一种核酸清除剂、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及清除核酸污染技术领域，为解决现有技术下核酸清除剂会腐蚀金属并对人体有一定毒害作用，且无针对气溶胶核酸分子消除的产品的问题，公开了一种核酸清除剂，包括A液和B液，A液包括如下质量分数的组分：3%

【技术实现步骤摘要】
一种核酸清除剂、其制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及清除核酸污染
，尤其涉及一种核酸清除剂、其制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]核酸是生物聚合物脱氧核糖核酸和核糖核酸的总称，存在于目前已知的所有生命形式中。不同生物的特异核酸序列不同，通过聚合酶链式反应(PCR)检测特异核酸序列被广泛应用于体外诊断、动植物商品检疫、法医鉴定等领域。然而PCR操作过程中易受到核酸污染导致的假阳性结果，严重影响了检测准确性。因此需要开发一种清除核酸污染的方案以保障检测结果的可靠性。传统的清除环境和设备核酸污染的方法中主要有采用酒精或84消毒液作为核酸清除剂进行擦拭，或采用紫外灯进行照射消毒。但酒精和84消毒液清除核酸污染的能力相对较弱，且84消毒液属含氯消毒液，对人和动物有一定的毒性，对皮肤、金属及带色纺织物具有较强的腐蚀和脱色作用。采用紫外灯照射杀菌费时费力，且紫外照射的作用原理是使PCR产物中嘧啶碱基形成二聚体，使得延伸终止，该方案仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。
[0003]现上市可降解短链核酸分子的核酸清除剂有酶降解型核酸清除剂，例如在中国专利文献上公开的公告号为CN115181616A的“一种基于病毒阻断剂的核酸清除剂及其用途”，其组分包括：病毒阻断蛋白、核酸酶；任选的稳定剂；任选的溶剂；所述重组融合蛋白为病毒阻断剂且包含冠状病毒S棘突蛋白特异结合的结构域。这类核酸清除剂在通过核酸酶降解核酸的同时可能会带来蛋白质污染，还有一些为非喷雾型核酸清除剂，这类核酸清除剂通过悬液法降解核酸分子，对气溶胶核酸分子的消除效果不详。为了核酸检测的准确性和实验人员的安全，有必要专利技术一种无毒害、无腐蚀性且高效广谱的核酸清除剂。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了克服现有技术下核酸清除剂会腐蚀金属并对人体有一定毒害作用，且无针对气溶胶核酸分子消除的产品的问题，提供了一种核酸清除剂。该核酸清除剂既可用于悬液法清除核酸分子，又可用于气溶胶法清除核酸分子。组成成分中的过氧化物含量不高且不含含氯化合物，对金属表面不会造成腐蚀，对人体无毒害作用；对核酸分子进行非特异性破坏，具有广谱性。本专利技术还提供了一种核酸清除剂的制备方法以及该核酸清除剂的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种核酸清除剂，包括A液和B液，A液包括如下质量分数的组分：3％
‑
7.5％过氧化氢、5％
‑
10％无水乙醇，余量为水；B液的pH为9
‑
12，包括如下组分：10
‑
100mmol/L 4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、2
‑
10mmol/L金属离子盐、0.001％
‑
0.002％质量分数的表面活性剂、碱和水。
[0006]A液中的过氧化氢和无水乙醇作为核酸清除剂中的失活剂，过氧化氢产生氢氧自
由基令核酸分子失活，乙醇能使核酸链断裂。B液中金属离子盐提供的金属离子可催化过氧化氢产生氢氧自由基，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸在过氧化氢和金属离子作用过程中起辅助作用，可令核酸分子进一步失活，两者的作用使得A液中过氧化氢的浓度在较低的情况下有良好的核酸清除效果，进而避免由于使用较高浓度的过氧化氢对人体产生的毒害作用。4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸在碱性溶液中溶解度较高，并且对过氧化氢和金属离子的辅助效果较好，因此B液中还需要使用碱调节B液pH，同时B液在该pH下与A液混合后总体仍呈碱性，且不会腐蚀金属。表面活性剂可提高核酸清除剂对被污染物中待清除核酸的润湿效果，进而提高核酸清除剂对核酸的分解速率。
[0007]作为优选，所述金属离子盐为水溶性铜盐、水溶性锌盐和水溶性亚铁盐中的一种或几种。
[0008]Cu
2+
、Zn
2+
和Fe
2+
可有效催化过氧化氢分解。
[0009]作为优选，所述金属离子盐为硫酸铜、硝酸铜、硫酸锌、硝酸锌和硫酸亚铁的一种或几种。
[0010]作为优选，所述碱为氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或几种。
[0011]作为优选，所述表面活性剂为耐碱性表面活性剂。
[0012]耐碱性表面活性剂如十二烷基硫酸钠、脂肪醇醚磺酸盐和脂肪醇醚羧酸盐，可在碱性体系中起到良好的改善核酸清除剂的渗透和润湿效果的作用。
[0013]作为更优选，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
[0014]一种核酸清除剂的制备方法，包括如下步骤：(1)将过氧化氢和无水乙醇混合后加入水，混合均匀得到A液；(2)将4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶于水中，加入碱调节pH至9
‑
12，再依次加入金属离子盐和表面活性剂，混合均匀得到B液。
[0015]作为优选，所述步骤(2)为将4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶于水中，加入含碱的水溶液调节pH至9
‑
12，含碱的水溶液中碱浓度为0.1
‑
1mol/L。
[0016]核酸清除剂在悬液法清除核酸污染中应用，包括如下步骤：将核酸清除剂A液、B液以(1
‑
1.5)：1的体积比混合，将被污染的器材浸入混合液中10
‑
20min，再清洗器材表面以除去核酸清除剂。
[0017]本专利技术可用于悬液法清除核酸污染，核酸清除剂A液和B液的混合液可破坏浸泡于其中的器材上的污染核酸，且清除污染核酸的速度快，所需的浸泡时间短。浸泡后，器材表面残留未与核酸反应的失活剂，需清洗器材除去该部分失活剂，以避免器材再次用于检测核酸时残留的失活剂破坏待测核酸样品。
[0018]作为优选，所述步骤包括使用中和剂清洗器材表面，中和剂包括硫代硫酸钠。
[0019]硫代硫酸钠可与残留的过氧化氢反应，使核酸清除剂失活。
[0020]作为更优选，所述中和剂为包含如下质量分数组分的胰蛋白胨生理盐水溶液：1.5
‑
2％硫代硫酸钠、0.4
‑
0.5％卵磷脂、0.4
‑
0.5％吐温
‑
80。
[0021]核酸清除剂在清除气溶胶的核酸污染中应用，包括如下步骤：将核酸清除剂B液喷洒于空气中，待B液喷洒完毕再将核酸清除剂A液喷洒于空气中，A液喷洒完毕后静置，静置时间大于1h。
[0022]本专利技术还可用于气溶胶中核酸的清除，使用时依次喷洒B液和A液，去除效果好。
[0023]作为优选，述步骤中以空气体积计，B液的喷洒量为(8
‑
15)mL/m3，A液的喷洒量为(8
‑
15)mL/m3。
[0024]作为优选，所述A液喷洒完毕后静置后，重复喷洒B液和A液2
‑
3次。
[0025]若气溶胶中核酸污染严重，可重复喷洒2
‑
3次以提高清除效果。
[0026]因此，本专利技术具有如下有益效果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸清除剂，其特征是，包括A液和B液，A液包括如下质量分数的组分：3%
‑
7.5%过氧化氢、5%
‑
10%无水乙醇，余量为水；B液的pH 为9
‑
12，包括如下组分：10
‑
100mmol/L 4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、2
‑
10mmol/L金属离子盐、0.001%
‑
0.002%质量分数的表面活性剂、碱和水。2.根据权利要求1所述的一种核酸清除剂，其特征是，所述金属离子盐为水溶性铜盐、水溶性锌盐和水溶性亚铁盐中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的一种核酸清除剂，其特征是，所述碱为氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种核酸清除剂，其特征是，所述表面活性剂为耐碱性表面活性剂。5.一种如权利要求1
‑
4任意一项所述的核酸清除剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：（1）将过氧化氢和无水乙醇混合后加入水，混合均匀得到A液；（2）将4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶于水中，加入碱调节pH至9
‑
12，再依次加入金属离子盐和表面活性剂，混合均匀得到B液。6.根据权利要求5所述的核酸清除...

【专利技术属性】
技术研发人员：程飞，孙巍群，赵振波，夏信群，叶大林，
申请(专利权)人：浙江泰林医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：