一种基于CRISPR技术检测甘薯褪绿矮化病毒的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于CRISPR技术检测甘薯褪绿矮化病毒或甘薯病毒病的方法，所述方法包括利用gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器进行检测的步骤；本发明专利技术通过对gRNA的筛选和优化，提高了检测效率，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR技术检测甘薯褪绿矮化病毒的方法


[0001]本专利技术涉及核酸检测领域，尤其涉及基于CRISPR技术检测甘薯褪绿矮化病毒的方法、系统和试剂盒。

技术介绍

[0002]甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus，SPCSV)属于长线形病毒科毛形病毒属成员。甘薯褪绿矮化病毒是危害甘薯的主要病毒之一，主要由烟粉虱传播，特别重要的是，甘薯褪绿矮化病毒可与甘薯羽状斑驳病毒协生共侵染甘薯引起甘薯病毒病(sweet potato virus disease，SPVD)。甘薯病毒病是甘薯上是最严重的病毒病害之一，通常可使甘薯减产50％
‑
98％，甚至绝收。
[0003]甘薯褪绿矮化病毒的检测方法主要有：目测法、指示植物检测法、酶联免疫吸附法、免疫电镜法、核酸杂交法、RT
‑
PCR法。
[0004]本专利技术提供了一种新型的检测甘薯褪绿矮化病毒的方法，该方法是基于CRISPR技术，尤其是基于V型Cas酶的trans活性，提供的一种特异性高、检测灵敏本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测甘薯褪绿矮化病毒的gRNA，所述gRNA包括与V型Cas蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述靶核酸为来源于甘薯褪绿矮化病毒的核酸；其特征在于，所述与靶核酸杂交的导向序列选自下组任意一种或其组合：(1)所述与靶核酸杂交的导向序列含有20
‑
30个碱基，并且与SEQ ID No.1所示的序列或其反向互补序列杂交，并且所述导向序列包含SEQ ID No.4
‑
7任一所示的序列；(2)所述与靶核酸杂交的导向序列包含SEQ ID No.4
‑
7任一所示的序列，并且在SEQ ID No.4
‑
7任一所示的序列的3
’
端还包括1
‑
10个碱基，并且，所述与靶核酸杂交的导向序列与SEQ ID No.1所示的序列或其反向互补序列杂交；(3)所述与靶核酸杂交的导向序列与SEQ ID No.4
‑
7任一所示的序列相比，在SEQ ID No.4
‑
7任一所示的序列的3
’
端连续缺失1
‑
5个碱基；(4)所述与靶核酸杂交的导向序列如SEQ ID No.4
‑
7任一所示。2.一种检测/诊断甘薯褪绿矮化病毒或甘薯病毒病的方法，所述方法包括将待测核酸与V型Cas蛋白、权利要求1所述的gRNA和单链核酸检测器接触；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测/诊断甘薯褪绿矮化病毒或甘薯病毒病。3.根基权利要求2所述的方法，其特征在于，所述V型Cas蛋白选自以下I
‑
II任意一组：I、所述V型Cas蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示；II、所述V型Cas蛋白的氨基酸序列与...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽梅，赵莹，
申请(专利权)人：山东舜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：