一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用，属于农林科学领域，步骤1：毒源植物、待鉴定植物及指示植物的培养筛选；步骤2：靠接传毒，对筛选到的仅含有难培养病原菌的毒源植物、不含有难培养病原菌的待鉴定植物和指示植物进行位置布局，利用靠接方法进行传毒；步骤3：观察检测，根据难培养病原菌发病周期，观察步骤2中待鉴定植物和指示植物的发病表型，且通过PCR方法检测难培养病原菌的定殖、繁殖情况；步骤4：抗病性及病菌运转速度评价。有效解决由于难培养病菌采用传播媒介的接种率低、接种源病菌不一致等导致的抗性鉴定工作误差较大，导致的鉴定结果不准确等问题。导致的鉴定结果不准确等问题。导致的鉴定结果不准确等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用


[0001]本专利技术属于农林科学领域，具体涉及一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用。

技术介绍

[0002]难培养病菌为侵染植物韧皮部输导组织且目前无法分离培养的病原菌。其中，柑橘黄龙病菌(CandidatusLiberibacter，Ca.L)属于α
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变型菌纲(α
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Proteobacteria)韧皮部杆菌属(Liberibacter)，是一种韧皮部专性寄生的革兰氏阴性细菌，其引起的柑橘黄龙病是世界范围内严重危害柑橘生产的重要病害之一。柑橘黄龙病菌可以感染所有柑橘品种和柑橘杂交种等芸香科植物，在柑橘生长周期的各个阶段都能被其感染，并最终导致树木死亡。泡桐丛枝病为类菌原体，症状是腋芽和不定芽大量丛生，节间变短，叶片黄化变小，产生明脉，冬季小枝不脱落呈鸟巢状，严重的病株当年枯死，轻的的病株几年后也会死掉。枣疯病病原为枣植原体，分布在韧皮部筛管细胞中，感病枣树发育滞缓，枝叶萎缩，常导致整株或成片死亡。
[0003]植物对于输导组织难培养病菌的鉴定一直比较困难，其寄主植物(寄主植物是指寄生物或者病原物赖以生存的植物)抗性鉴定目前多采用传播媒介(带病昆虫或接穗等)间接接种的方法进行。存在接种效率低、接种源病菌不一致等问题，导致抗性鉴定工作误差较大，鉴定结果不准确等。
[0004]鉴于此，本专利技术提供一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种难培养病菌的抗病性鉴定方法及其应用。目的是有效解决由于难培养病菌采用传播媒介的接种率低、接种源病菌不一致等导致的抗性鉴定工作误差较大，导致的鉴定结果不准确等问题。
[0006]本专利技术为了解决上述技术问题，本专利技术的第一个目的是提供一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，包括如下步骤：
[0007]步骤1：毒源植物、待鉴定植物及指示植物的培养筛选
[0008]将培养的毒源植物、待鉴定植物及指示植物，通过PCR方法进行难培养病原菌检测，筛选得到仅含有难培养病原菌的毒源植物、不含有难培养病原菌的待鉴定植物和指示植物；
[0009]步骤2：靠接传毒
[0010]对筛选到的仅含有难培养病原菌的毒源植物、不含有难培养病原菌的待鉴定植物和指示植物进行位置布局，利用靠接方法进行传毒；
[0011]步骤3：观察检测
[0012]根据难培养病原菌发病周期，观察步骤2中待鉴定植物和指示植物的发病表型，且通过PCR方法检测难培养病原菌的定殖、繁殖情况；
[0013]步骤4：抗病性及病菌运转速度评价
[0014]根据步骤3的观察检测结果，统计分析待鉴定植物的抗病性及病菌运转速度。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过毒源植物与待鉴定植物进行位置布局，以指示植(发病速度较快，感病症状典型、明显的植物类型或作物品种)为对照，在维持毒源植物生长的基础上，通过统计学试验设计，科学的进行待鉴定植物与指示植物的布局分布，有效解决了接种率低、接种源病菌不一致等导致的抗性鉴定工作误差较大，导致的鉴定结果不准确等问题。
[0016]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
[0017]进一步，步骤2中所述的位置布局包括并联式靠接鉴定布局或串联式靠接鉴定布局。
[0018]采用上述进一步方案的有益效果是：本专利技术通过毒源植物与待鉴定植物的串、并联靠接，以指示植为对照，在维持毒源植物生长的基础上，通过统计学试验设计，高效、准确的进行抗病性及病菌运转速度评价的抗性鉴定工作。
[0019]进一步，所述并联式靠接鉴定布局为：毒源植物+待鉴植物+指示植物，或者毒源植物+指示植物+待鉴植物+指示植物，其中+为靠接；所述串联式靠接鉴定布局为先将X个指示植物+待鉴定植物砧木+待鉴定植物接穗+X个指示植物布局，后毒源植物再靠接在待鉴定植物砧木或待鉴定植物接穗上，所述X取值为1至5之间的整数，其中+为靠接。
[0020]采用上述进一步方案的有益效果是：通过并联式靠接鉴定布局中毒源植物+待鉴植物+指示植物，进行待鉴定植物抗性的初选；通过并联式靠接鉴定布局中的毒源植物+指示植物+待鉴植物+指示植物，用于对待鉴定植物体内病原菌病菌运转速度评价；所述串联式靠接鉴定布局对待鉴定植物的抗性进一步的筛选。
[0021]进一步，所述难培养病原菌包括柑橘黄龙病菌、泡桐丛枝病菌或枣疯病菌。柑橘黄龙病菌、泡桐丛枝病菌或枣疯病菌等侵染植物韧皮部且目前无法分离培养的病原菌。
[0022]进一步，所述待鉴定植物包括该病菌寄主植物种属(或近缘种属)中未知抗感特性的植物种类或品种；所述指示植物包括已知的该病菌易感病且症状明显的植物种类或品种，如柑橘黄龙病抗性鉴定中的椪柑。
[0023]进一步，步骤1中所述毒源植物的具体培养方法：
[0024](1)采集发病植物枝条，通过PCR方法检测发病植物枝条携带目标难培养病原菌情况，保留只携带目标难培养病原菌的发病植物枝条，得到毒源枝条；
[0025](2)对得到的毒源枝条利用嫁接或扦插方法扩繁为带病苗木，再次通过PCR方法检测待病苗木携带目标难培养病原菌，只保留携带目标难培养病原菌的植株，再培养带病苗木至侧枝3
‑
5条，得到毒源植物。
[0026]进一步，步骤1中所述待鉴定植物的培养方法为：
[0027](1)采集待鉴定植物枝条，通过PCR方法检测待鉴定植物枝条携带目标难培养病原菌情况，将携带目标难培养病原菌的待鉴定植物枝条全部淘汰，得到鉴定植物枝条；
[0028](2)对筛选到的鉴定植物枝条利用嫁接或扦插方法扩繁为待鉴定苗木，再培养侧枝至3
‑
5条，得到待鉴定植物。
[0029]进一步，步骤1中所述指示植物的培养方法为：
[0030](1)采集指示植物枝条，通过PCR方法检测指示植物枝条携带目标难培养病原菌情
况，将携带目标难培养病原菌的指示植物枝条全部淘汰，得到鉴定植物枝条；
[0031](2)对筛选到的鉴定植物枝条利用嫁接或扦插方法扩繁为待鉴定苗木，再培养侧枝至3
‑
5条，得到指示植物。
[0032]进一步，所述难培养病原菌检测采用PCR方法的引物的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；或SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5。
[0033]本专利技术的第二个目的是提供一种难培养病菌的抗病性鉴定方法的应用，其特征在于，用于待鉴定植物对难培养病菌的抗性鉴定。
[0034]进一步，所述待鉴定植物为柑橘、泡桐或枣树。
[0035]进一步，所述柑橘包括柑类、橘类、橙类、柚类、金柑类、枸橼类、大翼橙类、近缘属植物、远缘属植物等(如：脐橙、沙田柚、沃柑、黄皮、金柑)。
附图说明
[0036]图1为本专利技术的并联式靠接抗病鉴定方式布局图；
[0037]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：毒源植物、待鉴定植物及指示植物的培养筛选将培养的毒源植物、待鉴定植物及指示植物，通过PCR方法进行难培养病原菌检测，筛选得到仅含有难培养病原菌的毒源植物、不含有难培养病原菌的待鉴定植物和指示植物；步骤2：靠接传毒对筛选到的仅含有难培养病原菌的毒源植物、不含有难培养病原菌的待鉴定植物和指示植物进行位置布局，利用靠接方法进行传毒；步骤3：观察检测根据难培养病原菌发病周期，观察步骤2中待鉴定植物和指示植物的发病表型，且通过PCR方法检测难培养病原菌的定殖、繁殖情况；步骤4：抗病性及病菌运转速度评价根据步骤3的观察检测结果，统计分析待鉴定植物的抗病性及病菌运转速度。2.根据权利要求1所述一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，其特征在于，步骤2中所述的位置布局包括并联式靠接鉴定布局或串联式靠接鉴定布局。3.根据权利要求2所述一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，其特征在于，所述并联式靠接鉴定布局为：毒源植物+待鉴植物+指示植物，或者毒源植物+指示植物+待鉴植物+指示植物，其中+为靠接；所述串联式靠接鉴定布局为先将X个指示植物+待鉴定植物砧木+待鉴定植物接穗+X个指示植物布局，然后将毒源植物靠接在待鉴定植物砧木或待鉴定植物接穗上，所述X取值为1至5之间的整数，其中+为靠接。4.根据权利要求1所述一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，其特征在于，所述难培养病原菌包括柑橘黄龙病菌、泡桐丛枝病菌或枣疯病菌。5.根据权利要求1所述一种难培养病菌的抗病性鉴定方法，其特征在于，步骤1中所述毒源植物的具体培养方法：(1)采集发病植物枝条，通过PCR方法检测发病植物枝条携带目标难培养病原菌情况，保留只携带目标难培养病原菌的发病植物枝条，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冰浩，丁萍，葛捷，区善汉，刘升球，郭小强，
申请(专利权)人：广西特色作物研究院，
类型：发明
国别省市：