一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法，该方法包括：取欧洲越橘茎叶作为外植体，诱导其长出一层薄薄的愈伤组织；将该带有一层薄薄愈伤组织的外植体材料放入加有生长素IBA、细胞分裂素ZT和乙酰丁香酮的农杆菌侵染液中进行侵染培养，侵染培养过程中对材料进行超声破碎和真空渗透等处理，促进农杆菌质粒进入植物材料；然后将侵染后的外植体材料进行共培养后再将转基因材料移至筛选培养基中进行筛选，最终获得表现出报告基因(甜菜素合成基因)所呈现的洋红色(玫红色)欧洲越橘愈伤组织。本发明专利技术采用特定的愈伤诱导培养基、农杆菌侵染处理、共培养培养基、共培养时间、抗性愈伤组织筛选培养基等进行根癌农杆菌介导的欧洲越橘愈伤组织转基因体系的构建，得到了转基因成功的玫红色愈伤组织，并且转化率也提高至4％。且转化率也提高至4％。

【技术实现步骤摘要】
一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法


[0001]本专利技术涉及林木转基因
，尤其涉及一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法。

技术介绍

[0002]欧洲越橘(Vaccinium myrtillus Linn.)，又名欧洲蓝莓、钟莓(bilberry)，是杜鹃花科 (Ericaceae)越橘属(Vaccinium Spp.)植物，它是一种低矮灌木，原产于北欧，如今在很多地区也有发现，含有30多种花青素，是含有最多花青素种类的越橘品种，也是花青素最丰富的天然来源之一，含量高达37.47％，具有很高的经济价值，药用价值等，被美国草本产品协会列为1类草本植物
[1,2]。欧洲越橘整个植物被用于传统医药，最常用于治疗眼部疾病
[3]，而浆果主要作为新鲜或腌制食品来食用
[4]；除此之外，越橘也可用于生产膳食补充剂。由于越橘它浓郁的味道和颜色，越橘往往比蓝莓(伞状蓝莓、狭叶越桔)更受消费者青睐。随着人们对越橘不断增长的需求，人们对改进越橘的种植和生产也越来越感兴趣。
[0003]在越橘属中，无性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法，其特征在于，包括：(1)以在无菌培养基上生长良好的欧洲越橘苗的幼嫩叶片为外植体材料，将该外植体材料切成合适大小，接种至诱导愈伤的培养基中培养，得到有愈伤的外植体；所用培养基配方为：WPM+3％蔗糖+1％琼脂+0.50mg/L IBA+2.0mg/L ZT,pH＝5.2
±
0.02；(2)材料在再生培养基中生长10
‑
14d后将其作为侵染材料，然后将其放入准备好的农杆菌侵染液中进行侵染培养；(3)待侵染培养结束后，倒出侵染液，将侵染完成的材料在滤纸上晾干，放入共培养培养基中，进行共培养；所述共培养培养基为：WPM+3％蔗糖+0.85％琼脂+0.70mg/L IBA+2.0mg/L ZT+20mg/L AS,pH＝5.2
±
0.02；(4)共培养结束后，用无菌RO水清洗转基因材料，晾干后将其放入筛选培养基中进行筛选培养，直至转基因材料愈伤组织越长越大,并表现出报告基因(甜菜素合成基因)所呈现的洋红色(玫红色)；所述筛选培养基为：WPM+3％蔗糖+0.85％琼脂+0.70mg/L IBA+2.0mg/L ZT+5mg/L HYG+400mg/L Carb,pH＝5.2
±
0.02。2.如权利要求1所述的欧洲越橘转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤(1)中，幼嫩枝条切为0.8cm左右的小段，叶片除去边缘部分切为0.5cm左右的方形；外植体接种方式为：叶片...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔富强，宋艳平，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：