【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗。
技术介绍
1、丙型肝炎病毒简称丙型肝炎病毒hcv，病毒分类属于正链rna病毒早期被认为是非原因a非b病毒型肝炎(non-a，non-bviralhepatitis)主要致病因素之一。根据中国《丙型肝炎防治指南（2022年版）》统计数据：我国目前丙肝感染者主要基因型为1b、2a、3b型，其中以1b型最多。因为hcv感染具有隐匿性，hcv感染初期通常没有临床表现，大部分hcv感染者并没有明显的症状和表现，大约有70％~80％hcv感染者会发展为持续性病毒血症，进一步发展为肝硬化和肝癌。丙型肝炎现在有两种治疗方案，长效干扰素联合利巴韦林治疗和口服的抗病毒药物治疗，这两种治疗方式费用都比较昂贵，且周期长。
2、可见hcv疫苗是预防丙肝最经济有效的医学手段，虽然目前hcv实验性疫苗研究主要包括蛋白疫苗、dna疫苗、多肽疫苗及dc疫苗等多方面，但到目前为止国内外尚无hcv疫苗供应，因为hcv是一种高度多样化的病毒，具有多种基因型和亚型，且该病毒具有高突变率，使其能够逃避宿主的免疫反应，一种疫苗难以覆盖所有基因型的丙肝病毒，这使得制造一种提供广泛保护作用且免疫力强的hcv疫苗变得困难。
3、如中国文献cn1943789a公布的抗丙肝病毒感染的dna疫苗，利用分子克隆的技术，构建一种表达hcv包膜糖蛋白e1的重组dna疫苗，在此基础上构建e1的六个n－糖基化突变体m1－m6，并选用其中n－糖基化突变体m2作为抗丙肝病毒感染的dna疫苗。然而，
技术实现思路
1、基于此，有必要针对上述技术问题，提供一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，采用了如下所述的技术方案：
3、本专利技术提出一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，所述疫苗为通过将四种丙肝病毒基因分别克隆到腺病毒载体sad23l和ad49l中形成八种单独的hcv疫苗构建体；所述四种丙肝病毒基因分别是e-1b、ns-1b、e-6a、ns-6a，分别具有如序列表seqid no.1-4所示的核苷酸序列。
4、进一步地，所述重组腺病毒的构件方法包括如下步骤：
5、（1）分别构件含有核苷酸序列如seq id no.1-4所示的e-1b、ns-1b、e-6a、ns-6a蛋白穿梭质粒载体；
6、（2）将所述穿梭质粒载体与sad23l和ad49l进行dna组装，得到重组腺病毒质粒；
7、（3）将步骤（2）所得重组腺病毒质粒分别进行酶切后转染宿主细胞，包装、扩增、纯化后得到sad23l和ad49l重组腺病毒。
8、进一步地，所述穿梭质粒载体是pshuttle2-cmv-ge。
9、进一步地，所得的sad23l腺病毒质粒为sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a。
10、进一步地，所得的ad49l腺病毒质粒为ad49l-e-1b、ad49l-e-6a、ad49l-ns-1b、ad49l-ns-6a。
11、进一步地，以sad23l腺病毒sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a的一种为初免组合物，以对应的同源ad49l腺病毒为加强组合物。
12、进一步地，以ad49l腺病毒ad49l-e-1b、ad49l-e-6a、ad49l-ns-1b、ad49l-ns-6a的一种为初免组合物，以对应的同源sad23l腺病毒为加强组合物。
13、进一步地，sad23l腺病毒sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a互为初免-加强组合物。
14、进一步地，ad49l腺病毒ad49l-e-1b、ad49l-e-6a、ad49l-ns-1b、ad49l-ns-6a互为初免-加强组合物。
15、进一步地，所述疫苗以上述重组腺病毒为有效成分。
16、与现有技术相比，本专利技术有以下有益效果：
17、本专利技术开发了两种新型腺病毒载体编码gt-1b和gt-6a的结构蛋白e（e1/e2）型和非结构蛋白ns（ns3/ns4/ns5）的二价基因型的八种新型腺病毒载体丙型肝炎疫苗：sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a、ad49l-e-1b、ad49l-e-6a、ad49l-ns-1b、ad49l-ns-6a，基于构建的重组腺病毒载体sad23l和 ad49l，将丙型肝炎病毒的蛋白基因e-1b、ns-1b、e-6a、ns-6a分别克隆至重组腺病毒载体sad23l和 ad49l中。经过体外，真核鉴定外源蛋白的表达，重组腺病毒纯化，最后在小鼠上进行免疫评价，发现本专利技术提出的8种丙型肝炎病毒疫苗均能够诱导产生特异性针对e-1b、ns-1b、e-6a、ns-6a抗原的结合抗体，同时也产生了特异性细胞反应，同时，经过实验证明，利用sad23l/ad49l载体hcv疫苗同源抗原进行初次-加强接种可以获得更高的hcv特异性抗体和t细胞反应；而用sad23l/ad49l载体hcv疫苗混合物进行初次-加强接种，则可以产生更高、更广泛的针对gt-1b和gt-6a基因型的hcv的交叉反应性体液和细胞免疫，极大推进了hcv疫苗的开发工作，也为hcv疫苗的研究方向提供了参考价值。
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1.一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述重组腺病毒的构件方法包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述穿梭质粒载体是pShuttle2-CMV-gE。
4.根据权利要求2所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述Sad23L腺病毒质粒分别为Sad23L-E-1b、Sad23L-E-6a、Sad23L-NS-1b、Sad23L-NS-6a。
5.根据权利要求4所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述Ad49L腺病毒质粒分别为Ad49L-E-1b、Ad49L-E-6a、Ad49L-NS-1b、Ad49L-NS-6a。
6.根据权利要求5所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，以Sad23L腺病毒Sad23L-E-1b、Sad23L-E-6a、Sad23L-N
7.根据权利要求5所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，以Ad49L腺病毒Ad49L-E-1b、Ad49L-E-6a、Ad49L-NS-1b、Ad49L-NS-6a的一种为初免组合物，以对应的同源Sad23L腺病毒为加强组合物。
8.根据权利要求5所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，以Sad23L腺病毒Sad23L-E-1b、Sad23L-E-6a、Sad23L-NS-1b、Sad23L-NS-6a的混合物为初免组合物，以Ad49L腺病毒Ad49L-E-1b、Ad49L-E-6a、Ad49L-NS-1b、Ad49L-NS-6a的混合物为加强组合物。
9.根据权利要求5所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，以Ad49L腺病毒Ad49L-E-1b、Ad49L-E-6a、Ad49L-NS-1b、Ad49L-NS-6a的混合物为初免组合物，以Sad23L腺病毒Sad23L-E-1b、Sad23L-E-6a、Sad23L-NS-1b、Sad23L-NS-6a的混合物为加强组合物。
10.根据权利要求1所述一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述疫苗以上述重组腺病毒为有效成分。
...【技术特征摘要】
1.一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述重组腺病毒的构件方法包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述穿梭质粒载体是pshuttle2-cmv-ge。
4.根据权利要求2所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述sad23l腺病毒质粒分别为sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a。
5.根据权利要求4所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，所述ad49l腺病毒质粒分别为ad49l-e-1b、ad49l-e-6a、ad49l-ns-1b、ad49l-ns-6a。
6.根据权利要求5所述的一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗，其特征在于，以sad23l腺病毒sad23l-e-1b、sad23l-e-6a、sad23l-ns-1b、sad23l-ns-6a的一种为初免组合物，以对应的同源ad49l腺病毒为加强组合物。
7.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：张攀丽，王聪，邓棋滔，黎诚耀，
申请(专利权)人：广州佰芮慷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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