一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法技术

本发明专利技术属于多肽合成技术领域，本发明专利技术提供了一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法。本发明专利技术方法包括在活化剂系统的存在下，将树脂固相载体与Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成
，尤其涉及一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法。

技术介绍

[0002]普卡那肽(Plecanatide)是一种由16个氨基酸组成的口服多肽，同时也是一种鸟苷酸环化酶
‑
C激动剂，在临床上可刺激肠道分泌肠液和加速排便。目前与普卡那肽合成有关的专利及文献在构建肽序上分别有固相法、固液结合法；在形成两个二硫键的方法有一步成环法和分步成环法。其中，一步成环法虽然工艺简单，但是选择性差，杂质多，不环保，质量差；分步成环法优化了成环的选择性，但是步骤繁琐，影响了整体收率。

技术实现思路

[0003]为克服现有技术中存在的上述缺陷，本专利技术提供了一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法。
[0004]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0005]本专利技术提供了一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法，包括如下步骤：
[0006](1)在活化剂系统的存在下，将树脂固相载体与Fmoc
‑
Leu
‑
OH偶联，得Fmoc
‑
Leu
‑
树脂；
[0007](2)通过固相合成法，按照普卡那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联的氨基酸顺序为：Fmoc
‑
Cys(Acm)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Mob)
‑
OH、Fmoc
‑
Ala
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Acm)
‑
OH、Fmoc
‑
Leu
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Mob)
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH；
[0008](3)脱除Cys(Acm)的Acm保护基，同时进行第一次环化反应，得一环肽树脂；
[0009](4)脱除Cys(Mob)上的Mob保护基，同时进行第二次环化反应，得二环肽树脂；
[0010](5)脱Fmoc保护基，裂解，纯化，冻干后得到普卡那肽。
[0011]优选的，步骤(1)中所述活化剂系统由DIEA和DMAP组成，所述DIEA和DMAP的体积比为1～3:1。
[0012]优选的，步骤(1)中所述活化剂系统、树脂固相载体、Fmoc
‑
Leu
‑
OH的用量比为5～8mL:20～25g:15～20g。
[0013]优选的，步骤(1)中所述树脂固相载体包括AM树脂固相载体或2
‑
CTC树脂固相载体。
[0014]优选的，步骤(2)中所述的固相合成方法具体为：
[0015](2.1)采用去保护液脱除Fmoc
‑
Leu
‑
树脂上的Fmoc保护基，得到H
‑
Leu
‑
树脂；
[0016](2.2)在偶联剂系统的存在下，H
‑
Leu
‑
树脂和Fmoc保护且侧链保护的半胱氨酸偶联得到Fmoc
‑
Cys(Acm)
‑
Leu
‑
树脂；
[0017](2.3)重复步骤(2.1)、(2.2)，按照普卡那肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联。
[0018]优选的，步骤(2.1)中所述去保护液由哌啶、DBU和DMF组成，所述哌啶、DBU和DMF的体积比为1～3:1～3:95～100。
[0019]优选的，步骤(2.2)中所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂包括BOP/HOBt/NMM、DIC/HOBt/DIEA、DIC/HOAt/DIEA、HBTU/HOBt/DIEA、HCTU/NMM、HATU/DIEA、TATU/HOAt/DIEA、DIC/HOBt/DMAP中的一种或几种，所述反应溶剂包括DCM、DMF、NMP、DMSO中的一种或几种。
[0020]优选的，步骤(3)中所述第一次环化反应的条件为：由碘和过氧化叔丁醇按照2～4g:70～75mL的用量比混合作为反应试剂，20～30℃下反应1～1.5h。
[0021]优选的，步骤(4)中所述第二次环化反应的条件为：由20～30vt％的双氧水作为反应试剂，20～30℃下反应0.8～1.2h。
[0022]优选的，步骤(5)中所述脱Fmoc保护基采用的试剂为去保护液，所述去保护液由哌啶、DBU和DMF组成，所述哌啶、DBU和DMF的体积比为1～3:1～3:95～100；所述裂解采用裂解液进行，所述裂解液由TFA、EDT、H2O、TIS按照90～95:1～3:1～3:1～3的体积比组成；所述纯化为采用高效液相色谱法进行纯化。
[0023]本专利技术中的缩写字母含义：
[0024]Fmoc：芴甲氧羰基
[0025]Acm：乙酰胺甲基
[0026]Mob：对甲氧基苄基
[0027]DBU：1,8
‑
二氮杂二环十一碳
‑7‑
烯
[0028]DMF：N，N
′‑
二甲基甲酰胺
[0029]BOP：苯并三氮唑
‑1‑
基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐
[0030]HOBt：1
‑
羟基苯骈三唑
[0031]NMM：N
‑
甲基吗啡啉
[0032]DIC：N，N
′‑
二异丙基碳化二亚胺
[0033]DIEA：N，N
′‑
二异丙基乙胺
[0034]HOAt：1
‑
羟基
‑7‑
氮杂苯并三氮唑
[0035]HBTU：2
‑
(7
‑
偶氮苯并三氮唑)
‑
四甲基脲六氟磷酸酯
[0036]HCTU：6
‑
氯苯并三氮唑
‑
1,1,3,3
‑
四甲基脲六氟磷酸酯
[0037]HATU：2
‑
(7
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在活化剂系统的存在下，将树脂固相载体与Fmoc
‑
Leu
‑
OH偶联，得Fmoc
‑
Leu
‑
树脂；(2)通过固相合成法，按照普卡那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联的氨基酸顺序为：Fmoc
‑
Cys(Acm)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Mob)
‑
OH、Fmoc
‑
Ala
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Acm)
‑
OH、Fmoc
‑
Leu
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Mob)
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH；(3)脱除Cys(Acm)的Acm保护基，同时进行第一次环化反应，得一环肽树脂；(4)脱除Cys(Mob)上的Mob保护基，同时进行第二次环化反应，得二环肽树脂；(5)脱Fmoc保护基，裂解，纯化，冻干后得到普卡那肽。2.根据权利要求1所述的一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法，其特征在于，步骤(1)中所述活化剂系统由DIEA和DMAP组成，所述DIEA和DMAP的体积比为1～3:1。3.根据权利要求1所述的一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法，其特征在于，步骤(1)中所述活化剂系统、树脂固相载体、Fmoc
‑
Leu
‑
OH的用量比为5～8mL:20～25g:...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丰，金晶，顾海东，钱君超，吴正颖，刘成宝，陈志刚，
申请(专利权)人：苏州科技大学，
类型：发明
国别省市：