本发明专利技术公开了基因SPATS2L、NSUN5和ZNF207可联合检测用于诊断肺腺癌，根据联合检测得到SPATS2L、NSUN5和ZNF207的甲基化水平可准确获知受试者是否患有肺腺癌。本发明专利技术还公开了用于诊断肺腺癌的试剂盒，其为对基因SPATS2L、NSUN5和ZNF207的各自甲基化水平同时通过荧光定量PCR反应进行联合检测的试剂盒，包括SPATS2L、NSUN5和ZNF207的正向引物、反向引物、阻断剂和探针，以及内参基因的正向引物、反向引物和探针。引物和探针。引物和探针。
【技术实现步骤摘要】
一种肺腺癌甲基化位点检测的引物组合物及其应用
[0001]本专利技术属于基因联合检测领域。
技术介绍
[0002]肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，五年存活率不足20％。按照病理类型，肺癌可以简单地分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，肺腺癌(Lung Adenocarcinoma,LUAD)是非小细胞肺癌中最普遍存在的分型，大约占所有恶性肺肿瘤的一半。如果肺癌可以在早期阶段被诊断出来，特别是在IA期的非小细胞肺癌(NSCLC)，其5年相对生存率可达到92％。因此，对肺癌患病风险进行提前预测，以及早期筛查，极有可能提高肺癌患者的生存率、降低死亡率。
[0003]目前，常用的肺癌的诊断主要依赖于低剂量计算机断层扫描(LDCT)等影像学方法发现肺内肿物。LDCT的应用可提高肺结节的检出率，降低肺癌的死亡率。然而，仅使用LDCT很难区分恶性结节和良性结节。根据国家肺筛查试验(NLST)试验的数据，LDCT的假阳性率达到96.4％，可能导致不必要治疗的增加。
[0004]目前肺癌的标准临床诊断方法包括经支气管肺活检、经皮肺穿刺活检、支气管肺泡灌洗fuid(BALF)和液体活检(血或痰)。经支气管肺活检和经皮肺穿刺活检是一种侵入性的诊断技术，在支气管镜下不可见的肿瘤取样方面有局限性。但支气管肺泡灌洗(BAL)可以克服这些问题。BALFs取样是疑似肺癌患者接受支气管镜检查时的常规手术。BAL具有采样量大、一次手术清洗次数多次的优点，提高了肺癌检测的特异性和灵敏度，是一种简单、侵袭性小的诊断技术，是诊断高危肺癌人群肺结节的理想方法。液体活检，特别是基于血液的检测，由于其微创/非侵入性、高依从性和手术简单，在早期癌症筛查和诊断中很流行。然而，缺乏组织特异性和低敏感性是血液检测的巨大挑战。痰液检测可以诊断鳞状细胞癌，因为痰液主要从中央大气通道咳出，但可能不适合检测经常发生在肺周围的腺癌。
[0005]通过肿瘤标志物，可快速、便捷地实现肺癌患病风险预测和早期筛查。目前临床应用的肺癌标志物主要有如下几种类型∶(1)自身抗体；(2)自身抗体以外的其他蛋白；(3)代谢物；(4)RNA；(5)序列改变的DNA；(6)不同程度甲基化的DNA。每种类型下的标志物数量众多，对肺癌的辅助诊断具有一定参考价值，但由于被检者的个体差异，依赖现有的标志物组合进行预测与筛查仍缺乏足够的敏感性和特异性。因此，发现新的肺癌的肿瘤标志物具有重要意义。
技术实现思路
[0006]为了克服上述问题，本专利技术人研究发现甲基化基因SPATS2L、NSUN5、ZNF207可联合检测以准确诊断肺腺癌，从而完成本专利技术。
[0007]具体来说，本专利技术的目的在于提供一种用于诊断肺腺癌的基因组合，由基因SPATS2L、基因NSUN5和基因ZNF207组成。
[0008]本专利技术的目的在于提供一种用于诊断肺腺癌的试剂盒，其为对基因SPATS2L、
NSUN5和ZNF207的各自甲基化水平同时通过通过荧光定量PCR反应进行联合检测的试剂盒，包括：
[0009]基因SPATS2L的正向引物、反向引物、阻断剂和探针；
[0010]基因NSUN5的正向引物、反向引物、阻断剂和探针；
[0011]基因ZNF207的正向引物、反向引物、阻断剂和探针。
[0012]本专利技术所具有的有益效果包括：
[0013]根据本专利技术提供的试剂盒，能在一次PCR反应中准确联合分析受试者的SPATS2L的甲基化水平、NSUN5的甲基化水平、和ZNF207的甲基化水平，从而准确获知受试者是否患有肺腺癌。
附图说明
[0014]图1示出在良性肺疾病患者及肺腺癌患者BALF液样本中的SPATS2L、NSUN5和ZNF207基因的甲基化水平差异，横轴示样本分组，纵轴示该基因在相应分组中的甲基化水平。
[0015]图2和图3示出预测模型在训练组和验证组中的效能，将预测模型用以区分训练组和验证组中的良恶性组织样本，计算该模型的诊断效能；横轴示假阳性率，纵轴示真阳性率；如图2所示，所述预测模型在训练组中的AUC达0.996，如图3所示，该预测模型在验证组中的AUC为0.967，与训练组诊断效能相当，可准确区分良性肺疾病与肺腺癌患者BALF液样本。
具体实施方式
[0016]下面通过附图和实施例对本专利技术进一步详细说明。通过这些说明，本专利技术的特点和优点将变得更为清楚明确。
[0017]在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。尽管在附图中示出了实施例的各种方面，但是除非特别指出，不必按比例绘制附图。
[0018]DNA甲基化是一种表观遗传修饰，对人类的发育和疾病具有重要意义。异常的DNA甲基化可能通过多种机制参与癌症的进展，如使肿瘤抑制基因失活。随着高灵敏度的DNA甲基化检测技术的发展，CpG岛的异常甲基化状态成为癌症诊断的一个有吸引力的生物标志物。
[0019]SPATS2L(Spermatogenesis
‑
associated serine
‑
rich 2
‑
like)是一种核内应激反应蛋白，参与染色体组织、核糖体生物发生和翻译控制。
[0020]NSUN5是NOL1/NOP2/太阳域蛋白家族的成员，是一种编码胞嘧啶
‑
5RNA甲基转移酶的基因，通过调控细胞周期促进结直肠癌的增殖和进展。
[0021]ZNF207是锌指蛋白家族的一个成员，在人类胚胎干细胞的自我更新、多能性和分化方面起着至关重要的作用。
[0022]本专利技术研究发现，甲基化基因SPATS2L、NSUN5、ZNF207联合检测对诊断肺腺癌有重要意义。
[0023]在具体研究中，在肺部良性疾病患者和肺腺癌患者的样本中测量和统计分析BALF
液样本DNA中SPATS2L、NSUN5和ZNF207基因的甲基化水平。
[0024]关于受试者：
[0025]从2017年1月到2021年12月，解放军总医院的230名受试者被纳入本专利技术研究，并随机分为建模组和验证组。
[0026]其中，患者组的入选标准为∶经病理学明确诊断的初诊且未经治疗的肺腺癌患者，并且采血前未经过手术和放化疗且无手术前放化疗。
[0027]良性疾病患者组的入选标准为∶患有肺炎、肺结核、肺大疱、支气管扩张、气胸和/或慢性阻塞性肺疾病等良性病变，或肺囊肿、肺错构瘤、肺硬化性血管瘤、肺结核瘤等良性肿瘤中的至少一种的肺良性疾病的患者。
[0028]研究过程：
[0029]1、BALF液中SPATS2L、NSUN5和ZNF207基因的甲基化水平测定
[0030]取受试者肺泡灌洗液10ml，10000rpm离心5min，去除上清，沉淀用于DNA取，具体抽提步骤参见天根生化科技有限公司生产的血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于诊断肺腺癌的基因组合，由基因SPATS2L、NSUN5和ZNF207组成。2.根据权利要求1所述的基因组合，其中基因SPATS2L、NSUN5和ZNF207来自受试者肺泡灌洗液。3.一种用于诊断肺腺癌的试剂盒，其为对基因SPATS2L、NSUN5和ZNF207的甲基化水平通过通过荧光定量PCR反应进行联合检测的试剂盒，包括：基因SPATS2L的正向引物、反向引物、阻断剂和探针；基因NSUN5的正向引物、反向引物、阻断剂和探针；基因ZNF207的正向引物、反向引物、阻断剂和探针。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其还包括：内参基因的正向引物、反向引物和探针。5.根据权利要求4所述的试剂盒，所述内参基因为ACTB。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其还包括：PCR反应必需原料，10xEpiTaqPC...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹彦，杨宇薇，马锡慧，王韧韬，孙玉洁，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第八医学中心，
类型：发明
国别省市：
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