一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞、复合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞、复合物及其制备方法和应用，属于生物技术领域。所述稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，为普通脂肪干细胞经SV2C过表达的慢病毒转染所得。本发明专利技术通过构建SV2C的全长基因过表达的慢病毒感染普通脂肪获得一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，该脂肪干细胞可过表达SV2C蛋白，将该脂肪干细胞与A型肉毒毒素共培养可获得脂肪干细胞

【技术实现步骤摘要】
一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞、复合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞、复合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]脂肪干细胞(adipose
‑
derived stem cells，ADSCs)是由Zuk等在2001年首次从脂肪组织中分离、提取出的一种间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，具有较强组织修复的生物学功能，已成为细胞治疗和组织工程应用中的理想种子细胞。ADSCs的生物学功能包括以下三个方面：(1)多向分化潜能，ADSCs具有向多种成体细胞的分化能力，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、肌细胞(包括骨骼肌、平滑肌以及心肌细胞)等。(2)具有旁分泌功能，ADSCs可合成分泌多种类型细胞因子和成分，包括：
①
生长因子，有表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子
‑
β(TGF
‑
β)、胰岛素样生长因子(IGF)等；
②...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，其特征在于，所述脂肪干细胞为普通脂肪干细胞经SV2C过表达的慢病毒转染所得。2.根据权利要求1所述的一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，其特征在于，所述SV2C过表达的慢病毒采用以下方法构建：S1.获得目的基因：设计引物合成SV2C的全长基因，为目的基因；S2.构建重组质粒：将步骤S1获得的目的基因与GV492载体连接，用DH5α大肠杆菌菌株转化获得菌落，对菌落进行PCR获得阳性转化子；S3.质粒抽提与转染：将含阳性转化子的菌液抽提质粒，收集SV2C过表达质粒并转染293T细胞；S4.收获慢病毒：含10％FBS的低糖DMEM培养基中加入SV2C过表达质粒转染的293T细胞，培养72h后收集细胞上清液，浓缩和纯化后即为SV2C过表达的慢病毒，其中，所述的慢病毒包裹混合液为SV2C过表达质粒、pHelper1.0载体质粒、pHelper 2.0载体质粒和吉凯转染试剂的混合液。3.根据权利要求1所述的一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，其特征在于，步骤S1中所述引物的上游引物的核苷酸序列为：5
’‑
AGGTCGACTCTAGAGGATCCCGCCACCATGGAAGACTCTTACAAGGATAG
‑3’
，下游引物的核苷酸序列为：5
’‑
TCCTTGTAGTCCATACCCATCAGAACCTGGGTTCGTGTGTC
‑3’
。4.根据权利要求1所述的一种稳定结合A型肉毒毒素的脂肪干细胞，其特征在于，步骤S2中菌落PCR的上游引物核苷酸序列为：5
’‑
TTGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：易西南，王亚如，冯仁军，田梦思，韩炎超，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：