每只假孕雌鼠植入30个胚胎，移植后经19
‑
21天等待雌鼠生产。最终得到23只子代a
‑
flox的纯合雌鼠。
[0021]三、以所得23只子代a
‑
flox的纯合雌鼠为卵子供体，1只a
‑
flox/b
‑
cre
+
雄鼠(达到体成熟周龄8
‑
10周龄的a
‑
flox的纯合鼠a
‑
flox
‑
/
‑
与b
‑
cre
+
的阳性鼠交配，妊娠19
‑
21天出生子代，经子代基因型鉴定获得a
‑
flox
f/
‑
/b
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因编辑小鼠快速扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1)：取适配周龄的基因编辑小鼠与cre小鼠通过体外受精扩繁，得到cre阳性的基因编辑杂合子子代小鼠；步骤2)：将步骤1)得到的cre阳性的基因编辑杂合子子代小鼠与基因编辑小鼠通过体外受精扩繁，得到cre阳性的基因编辑纯合子与cre阴性的基因编辑纯合子子代小鼠。2.根据权利要求1所述基因编辑小鼠快速扩繁的方法，其特征在于，步骤1)所述适配周龄指的是8
‑
10周。3.根据权利要求1所述基因编辑小鼠快速扩繁的方法，其特征在于，步骤1)所述基因编辑小鼠为条件基因敲除...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫，胡曼丽，涂军，田松，
申请(专利权)人：赣南创新与转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：