酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用制造技术

本公开提供了一种酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用，属于生物工程技术领域。所述应用包括：将所述酯化基因用于对虾青素进行酯化，所述酯化基因为所述雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因。本公开提供的酯化基因用于虾青素酯化的应用，利用雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因作为酯化基因可以辅助产游离虾青素的菌株，得到酯化虾青素。酯化虾青素。酯化虾青素。

【技术实现步骤摘要】
酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用


[0001]本公开属于生物工程
，特别涉及一种酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用。

技术介绍

[0002]雨生红球藻是一种单细胞淡水微藻,由于能大量累积虾青素而呈现红色，是自然界中合成天然虾青素产量最高的生物之一。雨生红球藻合成的虾青素一般可占细胞干重的3
‑
4％。目前，雨生红球藻中虾青素合成途径已被解析。由乙酰辅酶A起始，经磷酸甲基赤藓醇途径(MEP)路径形成异戊烯焦磷酸(IPP)，异戊二烯单元逐步缩合形成第一个类胡萝卜素
‑
八氢番茄红素(phytoene)，随后去饱和生成番茄红素(lycopene)，环化反应生成β
‑
胡萝卜素(β
‑
carotene)，β
‑
胡萝卜素酮化酶(CrtW)引入酮基生成海胆酮(echinenone)和角黄素(cant axanthin)，然后β
‑
胡萝卜素羟化酶(CrtZ)在角黄素中引入羟基形成凤凰黄质(phoenicoxanthin)，最后形成虾青素。
[0003]尽管雨生红球藻中虾青素合成路径比较清楚，但是其酯化虾青素的基因尚未被报道。相关技术中，酯化虾青素可以通过生物法得到。例如，基于雨生红球藻合成酯化虾青素。在高温下用有机酸或无机酸对雨生红球藻红色相的被囊细胞进行预处理，并用裂解酶或其他酶从厚细胞壁的雨生红球藻细胞中释放成分，然后用丙酮或植物油进行萃取提取酯化虾青素。
[0004]然而，通过以上方法形成酯化虾青素时，合成效率低，不利于批量合成。

技术实现思路

[0005]本公开实施例提供了一种酯化基因用于虾青素酯化的应用，利用雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因作为酯化基因可以辅助产游离虾青素的菌株，得到酯化虾青素。所述技术方案如下：
[0006]本公开实施例提供了一种酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用，所述应用包括：将所述酯化基因用于对虾青素进行酯化，所述酯化基因为雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因。
[0007]具体地，所述酯化基因用于对游离型虾青素进行酯化。
[0008]具体地，所述应用还包括：
[0009]采用所述酯化基因构建酯化虾青素的表达载体；
[0010]将所述表达载体转化至产游离虾青素的菌株中，所述菌株分泌虾青素单酯或者虾青素二酯，得到酯化虾青素。
[0011]进一步地，所述应用还包括：获取所述酯化基因，获取所述酯化基因包括：
[0012]获取所述雨生红球藻的多个dgtt基因；
[0013]从所述多个dgtt基因中，筛选出二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因，作为所述酯化基因。
[0014]更进一步地，采用所述酯化基因构建酯化虾青素的表达载体，包括：
[0015]对所述酯化基因进行密码子优化；
[0016]将优化后的所述酯化基因克隆到线性载体上，得到所述表达载体。
[0017]又进一步地，将优化后的所述酯化基因克隆到线性载体上，包括：
[0018]将载体进行双酶切，得到多个线性化的载体片段；
[0019]通过凝胶电泳对多个所述线性化的载体片段进行分离，回收目的载体片段，得到线性化载体；
[0020]将所述线性化载体和优化后的所述酯化基因通过连接酶进行连接，使得优化后的所述酯化基因克隆到所述线性化载体片段上。
[0021]再进一步地，采用与所述载体配合的内切酶进行双酶切。
[0022]进一步地，所述将所述表达载体转化至产游离虾青素的菌株中，得到酯化虾青素，包括：
[0023]对所述产游离虾青素的菌株进行活化处理；
[0024]将所述表达载体转化至经活化处理后的所述产游离虾青素的菌株中，并进行培养，得到培养液；
[0025]对所述培养液进行处理，得到所述酯化虾青素。
[0026]进一步地，所述产游离虾青素的菌株为细菌、酵母和微藻中的至少一种。
[0027]更进一步地，所述产游离虾青素的菌株为解脂耶式酵母工程菌株。
[0028]本公开实施例提供的技术方案带来的有益效果是：
[0029]本公开实施例提供的酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用，利用雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因作为酯化基因可以辅助产游离虾青素的菌株，能够批量得到酯化虾青素。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本公开实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0031]图1是本公开实施例提供的从重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4中提取的总类胡萝卜素的薄层层析分离图；
[0032]图2A是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素在薄层层析板上新出现条带的LC/MS分析图；
[0033]图2B是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中新鉴定出AST
‑
C18:1的分析图；
[0034]图2C是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中新鉴定出AST
‑
C18:2的分析图；
[0035]图2D是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中新鉴定出AST
‑
C18:0的分析图；
[0036]图2E是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中
新鉴定出AST
‑
C16:0的分析图；
[0037]图2F是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中新鉴定出AST
‑
C16:1的分析图；
[0038]图3是本公开实施例提供的重组解脂耶氏酵母工程菌株HpDGTT4总类胡萝卜素中新鉴定出虾青素二酯AST
‑
C18:2/C18:2的分析图。
具体实施方式
[0039]为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本公开实施方式作进一步地详细描述。
[0040]虾青素的化学名称为3,3
’‑
二羟基
‑
4,4
’
－二酮基
‑
β,β
’‑
胡萝卜素，为萜烯类不饱和化合物，分子式为C
40
H
52
O4。虾青素极易被氧化。虾青素是一种天然红色的酮基类胡萝卜素。
[0041]本公开实施例还提供了一种酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用，该应用包括：
[0042]将酯化基因用于对虾青素进行酯化，酯化基因为雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用，其特征在于，所述应用包括：将所述酯化基因用于对虾青素进行酯化，所述酯化基因为雨生红球藻的二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酯化基因用于对游离型虾青素进行酯化。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用还包括：采用所述酯化基因构建酯化虾青素的表达载体；将所述表达载体转化至产游离虾青素的菌株中，所述菌株分泌虾青素单酯和虾青素二酯中的至少一种，得到酯化虾青素。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用还包括：获取所述酯化基因，获取所述酯化基因包括：获取所述雨生红球藻的多个dgtt基因；从所述多个dgtt基因中，筛选出二酰基甘油酰基转移酶编码Hpdgtt4基因，作为所述酯化基因。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，采用所述酯化基因构建酯化虾青素的表达载体，包括：对所述酯化基因进行密码子优化；将优化后的所述酯化基因克隆到线性载体，得到所述表达载体。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：万霞，吴俊杰，刘鹏阳，黄凤洪，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：