一种快速检测HPV抗原及抗体的试纸制造技术

本发明专利技术公开了一种快速检测HPV抗原及抗体的试纸。该试纸包括沿层析方向依次设置的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫，胶体金标记垫含有抗HPV L1抗原的抗体

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测HPV抗原及抗体的试纸


[0001]本专利技术属于免疫分析检测试剂领域，涉及一种既可用于HPV抗原也可用于HPV抗体的快速检测的试纸条(卡)。

技术介绍

[0002]宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，在女性肿瘤中的发病率位居第二，全世界每年的新发病例约为47万人，并导致30万人死亡，是仅次于乳腺癌引起女性死亡的重要原因。宫颈癌的发病病因与多种因素有关，其中以人类乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV)的感染为最重要的因素，据报道99.8％的宫颈癌合并HPV感染，而HPV阴性者几乎不发生宫颈癌。目前对HPV感染尚无有效的治疗措施，预防HPV感染及对已感染人群进行定期检测是降低宫颈癌发病率的主要方式。
[0003]HPV属乳头状病毒科，是一种噬黏膜和皮肤的双链闭合环状DNA病毒。到目前为止，已报道发现的HPV有120多种，其中与人类生殖道感染有关的为40多种，根据其致癌性分为高危型(致癌型)HPV、可能致癌性和低危型HPV，高危型HPV中以HPV16、HPV18、HPV31、HPV33与宫颈癌的发病关系最为密切，在宫颈癌中HPV16、HPV18这两种类型的HPV的检出率达70％以上，HPV16多见于宫颈鳞癌，而HPV18多见于宫颈腺癌；低危型HPV多在湿疣等良性病变中发现。
[0004]对HPV的检测多集中于组织病理学或HPV病毒的DNA检测，这些方法具有耗费时间长、需要专业的技术人员和仪器设备、操作程序复杂、成本高、不易推广等局限性。有文献报道使用HPV16E6蛋白的单抗和多抗制备胶体金诊断试纸条(胡仁建.高危型人乳头瘤病毒16型免疫胶体金诊断试纸条的研制.重庆理工大学,2009)，即在试纸条中使用鼠抗HPV16E6单抗作为金标抗体包被于结合垫，兔抗HPV16E6多抗包被于检测线。但这两种抗体均以HPV16E6作为抗原，抗原抗体结合位点为同一抗原决定簇，因此结合了金标抗体的样本HPV抗原与检测线上兔抗HPV16E6多抗的结合能力有限，使试纸条的检测灵敏度受到一定限制。中国专利CN108761091A中的双抗夹心法快速检测HPV抗体的试纸条(卡)采用HPV的主衣壳蛋白，即HPV L1为抗原，同时采用抗人IgG抗体为抗原，从而实现了对样本中的HPV L1 IgG抗体的灵敏、准确的检测。虽然HPV抗原与血液或血清中的HPV抗体都是体外诊断HPV病毒感染的标志物，但该试纸条(卡)并不能检测宫颈细胞的HPV抗原。故亟待提出一种具有方便快捷、成本低廉、简单可靠、容易观察区别、适合家庭自检、容易推广优点的HPV高危型病毒快速检测试纸。
[0005]目前尚未见到以免疫竞争技术为基础快速检测HPV病毒(病毒抗原及抗体)的试纸的报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种快速检测HPV抗原及抗体的试纸，其使用方便快捷、结果准确可靠，且对HPV高危型病毒的检测效率高。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0008]一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，该试纸包括沿层析方向依次设置的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫，所述检测反应区包括检测带和质控线；胶体金标记垫包括抗HPV L1抗原的抗体
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胶体金标记物，检测带包括HPV L1抗原，质控线包括可以与HPV抗体(即抗HPV L1抗原的抗体)结合的抗体。
[0009]优选的，所述检测反应区还包括硝酸纤维素膜，所述与HPV抗体结合的抗体和HPV L1抗原包被在该硝酸纤维素膜上。
[0010]优选的，所述胶体金标记垫还包括玻璃纤维膜或聚脂膜，所述抗HPV L1抗原的抗体
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胶体金标记物分散铺放并吸附在该玻璃纤维膜或聚脂膜上。
[0011]优选的，所述HPV L1抗原来源于HPV16或HPV18。
[0012]优选的，所述抗HPV L1抗原的抗体为鼠源、兔源、羊源、马源、骆驼源或豚鼠源抗HPV L1抗原的多克隆抗体中的一种或多种。
[0013]优选的，所述与HPV抗体结合的抗体是指能通过与HPV抗体(即抗HPV L1抗原的抗体)结合形成免疫复合物的抗体。
[0014]上述检测HPV抗原及HPV抗体的试纸的制备方法，包括以下步骤：
[0015]步骤1胶体金标记垫的制备
[0016]利用胶体金溶液对抗HPV L1抗原的抗体进行标记处理，得胶体金标记物(即抗HPV L1抗原的抗体
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胶体金标记物)溶液；将胶体金标记物溶液涂覆在玻璃纤维膜或聚脂膜上后干燥，备用；
[0017]步骤2检测反应区的制备
[0018]将HPV L1抗原溶液和可以与HPV抗体(即抗HPV L1抗原的抗体)结合的抗体的溶液分别涂覆在硝酸纤维素膜上的两个不同区域后进行干燥，得到检测带和质控线，备用；
[0019]步骤3样品垫的制备
[0020]将玻璃纤维膜或聚脂膜在含有阻断剂的处理液中浸渍后进行干燥，备用；或者玻璃纤维膜或聚脂膜不经浸渍和干燥，直接使用；经过阻断剂处理后所得样品垫，可以抑制非特异性结合，从而降低试纸的假阳性率。
[0021]步骤4将样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫依次安装在底板上，然后按试纸(例如试纸条、试纸卡)规格切割。
[0022]优选的，所述步骤1中，胶体金标记物溶液的制备方法具体包括以下步骤：将2～200mL胶体金溶液(粒径10～100nm)用0.03～0.3M的碳酸钾溶液调节pH到5.5～7.0，然后与50～100μg抗HPV L1抗原的抗体混匀，然后于18～30℃反应10～30分钟，然后在反应体系中加入BSA(牛血清白蛋白)至终浓度0.5％～1％(g/mL)，然后静置5～10分钟，然后于2～25℃、1000～12000rpm离心5～30分钟并收集上清液，将该上清液于2～25℃、5000～15000rpm离心5～60分钟并收集沉淀，将该沉淀溶于0.5～5mL含0.1％～10％(g/mL)BSA的PBS(pH6.0～7.5)中。
[0023]优选的，所述步骤1中，胶体金标记物溶液的涂覆条件为：将胶体金标记物溶液用含0.1％～10％(g/mL)BSA的PBS(pH 6.0～7.5)稀释1～2倍后按照40～80μL/cm2喷涂于玻璃纤维膜或聚脂膜上；干燥的条件为：35～40℃下18～24小时。
[0024]优选的，所述步骤2中，HPV L1抗原溶液、可以与HPV抗体结合的抗体的溶液的浓度
分别为0.5～4mg/mL，溶剂均为PBS(pH 6.0～7.5)；干燥的条件为：35～40℃下18～24小时。
[0025]一种HPV检测方法，利用上述步骤制备的试纸对待检样本进行检测，具体包括以下步骤：
[0026]步骤1样本处理
[0027]将血清或血浆用稀释液稀释1～100倍(稀释液为水、0.9％氯化钠溶液、磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液)后取50～150μL加到试纸的样品垫上(即进行加样)；或者，取全血样本2～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：该试纸包括沿层析方向依次设置的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区以及吸水垫，所述检测反应区包括检测带和质控线；胶体金标记垫包括抗HPV L1抗原的抗体
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胶体金标记物，检测带包括HPV L1抗原，质控线包括与HPV抗体结合的抗体。2.根据权利要求1所述一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：所述检测反应区还包括硝酸纤维素膜，所述与HPV抗体结合的抗体、HPV L1抗原分别包被在该硝酸纤维素膜上。3.根据权利要求1所述一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：所述胶体金标记垫还包括玻璃纤维膜或聚脂膜，所述抗HPV L1抗原的抗体
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胶体金标记物分散铺放并吸附在该玻璃纤维膜或聚脂膜上。4.根据权利要求1所述一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：所述HPV L1抗原来源于HPV16或HPV18。5.根据权利要求1所述一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：所述抗HPV L1抗原的抗体为鼠源、兔源、羊源、马源、骆驼源或豚鼠源抗HPV L1抗原的多克隆抗体中的一种或多种。6.根据权利要求1所述一种检测HPV抗原及HPV抗体的试纸，其特征在于：所述与HPV抗体结合的抗体是指能通过与HPV抗体结合形成免疫复合物的抗体。7.一种如权利要求1所述的检测HPV抗原及HPV抗体的试纸的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1胶体金标记垫的制备利用胶体金溶液对抗HPV L1抗原的抗体进行标记处理，得胶体金标记物溶液；将胶体金标记物溶液涂覆在玻璃纤维膜或聚脂膜上后干燥...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦湫红，张晓琴，李爱红，杨建刚，李晓杰，任建平，
申请(专利权)人：陕西医药控股医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：