一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用。一种带状疱疹病毒gE蛋白，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。两种包含上述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，所述两种重组腺病毒分别以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L为骨架载体。经过体外，真核鉴定外源蛋白的表达，重组腺病毒Sad23L

【技术实现步骤摘要】
一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用。

技术介绍

[0002]带状疱疹（herpes zoster，HZ）是由水痘
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带状疱疹病毒（varicella
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zoster virus，VZV）感染所致。在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，高龄、免疫缺陷、使用免疫抑制剂等患者中多高发。引起带状分布的簇集水泡，并伴有明显神经痛，疼痛评级可达7级以上，属于重度疼痛，严重者甚至呼吸的起伏都能引起严重疼痛，被称为“会呼吸的痛”，极大的影响患者生活质量。
[0003]全球普通人群带状疱疹的发病率为（3
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5）／1,000人年，并以2.5%
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5.0%的速度逐年递增，带状疱疹发病率随着年龄增长而升高
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50岁后随着年龄增长VZV特异性细胞免疫功能逐渐降低，带状疱疹的发病率、住院率和病死率均逐渐升高。据估算我国50岁及以上人群每年新发带状疱疹病例在150万左右，并且随着人口老龄化带状疱疹负担日益增加，同时每年还有近300万人受带状疱疹后遗神经痛影响。由于带状疱疹目前为止治疗方法有限，且痊愈后的复发率达到1%
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6%，因此接种疫苗时预防带状疱疹的有效手段。目前国内仅进口GSK一家上市，本土的带状疱疹疫苗研发方向主要是减毒活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗 ，均还处于临床(前)研发阶段。因此安全有效的预防性带状疱疹疫苗的研制是非常有必要的。
[0004]复制缺陷型腺病毒载体具有可诱导产生广泛的体液和细胞免疫反应，宿主范围广，不整合基因组中，高水平表达外源蛋白等优点，被广泛的应用于疫苗的研制中。但是人群中预存的高水平的针对人腺病毒（Ad5/Ad2）的免疫反应限制了腺病毒载体的应用。目前带状疱疹疫苗的研发中基于病毒载体平台的路线，目前还处于临床前研究阶段。先前使用的Ad5型载体研发的新冠疫苗临床试验证实载体本身的预存免疫会影响疫苗的效果，因此开发安全有效低预存免疫的新型腺病毒载体带状疱疹疫苗是非常有必要的。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒。
[0006]本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：第一方面，一种带状疱疹病毒gE蛋白，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]第二方面，两种包含上述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，所述两种重组腺病毒分别以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L为骨架载体。
[0008]第三方面，基于第二方面提供的重组腺病毒的构建方法，具体地包括以下步骤：构建含有上述gE蛋白的核苷酸序列的穿梭质粒载体pShuttle2
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CMV
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gE；
将所述穿梭质粒载体pShuttle2
‑
CMV
‑
gE与Sad23L进行DNA组装，得黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒质粒；将所述穿梭质粒载体pShuttle2
‑
CMV
‑
gE与Ad49L进行DNA组装，得人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒质粒；分别将所述黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒质粒和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒病毒质粒酶切后转染宿主细胞，包装、扩增、纯化后分别得所述黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L
‑
gE和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L
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gE。
[0009]第四方面，上述重组腺病毒在制备防治带状疱疹病毒感染的疫苗中的应用。
[0010]作为上述应用的一种优选实施方式，所述带状疱疹病毒疫苗的剂型包括注射剂、滴鼻剂或喷雾剂。
[0011]第五方面，一种带状疱疹病毒疫苗，所述疫苗以上述重组腺病毒为有效成分。
[0012]作为上述带状疱疹病毒疫苗的一种优选实施方式，以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L
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gE为单独使用。
[0013]作为上述带状疱疹病毒疫苗的一种优选实施方式，以人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L
‑
gE为单独使用。
[0014]作为上述带状疱疹病毒疫苗的一种优选实施方式，以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L
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gE为初免组合物，以人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L
‑
gE为加强组合物。
[0015]作为上述带状疱疹病毒疫苗的一种优选实施方式，以人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L
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gE为初免组合物，以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L
‑
gE为加强组合物。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果本专利技术开发了两种带状疱疹的疫苗：Sad23L
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gE、Ad49L
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gE，基于构建的重组腺病毒载体Sad23L和 Ad49L，将带状疱疹病毒的gE蛋白基因分别克隆至载体Sad23L和Ad49L上。经过体外，真核鉴定外源蛋白的表达，重组腺病毒Sad23L
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gE和Ad49L
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gE的纯化，最后在小鼠上进行免疫评价，发现带状疱疹疫苗Sad23L
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gE或Ad49L
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gE单独免疫小鼠，均能够诱导产生特异性针对gE抗原的结合抗体，同时也产生了特异性细胞反应。持续监测以109PFU Sad23L
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gE和108PFU Ad49L
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gE免疫的小鼠，体液免疫监测到三个月（W15），Sad23L
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gE免疫的小鼠体内还存在较高滴度的结合抗体。细胞免疫监测到12周，两种疫苗免疫的小鼠均可检测到较高的细胞免疫反应水平，两种新型腺病毒载体带状疱疹疫苗带来了新的技术路线且具有长期强烈的免疫效果，对带状疱疹疫苗多种路线的研制提供了极大的参考价值。
附图说明
[0017]图1为成功构建复制缺陷型腺病毒载体Sad23L
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gE和Ad49L
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gE质粒的酶切示意图；图2A为复制缺陷型腺病毒载体Sad23L
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gE和Ad49L
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gE质粒与穿梭质粒pS
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gE在293A细胞内表达的鉴定图；图2B为包装重组腺病毒Sad23L
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gE和Ad49L
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gE的图;图2C为重组腺病毒Sad23L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种带状疱疹病毒gE蛋白，其特征在于，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.两种包含权利要求1所述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，其特征在于，所述两种重组腺病毒分别以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L为骨架载体。3.权利要求2所述重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：构建含有权利要求1所述gE蛋白的核苷酸序列的穿梭质粒载体pShuttle2
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CMV
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gE；将所述穿梭质粒载体pShuttle2
‑
CMV
‑
gE与Sad23L进行DNA组装，得黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒质粒；将所述穿梭质粒载体pShuttle2
‑
CMV
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gE与Ad49L进行DNA组装，得人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒质粒；分别将所述黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒质粒和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒病毒质粒酶切后转染宿主细胞，包装、扩增、纯化后分别得所述黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L
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gE和人稀有血清型腺病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：张攀丽，罗升学，王聪，邹鹏，李婷婷，黎诚耀，
申请(专利权)人：广州佰芮慷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：