一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用。免疫层析试纸盒包括试纸条和含有0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%PEG、0.05~0.15w/v%表面活性剂、0.05~0.15w/v%生物防腐剂和0.15~0.25w/v%硫化钠的样品稀释液；试纸条的样品垫经含有0.45~0.55w/v%BSA、0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%PEG、0.8~1.5w/v%HBR、0.8~1.5w/v%树脂和0.45~0.55w/v%RBC的样品垫处理液处理。本发明专利技术能有效地封闭粪便中的干扰因素，消除免疫层析检测中动物粪便样本非特异性干扰，提升检测灵敏性和准确度。提升检测灵敏性和准确度。提升检测灵敏性和准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于免疫层析
，涉及一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用，尤其涉及一种用于消除动物粪便样本非特异性干扰的免疫层析试纸盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]动物体外诊断试剂需要用到粪便样本的项目有猫瘟病毒（猫泛白细胞减少症病毒）等，但是动物粪便成分中粪胆色素、尿胆素、重金属、细菌蛋白、脱落细胞蛋白等成分会影响到实验检测的结果。以细菌蛋白和脱落细胞蛋白为例，动物粪便中含有大量且多种细菌，比如猫的粪便里细菌有巴东氏杆菌、沙门氏菌病，还可能携带一些寄生虫，如弓形虫、钩虫等，这些生物含有的蛋白质（比如细菌蛋白、脱落细胞蛋白等）很多会作为干扰性抗体，交联捕获抗体和检测抗体，导致分析中的高读数，从而导致假阳性结果等问题。
[0003]免疫层析技术中对于样本的处理方法有：添加样本稀释液；将阻断剂包被于NC膜上形成一条阻断线；在样品垫的处理配方中添加阻断剂等。市面上大多数样本稀释液成分为糖、盐、封闭剂等；处理样品垫的配方为封闭剂、表面活性剂、缓冲液等，例如处理样品垫的现有技术常规配方为BSA、吐温、PVP
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K30等，置于37℃烘干15h，取出后与反应膜和金标垫组装；这种常规技术不能实现宠物体外诊断检测粪便样本的假阳性问题。宠物粪便中的干扰成分为：尿胆素、重金属、细菌蛋白、脱落细胞蛋白等，原有的技术并不能很好的封闭以上干扰物质，在加样检测时会导致干扰物质与反应膜上包被抗体结合，产生假阳性问题。
[0004]综上，非常有必要提供一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术提供了一种免疫层析试纸盒及其制备方法和应用。本专利技术中的免疫层析试纸盒通过采用合适配方的样品稀释液和样品垫处理液相配合，可以有效地封闭粪便中的干扰因素，可以消除免疫层析检测中动物粪便样本非特异性干扰，有效提升检测的灵敏性和准确度。
[0006]本专利技术在第一方面提供了一种免疫层析试纸盒，所述免疫层析试纸盒包括免疫层析试纸条和样品稀释液；所述样品稀释液含有0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%聚乙二醇、0.05~0.15w/v%表面活性剂、0.05~0.15w/v%生物防腐剂和0.15~0.25w/v%硫化钠；所述免疫层析试纸条的样品垫经过样品垫处理液处理；所述样品垫处理液含有0.45~0.55w/v%牛血清白蛋白、0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%聚乙二醇、0.8~1.5w/v%异嗜性抗体阻断剂、0.8~1.5w/v%树脂和0.45~0.55w/v%兔抗人多克隆抗体。
[0007]优选地，所述样品垫处理液中含有的牛血清白蛋白、吐温、聚乙二醇、异嗜性抗体阻断剂、树脂和兔抗人多克隆抗体的质量比为（4.8~5.2）：（1.5~2.5）：（0.8~1.2）：（9~12）：（9~12）：（5~5.2）。
[0008]优选地，所述样品垫处理液中含有的牛血清白蛋白、吐温、聚乙二醇、异嗜性抗体
阻断剂、树脂和兔抗人多克隆抗体的质量比为5:2:1:10:10:5；和/或所述样品稀释液含有0.2w/v%硫化钠。
[0009]优选地，所述样品稀释液和/或所述样品垫处理液中含有的吐温为吐温20；所述样品稀释液和/或所述样品垫处理液中含有的聚乙二醇为聚乙二醇20000；所述表面活性剂为乙二胺四乙酸；所述生物防腐剂为液体生物防腐剂Proclin300；和/或所述树脂为聚甲基丙烯酸羟乙酯。
[0010]优选地，所述样品稀释液采用浓度为0.01~0.03mol/L、pH为7.4的PB缓冲液作为溶剂配制而成；和/或所述样品垫处理液采用浓度为0.08~0.12mol/L、pH为7.4的Tris
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HCl缓冲液作为溶剂配制而成。
[0011]优选地，所述免疫层析试纸条为胶体金免疫层析试纸条，所述胶体金免疫层析试纸条包括底板和设置在所述底板上的胶条；所述胶条包括顺次搭接的样品垫、胶体金标记的结合垫、包被有抗体的反应膜和吸水垫；所述反应膜包括检测线T线和质控线C线。
[0012]本专利技术在第二方面提供了一种本专利技术在第一方面所述的免疫层析试纸盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）配制所述样品稀释液；（2）配制所述样品垫处理液；（3）提供样品垫，然后将样品垫在所述样品垫处理液中进行浸泡，再经烘干，得到经过样品垫处理液处理的样品垫；（4）将经过样品垫处理液处理的样品垫与结合垫、反应膜、吸水垫以及底板组装形成免疫层析试纸条，由此得到包括免疫层析试纸条和样品稀释液的免疫层析试纸盒。
[0013]优选地，进行浸泡的时间为2~8h；所述烘干为在37℃烘干15~20h；提供的所述样品垫采用的材质为玻璃纤维；所述反应膜为硝酸纤维素膜；和/或所述底板为聚氯乙烯底板。
[0014]本专利技术在第三方面提供了本专利技术在第一方面所述的免疫层析试纸盒在消除免疫层析检测中动物粪便样本非特异性干扰中的应用。
[0015]本专利技术在第四方面提供了本专利技术在第一方面所述的免疫层析试纸盒在检测猫泛白细胞减少症病毒中的应用。
[0016]本专利技术与现有技术相比至少具有如下有益效果：（1）动物粪便成分中的粪胆色素、尿胆素、重金属、细菌蛋白、脱落细胞蛋白等成分会影响到实验检测的结果；现有技术不能很好地解决这种非特异性吸附造成的假阳性结果；本专利技术中的免疫层析试纸盒通过采用合适配方的样品稀释液和样品垫处理液相配合，特别是其中的Na2S、树脂、HBR、RBC等成分缺一不可，如此才可以有效地封闭粪便中的干扰因素如粪胆色素、尿胆素、重金属、细菌蛋白、脱落细胞蛋白等，可以消除免疫层析检测中动物粪便样本非特异性干扰，有效提升检测的灵敏性和准确度，使得样品符合率可以高达90%以上。
[0017]（2）本专利技术在一些优选实施方案中发现，所述样品稀释液含有0.19~0.22w/v%硫化钠与所述样品垫处理液中含有的牛血清白蛋白、吐温、聚乙二醇、异嗜性抗体阻断剂、树脂和兔抗人多克隆抗体的质量比为（4.8~5.2）：（1.5~2.5）：（0.8~1.2）：（9~12）：（9~12）：（5~5.2）相配合，如此才能最大可能地封闭粪便中的干扰因素如粪胆色素、尿胆素、重金属、细菌蛋白等，更加明显地消除免疫层析检测中动物粪便样本非特异性干扰，有效提升检测的
灵敏性和准确度，能够使得样品符合率达到95%以上。
附图说明
[0018]图1是本专利技术一些具体实施方式中制备免疫层析试纸盒的流程图。
[0019]图2是以10份对比例1中的免疫层析试纸盒测试10份阴性样本，10条免疫层析试纸条显示的假阳性结果图。
[0020]图3是以10份对比例1中的免疫层析试纸盒测试10份阳性样本，10条免疫层析试纸条显示的阳性结果图。
[0021]图4是以10份对比例2中的免疫层析试纸盒测试10份阴性样本，10条免疫层析试纸条显示的假阳性结果图。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫层析试纸盒，其特征在于：所述免疫层析试纸盒包括免疫层析试纸条和样品稀释液；所述样品稀释液含有0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%聚乙二醇、0.05~0.15w/v%表面活性剂、0.05~0.15w/v%生物防腐剂和0.15~0.25w/v%硫化钠；所述免疫层析试纸条的样品垫经过样品垫处理液处理；所述样品垫处理液含有0.45~0.55w/v%牛血清白蛋白、0.15~0.25w/v%吐温、0.05~0.15w/v%聚乙二醇、0.8~1.5w/v%异嗜性抗体阻断剂、0.8~1.5w/v%树脂和0.45~0.55w/v%兔抗人多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸盒，其特征在于：所述样品垫处理液中含有的牛血清白蛋白、吐温、聚乙二醇、异嗜性抗体阻断剂、树脂和兔抗人多克隆抗体的质量比为（4.8~5.2）：（1.5~2.5）：（0.8~1.2）：（9~12）：（9~12）：（5~5.2）。3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸盒，其特征在于：所述样品垫处理液中含有的牛血清白蛋白、吐温、聚乙二醇、异嗜性抗体阻断剂、树脂和兔抗人多克隆抗体的质量比为5:2:1:10:10:5；和/或所述样品稀释液含有0.2w/v%硫化钠。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫层析试纸盒，其特征在于：所述样品稀释液和/或所述样品垫处理液中含有的吐温为吐温20；所述样品稀释液和/或所述样品垫处理液中含有的聚乙二醇为聚乙二醇20000；所述表面活性剂为乙二胺四乙酸；所述生物防腐剂为液体生物防腐剂Proclin300；和/或所述树脂为聚甲基丙烯酸羟乙酯。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈勇，胡成博，宋克清，刘蕊，曾勇博，杨志豪，
申请(专利权)人：北京凡知医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：