3-羟基苯甲酸2-羟化酶的基因、重组表达载体、菌株及羟基苯甲酸的羟化方法技术

本发明专利技术公开一种3

【技术实现步骤摘要】
3
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羟基苯甲酸2
‑
羟化酶的基因、重组表达载体、菌株及羟基苯甲酸的羟化方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别涉及一种3
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羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶的基因、重组表达载体、菌株及羟基苯甲酸的羟化方法。

技术介绍

[0002]芳香族化合物的选择性羟基化是合成化学中最具挑战性的反应之一，特别是羟基化芳香族化合物被用作药物的前体，受到了广泛关注。羟基苯甲酸是动物、植物和微生物体内代谢中常见的化合物，它也被用作合成树脂和药物的中间体，以及缓蚀剂。羟基苯甲酸的羟化包括3
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羟基苯甲酸 6
‑
羟化酶催化的6
’‑
位羟化，3
‑
羟基苯甲酸 4
‑
羟化酶催化的4
’‑
位羟化和3
‑
羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶催化的2
’‑
位羟化。而羟基苯甲酸2
‑
羟化酶仅检测到了酶活性，缺乏编码基因和蛋白序列，这也阻碍了羟基苯甲酸2
‑
羟化酶的应用。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的是提出一种3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因、载体、重组表达菌株及羟基苯甲酸的羟化方法，旨在高效催化羟基苯甲酸羟化。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提出一种3
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羟基苯甲酸 2
‑/>羟化酶的基因，所述3
‑
羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0005]本专利技术还提出一种重组表达载体，包括如上所述的3
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羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶的基因。
[0006]本专利技术还提出一种重组表达菌株，包括如上所述的3
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羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶的基因。
[0007]优选地，所述重组表达菌株的宿主细胞为大肠杆菌。
[0008]本专利技术还提出一种如上所述的3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因的克隆方法，包括如下步骤：
[0009]从环境土壤样品中筛选3
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羟基苯甲酸和2,3
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二羟基苯甲酸的利用菌株；
[0010]将所述菌株进行基因组测序，获得基因组信息；
[0011]基因组注释，获得3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因。
[0012]本专利技术还提出一种如上所述的3
‑
羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因的表达方法，包括如下步骤：
[0013]将3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因克隆到表达载体中，得重组表达载体；
[0014]将所述重组表达载体转入宿主细胞中，得重组表达菌株；
[0015]培养重组表达菌株，从培养物中获得3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶。
[0016]本专利技术还提出一种羟基苯甲酸的羟化方法，包括以下步骤：采用如上所述的3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因表达出的3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶，催化羟基苯甲酸羟化。
[0017]本专利技术提供的3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因，能够编码得到3
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羟基苯甲酸 2
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羟
化酶，获得的3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶可以有效地催化3
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羟基苯甲酸的2
’‑
位羟化生成2,3
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二羟基苯甲酸，从而实现芳香族化合物的选择性羟基化。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0019]图1为利用引物T7er对本专利技术实施例2构建的pET28a
‑
mhboA重组表达载体的测序验证图；
[0020]图2为利用引物T7对本专利技术实施例2构建的pET28a
‑
mhboA重组表达载体的测序验证图；
[0021]图3为本专利技术实施例5中3
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羟基苯甲酸 2
‑
羟化酶催化产物的LC
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MS鉴定分析图。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0023]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]芳香族化合物的选择性羟基化是合成化学中最具挑战性的反应之一，特别是羟基化芳香族化合物被用作药物的前体，受到了广泛关注。羟基苯甲酸是动物、植物和微生物体内代谢中常见的化合物，它也被用作合成树脂和药物的中间体，以及缓蚀剂。羟基苯甲酸的羟化包括3
‑
羟基苯甲酸 6
‑
羟化酶催化的6
’‑
位羟化，3
‑
羟基苯甲酸 4
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羟化酶催化的4
’‑
位羟化和3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶催化的2
’‑
位羟化。而羟基苯甲酸2
‑
羟化酶仅检测到了酶活性，缺乏编码基因和蛋白序列，这也阻碍了羟基苯甲酸2
‑
羟化酶的应用。
[0025]鉴于此，本专利技术提出一种3
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羟基苯甲酸 2
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羟化酶的基因，旨在高效催化羟基苯甲酸羟化。
[0026]本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种3
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羟基苯甲酸2
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羟化酶的基因，其特征在于，所述3
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羟基苯甲酸2
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羟化酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种重组表达载体，其特征在于，包括如权利要求1所述的3
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羟基苯甲酸2
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羟化酶的基因。3.一种重组表达菌株，其特征在于，包括如权利要求1所述的3
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羟基苯甲酸2
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羟化酶的基因。4.如权利要求3所述的重组表达菌株，其特征在于，所述重组表达菌株的宿主细胞为大肠杆菌。5.一种如权利要求1所述的3

【专利技术属性】
技术研发人员：晁红军，邹磊，姚霓红，肖颖，陈静，吴菁，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：