一种黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用。本发明专利技术提供的黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用，黄芩苷经体内外药理实验证明，在6μg/ml剂量下，体外能显著抑制人类脐静脉内皮细胞的增殖、迁移、成管能力，体内能抑制氧诱导视网膜病变小鼠模型的视网膜新生血管形成，可用于相关视网膜新生血管性疾病的治疗，具有良好的应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
signaling pathway.Drug Des Devel Ther.2016；103071
‑
3081.Liang,XC,Hagino,N,Guo,SS,et al.Therapeutic efficacy of Stephania tetrandra S.Moore for treatment of neovascularization of retinal capillary(retinopathy)in diabetes
‑‑
in vitro study.PHYTOMEDICINE.2002；9(5)
‑
377
‑
84)。目前，尚无有关黄芩苷在治疗视网膜新生血管性疾病中的报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]本专利技术提供了一种黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用。
[0011]所述黄芩苷(Baicalin，5,6
‑
Dihydroxy
‑4‑
oxo
‑2‑
phenyl
‑
4H
‑1‑
benzopyran
‑7‑
ylβ
‑
D
‑
Glucopyranosiduronic Acid)是由传统中药黄芩分离纯化得到，其分子式为C
21
H
18
O
11
，黄色针状结晶，熔点231
‑
233℃，具有如下分子结构：
[0012][0013]所述黄芩苷的药物剂量在3μg/ml时开始发挥作用，6μg/ml时抑制作用显著且无毒性。
[0014]视网膜新生血管性疾病是眼科最常见的眼底病之一，在多种因素的介导下，视网膜血管内皮细胞代谢及功能紊乱，血管生成失调会破坏氧和营养物质的输送，导致代谢供需失衡，最终导致病理性视网膜新生血管。
[0015]视网膜新生血管是指在包括损伤、感染、缺氧等多种刺激的诱导下，血管内皮细胞功能发生紊乱，异常增殖形成新生血管，与血管内皮生长因子的生成和释放有关。
[0016]所述黄芩苷可以制成药物制剂。
[0017]所述药物制剂的剂型为注射剂，给药方式为玻璃体腔注射。
[0018]研究发现，黄芩苷能有效降低基质金属蛋白酶
‑
2(MMP
‑
2)、基质金属蛋白酶
‑
9(MMP
‑
9)、血管紧张素II和血管内皮生长因子(VEGF)的表达，进而明显减少视网膜无灌注区、新生血管簇数量。
[0019]由于采用上述技术方案，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0020]本专利技术提供的黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用，黄芩苷经体内外药理实验证明，在6μg/ml剂量下，体外能显著抑制人类脐静脉内皮细胞的增殖、迁移、成管能力，体内能抑制氧诱导视网膜病变小鼠模型的视网膜新生血管形成，可用于相关视网膜新生血管性疾病的治疗，具有良好的应用前景。
附图说明
[0021]图1是黄芩苷在体外抑制人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的示意图。
[0022]图2是黄芩苷在体外抑制人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的示意图。
[0023]图3是黄芩苷在体外抑制人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)成管的示意图。
[0024]图4是黄芩苷在体内抑制氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型的视网膜新生血管形成的示意图。
具体实施方式
[0025]为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例对本专利技术做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。
[0026]实施例1
[0027]1.实验方法
[0028]1.1受试细胞：人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。
[0029]1.2试验药物与试剂
[0030]黄芩苷购自上海源叶生物科技有限公司(Shanghai yuanye Bio
‑
Technology Co.,Ltd)，货号B20570。
[0031]1.3分组与造模
[0032]称取30mg，溶解于5ml DMSO，使用超声混匀配制成6mg/ml的储存液，
‑
20℃保存。
[0033]低浓度药物处理组(3μg/ml)：将黄芩苷储存液(6mg/ml)溶解稀释于内皮细胞培养基(ECM)配置成3μg/ml的工作液(黄芩苷：ECM＝1:2000)；
[0034]高浓度药物处理组(6μg/ml)：将黄芩苷储存液(6mg/ml)溶解稀释于内皮细胞培养基(ECM)配置成6μg/ml的工作液(黄芩苷：ECM＝1:1000)；
[0035]对照组(0μg/ml)：将DMSO 1:1000溶解稀释于ECM中配置成0μg/ml的对照组。
[0036]1.4治疗方法
[0037]黄芩苷工作液处理细胞。
[0038]1.5实验步骤
[0039]细胞增殖实验(EDU assay)
[0040]第一步，细胞种孔：将密度约为80％～90％的HUVEC细胞进行消化，并细胞计数，每孔取约3
×
104个细胞种至96孔板中，放置于37℃5％CO2孵箱中孵育，待细胞贴壁后，弃原培养液，对照组加入新鲜培养基，处理组加入ECM稀释的黄芩苷溶液(6μg/ml)，放置于37℃5％CO2孵箱中孵育24～48小时。
[0041]第二步，Edu标记：将Cell
‑
Light
TM Edu Apollo567试剂盒中试剂A(EdU，5
‑
Ethynyl
‑
2'
‑
deoxyuridine)与ECM全培培养基按照1:1000的比例稀释；将96孔板中HUVEC原细胞培养基弃掉，并换为上述稀释液，每孔100μl，放置于37℃5％CO2孵箱中孵育约2小时。
[0042]第三步，细胞固定：将96孔板中培养基吸除，PBS溶液清洗细胞，清洗3次，每次5
‑
10分钟。清洗结束后，每孔加入100μl 4％多聚甲醛溶液，室温下固定30分钟，弃细胞固定液；细胞固定完成后每孔加入2mg/ml甘氨酸溶液100μl，室温下脱色摇床5
‑
10分钟，弃甘氨酸溶液；每孔加入100μl PBS溶液清洗细胞，5分钟；每孔加入100μl 0.5％TritonX
‑
100渗透剂，
室温摇床清洗5分钟；每孔加入100μl PBS清洗细胞，室温脱色摇床清洗5分钟，弃PBS。
[0043]第四步，Apollo染色：染色前首先将试剂B(反应缓冲液)、试剂C(催化剂溶液)、试剂D(荧光染料本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的黄芩苷在制备抑制视网膜新生血管的药物中的应用，其特征在于，所述黄芩苷是由传统中药黄芩分离纯化得到，其分子式为C
21
H
18
O
11
，黄色针状结晶，熔点231
‑
233℃，具有如下...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈炜，宋洪元，李青，张昊瑞，桂潇，聂政，蔡畅，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：