【技术实现步骤摘要】
本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用及转基因植物培育方法
[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用。
技术介绍
[0002]双生病毒是世界范围内广泛发生的单链环状DNA病毒，包含了520多种，是目前为止种类最多的植物病毒。根据基因组结构、介体种类和寄主范围，双生病毒被划分为14个属，其中危害最大的是菜豆金色花叶病毒属病毒。该属病毒由烟粉虱传播，对番茄和烟草等作物的生产造成了严重损失。目前，双生病毒已在我国广泛分布，危害最严重的两类双生病毒是TYLCV病毒和TYLCCNV/TYLCCNB病毒，感病植株出现矮化、黄化、茎叶扭曲和卷叶等症状，严重制约了番茄等产业的发展。
[0003]双生病毒是一类专性寄生物，自身仅编码有限的遗传信息，需要依赖与植物复杂的相互作用才能完成复制、转录、翻译和传播等生活史。培育抗病品种是控制双生病毒最有效的手段，但是自然界中现有的抗性资源有限，且抗性往往仅对少数几种双生病毒有效。例如，抗性基因Ty
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3能够介导对TYLCV病毒的抗性，但是Ty
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3介导的对TYLCV病毒的抗性能够被双生病毒伴随的卫星DNA
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beta卫星所克服。因此，挖掘双生病毒侵染所需的寄主因子并对其进行改造可以加快抗双生病毒的分子育种工程。
技术实现思路
[0004]本专利技术的第一目的是提供一种本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用。<...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用，其特征在于：所述双生病毒为TYLCV病毒和/或TYLCCNV/TYLCCNB病毒。2.根据权利要求1所述的本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用，其特征在于：所述NbWhirly1基因序列如SEQ ID NO:19所示。3.根据权利要求2所述的本氏烟NbWhirly1基因在调控植物抗双生病毒中的应用，其特征在于：将NbWhirly1基因片段构建到RNAi载体上，获得NbWhirly1 RNAi载体；通过农杆菌转化的方法转化目的植物，获得的沉默NbWhirly1的转基因本氏烟能够显著减轻TYLCV和TYLCCNV/TYLCCNB的侵染；其中，所述NbWhirly1基因片段如SEQ ID NO:1所示。4.一种抗双生病毒的NbWhirly1转基因植物的培育方法，其特征在于：将NbWhirly1基因片段构建到RNAi载体上，获得NbWhirly1 RNAi载体，通过农杆菌转化的方法转化目的植物，获得沉默NbWhirly1的转基因本氏烟；其中，所述双生病毒为TYLCV病毒和/或TYLCCNV/TYLCCNB病毒；所述NbWhirly1基因片段如SEQ ID NO:1所示。5.根据权利要求4所述的抗双生病毒的NbWhirly1转基因植物的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：1)本氏烟cDNA的获得：取本氏烟叶片样品，使用Trizol法抽提RNA，使用oligo(dT)
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引物反转录获得cDNA；2)NbWhirly1序列的克隆：以NbWhirly1基因片段作为RNAi的靶标片段，NbWhirly1基因片段如SEQ ID NO:1所示；使用引物对NbWhirly
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1F与NbWhirly
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1R；NbWhirly
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2F与NbWhirly
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2R，以本氏烟的cDNA为模板进行PCR扩增，得到NbWhirly1
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1和NbWhirly1
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2片段；3)NbWhirly1
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RNAi载体的构建：割胶回收NbWhirly1
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1片段，通过In
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Fusion方法将该片段与SmaI酶切后的pRNAi
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LIC
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L载体连接，获得pRNAi
‑
LIC
‑
L
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NbWhirly1
‑
1；将NbWhirly1
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2片段回收后通过In
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Fusion方法将该片段与MluI与SalI酶切后的pRNAi
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LIC
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L
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NbWhirly1
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1载体连接，获得NbWhirly1
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RNAi；4)将1μL重组质粒与100μL农杆菌感受态混合转入电击杯中，使用电击装置2500V电击转化，恢复后涂布到含有卡那霉素和利福平的LB固体培养基上，筛选获得带有NbWhirly1
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RNAi重组质粒的农杆菌；(5)将带有重组质粒的农杆菌侵染无菌烟草叶盘，经分...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀玲，周雪平，孙少双，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
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