一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基基转移酶检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，涉及临床体外检测试剂技术领域。所述检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中所述试剂R1的成分如下：HEPES缓冲液、丙氨酸、聚氧乙烯月桂醚、防腐剂；试剂R2的成分和含量如下：HEPES缓冲液、α

【技术实现步骤摘要】
一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基基转移酶检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及临床体外检测
，具体涉及一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒。

技术介绍

[0002]丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,简称ALT)是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶，可以加快氨基酸在体内的转化作用，广泛存在于人体各种组织、器官、肌肉、骨骼中，以肝脏细胞的细胞浆最多。血清中ALT的正常含量参考值是：男性9
‑
51U/L，女性8
‑
41U/L。当人体各组织器官活动或病变时，就会把其中的ALT释放到血液中，使ALT的含量增加。例如，肝脏发炎时，转氨酶就会从肝细胞释放到血液中，肝脏有病，血清转氨酶一定增高，当肝细胞有千分之一炎症时，血清转氨酶含量就会增高一倍以上，因此，血清转氨酶数量是肝脏病变程度的重要指标。
[0003]丙氨酸氨基转移酶主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清1000
‑
3000倍。只要有1％的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。因此，丙氨酸氨基转移酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。如果丙氨酸氨基转移酶血清值超过正常上限的2
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3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。但是必须排除嗜酒、化学药物中毒等对肝脏的损害；接触化学物质如四氟化碳、某些重金属、砒霜等可引起的中毒性肝炎及生理状态下，如过度劳累、剧烈运动(乳酸在体内大量生成、积累，使机体相对缺氧及低血糖，致使肝细胞膜通透性增加，引起转氨酶升高)月经期时等都可使转氨酶暂时性升高。
[0004]丙氨酸氨基转移酶升高要根据相关检查、结合病史、症状、体征等来综合判断。当乙肝患者丙氨酸氨基转移酶升高，到正常值上限的2倍以上，就应该进行抗病毒治疗。转氨酶水平越高，说明患者体内的免疫功能越活跃，抗毒治疗的效果也就越好。此时就是乙肝抗毒治疗最佳时期。
[0005]L
‑
丙氨酸和α
‑
酣戊二酸在ALT的作用下产生丙酣酸和L
‑
谷氨酸，丙酣酸与NADH和H
+
在LDH的作用下产生NAD
+
。340nm波长下丙氨酸氨基转移酶的生成速度与NADH的消耗速度成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的丙氨酸氨基转移酶检测试剂重复性不好，从而造成准确度差进而导致浪费试剂的不良后果。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，该试剂盒采用速率法，可以有效检测丙氨酸氨基转移酶的活性，具有稳定性好、分析灵敏度高、准确度高、重复性好等优点。
[0007]本专利技术的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体技术方案如下：
[0008]本专利技术提供一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，由试剂R1和试剂R2组成，其中：
[0009]所述试剂R1的成分和含量如下：
[0010][0011]试剂R2的成分和含量如下：
[0012][0013][0014]进一步的，所述HEPES缓冲液的PH值为7.5
‑
8.5。
[0015]进一步的，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝4:1。
[0016]进一步的，所述防腐剂为山梨酸、叠氮钠中的一种或两种。
[0017]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0018][0019]试剂R2的成分和含量如下：
[0020][0021]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0022][0023]试剂R2的成分和含量如下：
[0024][0025][0026]进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
[0027][0028]试剂R2的成分和含量如下：
[0029][0030]本专利技术所使用的校准品为英国朗道公司生产的校准品。
[0031]本专利技术所使用的质控品为英国朗道公司生产的质控品。
[0032]本专利技术的试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，利用速率法对丙氨酸进行测定，检测主波长为340nm，其具体使用方法如下：加入生理盐水、样本或校准品10μL，再加入200μL的R1试剂预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入50μL的R2试剂反应5min
后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
[0033]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0034]本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒通过速率法进行测定，使用HEPES缓冲液具有更好的缓冲作用，分别在试剂R1中添加适宜浓度的聚氧乙烯月桂醚使试剂具有更好的乳化作用，在试剂R2中添加适宜浓度的抗环血酸氧化酶使试剂具有更好的抗氧化的作用，增强了试剂的稳定性和灵敏度；添加适宜浓度的防腐剂，不会对试剂的准确度产生影响。
附图说明
[0035]图1为本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒中实施例1与对照组的相关性曲线图；
[0036]图2为本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒中实施例2与对照组的相关性曲线图；
[0037]图3为本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒中实施例3与对照组的相关性曲线图；
[0038]图4为本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒中实施例1、实施例2、实施例3与对照组的热稳定性曲线图；
[0039]图5为本专利技术的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒中实施例1、实施例2、实施例3与对照组的开瓶稳定性曲线图。
具体实施方式
[0040]为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
[0041]实施例1：
[0042]本实施例的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中：
[0043]试剂R1的成分和含量如下：
[0044][0045]试剂R2的成分和含量如下：
[0046][0047][0048]本实施例的检测方法：采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪(如日立7180全自动分析仪、迪瑞400、迈瑞800等)，利用速率法进行测定，具体操作如下：
[0049]加入生理盐水、样本或校准品10μL，再加入200μL的试剂R1预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入50μl的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
[0050]实施例2：
[0051]本实施例的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中：
[0052]试剂R1的成分和含量如下：
[0053本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，其中：所述试剂R1的成分和含量如下：试剂R2的成分和含量如下：2.根据权利要求1所述的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测剂盒，其特征在于，所述试剂缓冲液的PH值为7.5
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8.5。3.根据权利要求1所述的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝4:1。4.根据权利要求1所述的稳定、灵敏度高的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为山梨酸、叠氮钠中的一种或两种。5.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李林林，谢清华，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：