一种抗S100A单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种抗S100A单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术提供的抗S100A单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO：1～3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如所示SEQ ID NO:4～6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。同时还提供了该单克隆抗体重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列，进而可以利用基因工程技术制备重组抗体，此方法是一种标准化的抗体生产流程，回避了传统单克隆抗体生产保存过程中出现的风险因素，制备的重组抗体具有性质稳定、实验重复性高等优势，且重组抗体可以与S100A蛋白发生特异性反应，灵敏度较高。灵敏度较高。灵敏度较高。

【技术实现步骤摘要】
一种抗S100A单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种抗S100A单克隆抗体及其制备方法和应用，属于免疫学


技术介绍

[0002]S100属于多基因钙结合蛋白家族，由20多个已知的蛋白组成，每个蛋白由单独的基因编码。S100蛋白基因至少有16个映射到人染色体1Q21上并表示为S100A1
‑
A16，落在该基因外的S100是单字母名称(S100B、S100G、S100P、S100Z)。S100A1又名S100A，是个编码94aa的酸性蛋白，属于Ca
2+
结合的EF基序超家族成员。
[0003]S100A在骨骼肌纤维，心肌细胞和某些神经元种群中大量表达，是病理诊断免疫组织化学(IHC)中常用的标志物，是一种神经特异性蛋白。在病理诊断中，S100A是预后不良的卵巢癌和子宫内膜癌的标志，也是鉴别肾源性腺癌与前列腺癌的特异性和敏感性标志物。在肿瘤细胞中，绝大多数恶性黑色素瘤和神经纤维瘤为S100A免疫组化阳性。
[0004]目前制备的S100A单克隆抗体多采用全长重组蛋白或者从组织中提取天然蛋白进行免疫，价格昂贵且特异性和稳定性有待提高，并且存在抗体批次间差异较大、稳定性差的问题。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术的第一个目的是提供一种抗S100A单克隆抗体，该抗体性质稳定，具有较好的特异性和亲和力。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供上述单克隆抗体在制备S100A体外检测试剂或试剂盒中的应用。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供一种包含上述单克隆抗体的免疫组化检测试剂或试剂盒。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供包含上述单克隆抗体编码基因的核酸分子。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供包含上述核酸分子的表达盒、表达载体、重组细胞或重组菌。
[0010]本专利技术的第六个目的是提供上述核酸分子、表达盒、表达载体、重组细胞或重组菌在制备抗S100A单克隆抗体中的应用。
[0011]本专利技术的第七个目的是提供抗S100A单克隆抗体的制备方法，该方法是一种标准化的抗体生产流程，回避了传统单克隆抗体生产保存过程中出现的风险因素。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0013]一种抗S100A单克隆抗体，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO：1～3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如所示SEQ ID NO:4～6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
[0014]本专利技术提供的抗S100A单克隆抗体由两个全长S100A蛋白串联作为抗原制备而成，同时又可以增加免疫原性。两个全长S100A蛋白串联并在中间加入连接原件(Linker)连接，加入Linker可以保持串联单元的独立性，两个串联序列的结构互不影响，同时又可以增加
免疫原性。本专利技术的抗S100A单克隆抗体性质稳定，具有较好的特异性和亲和力。
[0015]优选地，所述单克隆抗体重链可变区具有如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，轻链可变区具有如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。
[0016]抗S100A单克隆抗体在制备S100A体外检测试剂或试剂盒中的应用。
[0017]该单克隆抗体可以用于制备S100A体外检测试剂或试剂盒，检测组织细胞中S100A的表达情况。
[0018]包括S100A单克隆抗体的免疫组化检测试剂或试剂盒。
[0019]该试剂或包含该试剂的试剂盒可用于体外免疫检测组织细胞中S100A的表达情况。
[0020]一种包含编码抗S100A单克隆抗体的基因序列的核酸分子。
[0021]该核酸分子可以通过基因工程重组技术或化学合成方法获得。本领域技术人员显然知晓，在本专利技术提供的上述核酸分子经一个或多个核苷酸添加、删除、替换、修饰等突变后得到的重链可变区核苷酸序列和/或轻链可变区核苷酸序列的变异序列，其所编码的氨基酸序列组成的单链抗体或嵌合单克隆抗体或改型单克隆抗体或其他形式的单克隆抗体或抗体片段，仍保留与S100A蛋白特异性结合的能力。
[0022]优选地，抗S100A单克隆抗体重链可变区基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示；抗S100A单克隆抗体轻链可变区基因核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示。
[0023]一种包含上述核酸分子的表达盒、表达载体、重组细胞和重组菌。
[0024]优选的，所述重组表达载体选自原核或真核表达载体；更进一步的，所述重组表达载体选自细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。
[0025]优选的，所述表达系统为细菌、酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞或无细胞表达系统。
[0026]上述核酸分子、表达盒、表达载体、重组细胞和重组菌在制备抗S100A抗体中的应用。
[0027]本专利技术提供了包含抗S100A单克隆抗体的重链和轻链的可变区氨基酸序列的核酸分子、表达盒、表达载体、重组细胞和重组菌，在此基础上，可以采用常规基因工程的方法获得本专利技术的抗S100A单克隆抗体。
[0028]一种抗S100A单克隆抗体的制备方法，将上述的核酸分子导入宿主细胞，收集细胞上清，纯化超滤获得。
[0029]本专利技术提供制备抗S100A单克隆抗体的方法，与传统单克隆抗体制备方法相比，具有重组抗体序列已知、抗体基因可长期保存、制备的抗体性质稳定、制备的抗体实验重复性好等优点，是一种标准化的抗体生产流程，回避了传统单克隆抗体生产保存过程中出现的风险因素。
[0030]优选地，所述宿主细胞为HEK293细胞。
[0031]HEK293是一种耐寒、半贴壁、地维护的细胞系，容易转染，并且能够产生大量的重组蛋白。
附图说明
[0032]图1为本专利技术实施例4中制备的S100A鼠单抗Western blot检测结果(M为Marker)；
[0033]图2为本专利技术实施例4中扁桃体免疫组化图(200X)；
[0034]图3为本专利技术实施例4中肾组织免疫组化图(200X)；
[0035]图4为本专利技术实施例4中神经鞘瘤免疫组化图(200X)；
[0036]图5为本专利技术实施例6中制备的S100A重组抗体的Western blot检测结果(M为Marker)；
[0037]图6为本专利技术实施例6中扁桃体免疫组化图(200X)；
[0038]图7为本专利技术实施例6中神经鞘瘤免疫组化图(200X)。
具体实施方式
[0039]下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。除特殊说明之外，各实施例、实验例及对比例中所用的设备和试剂均可从商业途径得到。
[0040]实施例1抗原的设计
[0041]根据Uniprot公布的S100A氨基酸序列，登录号为P23297，S100A是个编码94aa本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗S100A单克隆抗体，其特征在于：其包含氨基酸序列如SEQ ID NO：1～3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如所示SEQ ID NO:4～6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。2.根据权利要求1所述的抗S100A单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体重链可变区具有如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，轻链可变区具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。3.一种如权利要求1～2任一项所述单克隆抗体在制备S100A体外检测试剂或试剂盒中的应用。4.一种包含如权利要求1～2任一项所述单克隆抗体的免疫组化检测试剂或试剂盒。5.一种包含编码如权利要求1或2所述抗S100A单克隆抗体的基因序列的核酸分...

【专利技术属性】
技术研发人员：申玉姣，宋辉，许鹏程，李三华，靳冉，王微娜，翟晋豫，齐华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：