核酸样本保存试剂及其应用制造技术

本说明书提供了一种核酸样本保存试剂及其应用。该核酸样本保存试剂包括酸度稳定剂、细胞裂解剂、核酸酶抑制剂、核酸保护剂、分子防腐剂、烷化剂和氧化还原指示剂。烷化剂包括二溴丁烯二醇、达卡巴嗪、六甲蜜胺、二溴甘露醇中的一种或几种。烷化剂是二溴丁烯二醇，所述二溴丁烯二醇在所述核酸样本保存试剂中的终浓度为0.01m/v％

【技术实现步骤摘要】
核酸样本保存试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及技术分子生物学领域，具体涉及一种核酸样本保存试剂及其应用。

技术介绍

[0002]核酸是所有生物的遗传物质，按照化学组分可分为脱氧核糖核苷酸(DNA)和核糖核苷酸(RNA)。核酸是生命体的主要遗传信息载体，在科研和临床实验中研究非常广泛，保持核酸结构的稳定和完整性是研究的前提。DNA分子构象为双链双螺旋结构，稳定性较好，但处在高温、强酸强碱、脱氧核糖核酸酶(Dnase)、暴露空气、微生物酶解等环境条件下，仍然极容易降解。RNA分子构象为单链结构，极不稳定，且核糖核酸酶(Rnase)在环境中广泛存在，极难完全清除，十分容易降解。目前，核酸检测技术已经广泛的应用到了传染病领域和癌症领域的筛查、诊断和精准用药和治疗中，并且多种检测方法并存。常见的核酸检测技术包括荧光定量PCR法、恒温扩增法、基因芯片法、分子诊断POCT技术等。然而，若核酸降解将直接导致检测结果假阴性或者靶标基因漏检。因此，保证核酸样品在采集、保存和运输的过程不降解是完成相关产品高灵敏度检测的关键因素。
[0003]传统的科研实验室和临床研究机构多采用DEPC处理水或其它无核酸酶水进行稀释、溶解和洗脱核酸，并储存在超低温冰箱(
‑
20℃～
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80℃)中进行保护核酸，运输也必须在低温冰箱或者添加干冰运输。传统的运输方法缺点是主要是保存效果差，RNA易降解，运输成本高，消耗大、操作较繁琐。另一些市面上已提及的保存试剂/方法主要用于较大量样本的保存和运输，且其室温保存时间较短，对于微量样本无法起到较好的作用，且无法在室温较长时间保存；不包含氧化还原指示剂，无法有效提示用户试剂是否有效的风险；对于样本(尤其是微量样本)浓度的检测的灵敏度有限，导致判断核酸样本保存试剂的保存效果不佳。
[0004]有鉴于此，有必要对生物样本的核酸样本保存试剂予以改进，以解决上述问题。

技术实现思路

[0005]根据本说明书的一个方面，提供了一种核酸样本保存试剂，其特征在于，包括酸度稳定剂、细胞裂解剂、核酸酶抑制剂、核酸保护剂、分子防腐剂、烷化剂和氧化还原指示剂。
[0006]在一些实施例中，所述烷化剂包括二溴丁烯二醇、达卡巴嗪、六甲蜜胺、二溴甘露醇中的一种或几种。
[0007]在一些实施例中，所述烷化剂是二溴丁烯二醇，所述二溴丁烯二醇在所述核酸样本保存试剂中的终浓度为0.01m/v％
‑
1m/v％。
[0008]在一些实施例中，所述酸度稳定剂包括柠檬酸
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柠檬酸三钠、盐酸
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柠檬酸钠、磷酸氢二钠
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柠檬酸、Tris
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HCl、醋酸铵
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醋酸、醋酸钠
‑
醋酸中的一种或几种；
[0009]在一些实施例中，所述细胞裂解试剂包括硫酸铵、异硫氰酸胍、季铵盐、二甲基亚砜、盐酸胍、曲拉通、NP
‑
40、尿素、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂中的一种或几种；所述核酸酶抑制剂包括乙二胺四乙酸四钠、二硫苏糖醇、三(2
‑
羧乙基)膦、8
‑
羟基喹啉、氧钒核
糖核苷复合物中的一种或几种；所述核酸保护剂包括蔗糖、明胶、牛血清白蛋白、甲酰胺、海藻糖中的一种或几种；所述分子防腐剂包括Proclin
‑
300、叠氮钠、甲酰胺、无水乙醇、次氯酸钠中的一种或几种。
[0010]在一些实施例中，所述氧化还原指示剂为溴酚蓝、橙黄G、品红、中性红或姬姆氏色素。
[0011]在一些实施例中，所述酸度稳定剂为盐酸
‑
柠檬酸钠，终浓度为0.01mM
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1mM；所述细胞裂解试剂为硫酸铵，终浓度为10w/w％
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60w/w％；所述核酸酶抑制剂为乙二胺四乙酸四钠或8
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羟基喹啉，乙二胺四乙酸四钠的终浓度为0.5mM
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100mM，8
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羟基喹啉的终浓度为0.01w/w％
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2w/w％；所述核酸保护剂为海藻糖，终浓度为0.1w/w％
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12w/w％；所述分子防腐剂为Proclin
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300，终浓度为0.02w/w％
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0.05w/w％；所述烷化剂为二溴丁烯二醇，终浓度为0.01w/v％
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0.1w/v％；所述氧化还原指示剂为品红，终浓度为0.0001w/w％
‑
0.01w/w％。
[0012]在一些实施例中，所述核酸样本保存试剂能够使核酸样本在常温下至少保存7天，其中，所述核酸样本在保存7天与保存0天时的Ct值的差值小于或等于1.5，所述Ct值通过荧光实时定量PCR确定。
[0013]在一些实施例中，所述核酸样本在保存7天与保存0天时的Ct值的差值小于1.3。
[0014]根据本说明书的一个方面，提供了核酸样本保存试剂在常温保存核酸样本中的应用。
具体实施方式
[0015]如本申请和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
[0016]根据本说明书的一方面，提供了一种核酸样本保存试剂。不仅适用于大量样本的保存，且适用于微量样本的保存，在高效的核酸酶抑制剂的作用下保证核酸不降解，且成本低廉，保存环境中酸碱度稳定，可实现较长时间内室温保存和运输离体样本。该核酸样本保存试剂中加入的烷化剂，可以裂解细胞，破坏核苷酸链，断裂核苷酸链，增加基因组碎片化程度，使得仅有少量样本存在的情况下，也能精准地检测到样本中核酸的含量，保证了核酸样本保存试剂的保存效果，以免由于样本含量太少而检测到的含量不够精准导致无法衡量核酸样本保存试剂的效果。该核酸样本保存试剂中加入的氧化还原指示剂，可以指示保存试剂中是否变质，以免由于试剂变质影响核酸保护效果。例如，品红可以被强氧化物质氧化褪色，当品红褪色时，则此时溶液中还原环境已被破坏，试剂性能无法保证，应废弃处理。
[0017]本专利技术的核酸样本可以包括拭子、痰液、微量细胞、病毒、细菌等人体/环境中的核酸样本。在一些实施例中，所述核酸样本可以是微量样本。这里的微量样本指的是提取的核酸浓度低于1ng，病毒拷贝数≤1
×
105copies/mL或荧光定量Ct值在28
‑
40之间的样本。在一些实施例中，所述核酸样本可以是非微量样本，例如，核酸浓度大于10ng的样本、病毒拷贝数大于1
×
105copies/mL的样本。
[0018]核酸样本保存试剂可以包括酸度稳定剂、细胞裂解剂、核酸酶抑制剂、核酸保护剂、分子防腐剂、烷化剂、氧化还原指示剂等或其组合。在一些实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸样本保存试剂，其特征在于，包括酸度稳定剂、细胞裂解剂、核酸酶抑制剂、核酸保护剂、分子防腐剂、烷化剂和氧化还原指示剂。2.根据权利要求1所述的核酸样本保存试剂，其特征在于，所述烷化剂包括二溴丁烯二醇、达卡巴嗪、六甲蜜胺、二溴甘露醇中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的核酸样本保存试剂，其特征在于，所述烷化剂是二溴丁烯二醇，所述二溴丁烯二醇在所述核酸样本保存试剂中的终浓度为0.01m/v％
‑
1m/v％。4.根据权利要求1所述的核酸样本保存试剂，其特征在于，所述酸度稳定剂包括柠檬酸
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柠檬酸三钠、盐酸
‑
柠檬酸钠、磷酸氢二钠
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柠檬酸、Tris
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HCl、醋酸铵
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醋酸、醋酸钠
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醋酸中的一种或几种；所述细胞裂解试剂包括硫酸铵、异硫氰酸胍、季铵盐、二甲基亚砜、盐酸胍、曲拉通、NP
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40、尿素、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂中的一种或几种；所述核酸酶抑制剂包括乙二胺四乙酸四钠、二硫苏糖醇、三(2
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羧乙基)膦、8
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羟基喹啉、氧钒核糖核苷复合物中的一种或几种；所述核酸保护剂包括蔗糖、明胶、牛血清白蛋白、甲酰胺、海藻糖中的一种或几种；所述分子防腐剂包括Proclin
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300、叠氮钠、甲酰胺、无水乙醇、次氯酸钠中的一种或几种。5.根据权利要求1所述的核酸样本保存试剂，其特征在于，所述氧化还原指示剂为品红、靛蓝胭脂红、二苯胺磺酸钠。6.根据权利要求1<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王量，陈东，徐欢，凌世生，
申请(专利权)人：杭州安旭生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：