一种靶向CAR-T细胞的培养方法技术

本申请涉及肿瘤免疫治疗方法领域，具体公开了一种靶向CAR

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CAR
‑
T细胞的培养方法


[0001]本申请涉及肿瘤免疫治疗方法领域，更具体地说，它涉及一种靶向CAR
‑
T细胞的培养方法。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体T细胞（CAR
‑
T细胞）是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3
‑
ζ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体。患者的T细胞被重编码后，生成大量肿瘤特异性的CAR
‑
T细胞。
[0003]CAR
‑
T细胞在肿瘤免疫治疗中通常采用IL
‑
2+RPMI1640+FBS培养基培养CAR
‑
T细胞，但采用IL
‑
2+RPMI1640+FBS去培养转染慢病毒后的T细胞存在转染后的T细胞无法大量增殖的情况。

技术实现思路

[0004]为了提高转染后的T细胞的增殖倍数，本申请提供一种靶向CAR
‑
T细胞的培养方法，采用如下的技术方案：一种靶向CAR
‑
T细胞的培养方法，包括以下步骤：S1、将CAR
‑
T细胞加入培养基中，调整细胞密度为(1～10)
×
106cell/mL，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠进行细胞培养，细胞培养的条件为5％CO2、37℃；S2、培养72小时后按照(1～10)
×
105cell/mL的细胞密度补加培养基；S3、继续培养8～12天，每隔2～3天补充培养基；所述培养基包括基础组分和添加组分，培养基以1L计算时，所述基础组分为LonzaX
‑
VIVO15无血清培养基，所述添加组分加入量为：白细胞介素300～900IU/mL，胎牛血清2%～5%体积分数，转铁蛋白50～100ng/mL，重组人胰岛素1～10mg/mL,孕酮10～50nmol/L，第一促进成分150～300mg/mL，第二促进成分100～150mg/mL。
[0005]优选的，所述第一促进成分包括半枝莲提取物、南瓜籽提取物和角鲨烷，此三者重量之比为1～2:3～5:1～3。
[0006]优选的，所述第二促进成分包括水溶亚麻籽提取物、人参皂苷和桦褐孔菌提取物，此三者重量之比为3～9:1～3:1～3。
[0007]优选的，所述白细胞介素包括IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18和IL
‑
21，此五者重量之比为20:1:1:5:3。
[0008]优选的，S1中细胞密度为1
×
106cell/mL。
[0009]优选的，S2中细胞密度为5
×
105cell/mL。
[0010]综上所述，本申请具有以下有益效果：1、由于本申请采用第一促进组分提高细胞的抗氧化性，并通过第二促进组分配合其他组分为细胞增殖提供影响，从而有效提高细胞存活率和增殖倍数。
[0011]2、本申请中第二促进组分采用植物源的水溶亚麻籽提取物、人参皂苷和桦褐孔菌提取物，人参皂苷对CAR
‑
T细胞进行活化，水溶亚麻籽提取物提供营养物质，然后桦褐孔菌提取物延长细胞的分裂代数，从而增加细胞寿命，有效提高细胞存活率和增殖率。
[0012]3、本申请中第一促进组分通过三种抗氧化成分复配，从而有效提高细胞的抗氧化性能，延长细胞寿命，提高细胞的存活率和增殖率。
具体实施方式
[0013]本申请中各原料均可通过市售获得。
[0014]制备例制备例1本制备例公开一种培养基的制备方法，其包括以下步骤：S1、将IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18和IL
‑
21按照重量比20:1:1:5:3进行混合；S2、培养基以1L计算，添加组分为：S1中制得的白细胞介素300IU/mL，胎牛血清2%体积分数，转铁蛋白50ng/mL，重组人胰岛素1mg/mL,孕酮10nmol/L，半枝莲提取物30mg/mL，南瓜籽提取物90mg/mL，角鲨烷30mg/mL，水溶亚麻籽提取物60mg/mL，人参皂苷20mg/mL和桦褐孔菌提取物20mg/mL，剩余由基础组分补足，均匀混合制得培养基。
[0015]制备例2本制备例公开一种培养基的制备方法，其包括以下步骤：本制备例公开一种培养基的制备方法，其包括以下步骤：S1、将IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18和IL
‑
21按照重量比20:1:1:5:3进行混合；S2、培养基以1L计算，添加组分为：S1中制得的白细胞介素600IU/mL，胎牛血清3%体积分数，转铁蛋白75ng/mL，重组人胰岛素5mg/mL,孕酮30nmol/L，半枝莲提取物45mg/mL，南瓜籽提取物120mg/mL，角鲨烷60mg/mL，水溶亚麻籽提取物75mg/mL，人参皂苷25mg/mL和桦褐孔菌提取物25mg/mL，剩余由基础组分补足，均匀混合制得培养基。
[0016]制备例3本制备例公开一种培养基的制备方法，其包括以下步骤：本制备例公开一种培养基的制备方法，其包括以下步骤：S1、将IL
‑
2、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18和IL
‑
21按照重量比20:1:1:5:3进行混合；S2、培养基以1L计算，添加组分为：S1中制得的白细胞介素900IU/mL，胎牛血清5%体积分数，转铁蛋白100ng/mL，重组人胰岛素10mg/mL,孕酮50nmol/L，半枝莲提取物60mg/mL，南瓜籽提取物150mg/mL，角鲨烷90mg/mL，水溶亚麻籽提取物90mg/mL，人参皂苷30mg/mL和桦褐孔菌提取物30mg/mL，剩余由基础组分补足，均匀混合制得培养基。
[0017]制备例4本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加第一促进成分。
[0018]制备例5本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加第二促进成分。
[0019]制备例6
本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加第一促进成分和第二促进成分。
[0020]制备例7本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加人参皂苷。
[0021]制备例8本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加桦褐孔菌提取物。
[0022]制备例9本制备例公开一种培养基的制备方法，其与制备例2不同之处在于：未添加人参皂苷和桦褐孔菌提取物。
[0023]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CAR
‑
T细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将CAR
‑
T细胞加入培养基中，调整细胞密度为(1～10)
×
106cell/mL，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠进行细胞培养，细胞培养的条件为5％CO2、37℃；S2、培养72小时后按照(1～10)
×
105cell/mL的细胞密度补加培养基；S3、继续培养8～12天，每隔2～3天补充培养基；所述培养基包括基础组分和添加组分，培养基以1L计算时，所述基础组分为LonzaX
‑
VIVO15无血清培养基，所述添加组分加入量为：白细胞介素300～900IU/mL，胎牛血清2%～5%体积分数，转铁蛋白50～100ng/mL，重组人胰岛素1～10mg/mL,孕酮10～50nmol/L，第一促进成分150～300mg/mL，第二促进成分100～150mg/mL。2.根据权利要求1所述的靶向CAR
‑
T细胞的培养方法，其特征在于：所述第一促进...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泰华，
申请(专利权)人：赛尔医学科技山东有限公司，
类型：发明
国别省市：