本发明专利技术涉及一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的引物组合物以及使用该引物组合物鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的方法。本发明专利技术的鉴别方法直接分析目标物的遗传物质DNA，其结果不依赖于技术员对样品农艺性状的了解程度，也不受环境干扰，解决了以往技术带来的人为因素影响、环境因素干扰造成的数据不准，节约了鉴定成本，缩短了鉴定时间，对新品种的鉴定更精准、可靠。可靠。可靠。
【技术实现步骤摘要】
ID NO.8，SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16，以及SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20。
[0010]优选的，所述引物的信息如下表所示：
[0011][0012]优选的，所述引物组合物进一步包含下述引物，所述引物的名称分别为umc2007y4、phi053k2、umc1705w1、bnlg161k8、bnlg1702k1、umc1545y2、umc1125y3、phi065k9、umc1492y13、umc1506k12、phi96100y1、umc1536k9、bnlg1520K1、umc1999y3、umc2115k3、phi299852y2、umc2160k3、phi233376y1和umc2084w2。
[0013]本专利技术的第二方面提供一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的试剂盒，其包含上述4对引物。
[0014]本专利技术的第三方面提供一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的方法，其包括以下步骤：
[0015](1)将待测玉米种子研磨，利用DNA磁珠法提取基因组DNA；
[0016](2)用4对引物对提取的DNA进行PCR扩增，获得扩增产物，所述引物的名称分别为bnlg439w1、bnlg1940k7、bnlg2291k4和bnlg2305k4；
[0017](3)将扩增产物利用毛细管电泳进行检测；
[0018](4)将所得电泳结果与使用上述引物对扩增“和甜三号”玉米种子所得的电泳结果进行比较，确定所述样品是否含有与“和甜三号”一致的指纹，从而鉴定玉米种子是否为“和甜三号”。
[0019]优选的，所述步骤(2)中PCR扩增体系为：
[0020]成分单反应体积(μl)HotStart Mix 2X10F
‑
primer0.1R
‑
primer0.1模板(浓度在20ng/μl)2水7.8
合计20。
[0021]优选的，所述步骤(2)中PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸10min，扩增产物4℃保存。
[0022]优选的，所述步骤(3)中的电泳缓冲液为1
×
TAE，电压为100V。
[0023]本专利技术的第三方面提供上述引物组合物或上述试剂盒在鉴别“和甜三号”玉米种子纯度中的应用。
[0024]本专利技术的第四方面提供上述引物组合物在制备用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的试剂盒中的应用。
[0025]本专利技术产生的有益效果：
[0026](1)本专利技术方法基于20个核心种质和20个扩展种质筛选出多态性高、重复性好的40对核心引物，这些引物适用于玉米自交系和单交种的SSR指纹数据采集以及品种鉴定。基于毛细管电泳的SSR分子标记检测技术具有高通量和低成本，以及高度灵活的优势，利用毛细管电泳检测技术平台，依据40对SSR标记引物进行相应的分析，首次建立玉米新品种“和甜三号”的DNA指纹(标记
‑
基因型)，从DNA水平快速、准确地鉴定品种间差异，维护了品种权，为该新品种的推广种植提供了强有力的技术支撑。
[0027](2)本专利技术利用40对SSR标准引物对杂交玉米品种“和甜三号”及其亲本(SC13035
×
SC13019)进行了基因型分析，40个SSR标记
‑
基因型指纹图谱中含23个杂合位点。通过与其他品种比较分析实验和综合评估，筛选与其他品种相比较特异性更强的4对引物，且能够区分“和甜三号”与亲本的特异性标记，建立了杂交玉米“和甜三号”种子纯度分子鉴定技术方法，能够鉴定出自交苗、回交苗和异型株。
[0028](3)本专利技术的鉴别方法直接分析目标物的遗传物质DNA，其结果不依赖于技术员对样品农艺性状的了解程度，也不受环境干扰，解决了以往技术带来的人为因素影响、环境因素干扰造成的数据不准，节约了鉴定成本，缩短了鉴定时间，对新品种的鉴定更精准、可靠。
附图说明
[0029]图1为本专利技术引物P01(bnlg439w1)的SSR标记毛细管电泳图；
[0030]图2为本专利技术引物P04(bnlg1940k7)的SSR标记毛细管电泳图；
[0031]图3为本专利技术引物P08(bnlg2291k4)的SSR标记毛细管电泳图；
[0032]图4为本专利技术引物P10(bnlg2305k4)的SSR标记毛细管电泳图；
[0033]图5为本专利技术引物P03(umc2007y4)在不同品种玉米中的SSR标记毛细管电泳图对比图。
具体实施方式
[0034]通过试验例方式对本专利技术作进一步的说明，但是本专利技术并不仅仅局限于以下试验例。
[0035]试验例1、“和甜三号”玉米品种SSR标记
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基因型指纹图谱的确定
[0036]1.玉米基因组DNA提取
[0037]每样本取20粒“和甜三号”玉米种子，置于2ml圆底离心管中，加入2颗钢珠，用
QIAGEN研磨器，最大频率研磨20分钟，制备提取DNA。利用种子DNA磁珠法提取基因组DNA，提取试剂盒为长春市志昂生物科技有限公司生产，型号为GO
‑
GPLF
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FX96，使用仪器包括Thermo FLEX核酸提取仪、混匀小精灵、离心机和金属浴/水浴/空气浴。DNA提取后于1.0％的琼脂糖凝胶电泳进行检测，电泳缓冲液为1
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TAE，电压为100V；DNA纯度和浓度测量利用NanoDrop2000c紫外可见光谱仪(Thermo公司)进行测定，稀释至50ng/μL的工作液备用，4℃冰箱储藏。
[0038]2.引物
[0039]本试验例采用的玉米SSR核心引物P01
‑
P40的序列信息如下表1所示。
[0040]表1玉米SSR核心引物名称和序列
[0041][0042][0043][0044][0045]3.PCR反应体系和程序
[0046]PCR体系标准配置：
[0047][0048][0049]PCR反应条件设置：94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸10min，扩增产物4℃保存。
[0050]4.毛细管电泳分析
[0051]按说明书依次进行电泳，所有数据分析基于QIAxcelScreenGel1.4版软件，通过软件系统自动对指纹的原始数据进行分析，确定每个位点的等位基因，部分SSR标记毛细管电泳图如图1
‑
4所示。
[0052]5.玉米品种DNA指纹
[0053]通过毛细管电泳的SSR分子标记分析技术平台，利用40个SSR标记分析了“和甜三号”和其他三个品种(糯玉米N1、糯玉米N2、甜玉米N3)，具体数据见表2
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1和表2
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2。通过差异位点的分析可以建立品种的D本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包含4对引物，所述引物的名称分别为bnlg439w1、bnlg1940k7、bnlg2291k4和bnlg2305k4。2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述引物的序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16，以及SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20。3.一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的引物组合物。4.一种用于鉴别“和甜三号”玉米种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待测玉米种子研磨，利用DNA磁珠法提取基因组DNA；(2)用4对引物对提取的DNA进行PCR扩增，获得扩增产物，所述引物的名称分别为bnlg439w1、bnlg1940k7、bnlg2291k4和bnlg2305k4；(3)...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚丹青，王刚，楼坚锋，张海兰，刘建，顾芹芹，
申请(专利权)人：上海市农业技术推广服务中心，
类型：发明
国别省市：
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