本发明专利技术提供了一种具有抑制真菌活性的类芽孢杆菌及其应用。本发明专利技术的Paenibacillus relictisesami hw1菌株是从土壤中分离出来，此前的研究未有Paenibacillus relictisesami含有脂肽类抗生素基因以及抑制真菌活性的报道。脂肽类抗生素基因筛选实验表明该菌株具有杆菌霉素D合成基因。黑曲霉双培养实验表明该菌株对黑曲霉具有显著的抑制效果。另外该菌株除了具有杆菌霉素D合成基因外，不含有其他脂肽类抗生素基因。该菌株用于生产杆菌霉素D可以有效简化发酵后的纯化和分离步骤。本发明专利技术的类芽孢杆菌菌株可以直接应用于生物防治和抗真菌药物研发，而且该菌株在发酵生产菌霉素D领域具有广阔的应用前景。领域具有广阔的应用前景。领域具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种具有抑制真菌活性的类芽孢杆菌及其应用
[0001]本专利技术属于植物保护学科中的生物防治和病原微生物学中的抗真菌药物领域，具体涉及一种具有抑制真菌活性的类芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
[0002]据统计，全世界范围内真菌每年感染数十亿人，大约导致150万人死亡。目前，在治疗真菌感染方面主要有四种抗真菌类药物(咪唑类、棘白菌素类、多烯类和嘧啶类)，但同时对这些药物不断上升的耐药性演变为一个主要问题。真菌还可导致植物常见的茁病、白粉病、锈病和黑粉病，占植物病害总数的80％。常规防治真菌病害的农药多是化学农药，化学农药虽然能够防治农林病虫害，也会对人畜和环境产生危害。
[0003]芽孢杆菌和类芽孢杆菌是重要的生防菌，可以产生多种抑菌抗菌物质如脂肽类抗生素。常见的脂肽类抗生素有，杆菌霉素D、杆菌霉素A、芬芥素A、芬芥素B、伊枯草菌素A、伊枯草菌素B、伊枯草菌素C、伊枯草菌素D、表面活性素AA、表面活性素AB、抗霉枯草菌素F和抗霉枯草菌素A。其中芬芥素和伊枯草菌素具有优越的抗真菌能力。伊枯草菌素对黄瓜的细菌性叶斑病和软腐病、小麦的赤霉病具有很好的防控作用。此外，伊枯草菌素对引起足癣的最常见的致病菌红色毛癣菌具有较强抑制作用。由于脂肽发酵生产和分离纯化存在多种技术难题，至今还没有单一方法可以把任何一种脂肽物质从复杂的混合物中提取并纯化出来，往往通过多种方法联合使用。本专利技术专利中的杆菌霉素D(Bacillomyicn D)属于伊枯草菌素类，具有广阔的应用前景。目前还没有Paenibacillus relictisesami hw1菌株相关脂肽类抗生素的报道。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是提供一种具有抑制真菌活性的类芽孢杆菌及其应用。
[0005]本专利技术第一个提供的是一种具有抑制真菌活性的类芽孢杆菌
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Paenibacillus relictisesami hw1。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供上述Paenibacillus relictisesami hw1在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。
[0007]优选，是Paenibacillus relictisesami hw1的发酵液在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。
[0008]发酵液制备方法如下：将Paenibacillus relictisesami hw1菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，pH7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料，发酵完成即获得Paenibacillus relictisesami hw1发酵液；所述的发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，KH2PO
4 0.3g，K2HPO
4 0.7g,MgSO
4 0.45g，NaCl 5g，余量为水；所述的补料为：每升含有葡萄糖10g，蛋白胨5g，余量为水。
[0009]进一步优选是Paenibacillus relictisesami hw1的发酵液的上清液在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。
[0010]所述的发酵液的上清液是将Paenibacillus relictisesami hw1发酵液离心获取上清液。
[0011]优选，所述的真菌是黑曲霉。
[0012]本专利技术的第三个目的是提供Paenibacillus relictisesami hw1在制备杆菌霉素D中的应用。
[0013]将Paenibacillus relictisesami hw1菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，pH7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料，发酵完成即获得Paenibacillus relictisesami hw1发酵液；所述的发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，KH2PO
4 0.3g，K2HPO
4 0.7g,MgSO
4 0.45g，NaCl 5g，余量为水；所述的补料为：每升含有葡萄糖10g，蛋白胨5g，余量为水；发酵液完成离心10000g 30min，除去菌体，上清液用6mol/L HCl调pH＝2，4℃静置12h，8000g离心20min，沉淀用纯甲醇萃取，9h后进行8000g离心10min，得上清，用4mol/L NaOH将萃取液pH调至7.0，过0.22uM滤膜即获得杆菌霉素D粗品。
[0014]本专利技术的Paenibacillus relictisesami hw1菌株是从土壤中分离出来，此前的研究未有Paenibacillus relictisesami含有脂肽类抗生素基因以及抑制真菌活性的报道。脂肽类抗生素基因筛选实验表明该菌株具有杆菌霉素D合成基因。黑曲霉双培养实验表明该菌株对黑曲霉具有显著的抑制效果。另外该菌株除了具有杆菌霉素D合成基因外，不含有其他脂肽类抗生素基因。该菌株用于生产杆菌霉素D可以有效简化发酵后的纯化和分离步骤。本专利技术的类芽孢杆菌菌株可以直接应用于生物防治和抗真菌药物研发，而且该菌株在发酵生产菌霉素D领域具有广阔的应用前景。
[0015]Paenibacillus relictisesami hw1公开于https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/OP808342，GenBank序列号为OP808342.1，本申请人保证自申请日起20年内向公众提供。
附图说明
[0016]图1是抗脂肽基因检测凝胶电泳结果；
[0017]图2是黑曲霉抑制实验结果。
具体实施方式
[0018]以下实施例是对本专利技术的进一步解释和说明，而不是对本专利技术的限制。
[0019]实施例1Paenibacillus relictisesami hw1发酵液制备方法
[0020]将Paenibacillus relictisesami hw1菌液以体积比2％的接种量接种于50ml肉汤培养基(LB)中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，发酵培养基制备方法为：蛋白胨10g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，KH2PO
4 0.3g，K2HPO
4 0.7g,MgSO
4 0.45g，NaCl 5g，加蒸馏水定容至1000ml，调pH至7.0，115℃灭菌30min；在250r/min，pH7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料，补料
制备方法为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，加蒸馏水定容至1000ml，115℃灭菌30min；发酵完成即获得Paenibacillus relictisesami h本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.类芽孢杆菌Paenibacillus relictisesami hw1。2.权利要求1所述的Paenibacillus relictisesami hw1在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是Paenibacillus relictisesami hw1的发酵液在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵液制备方法如下：将Paenibacillusrelictisesami hw1菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，pH7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料，发酵完成即获得Paenibacillus relictisesami hw1发酵液；所述的发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，KH2PO
4 0.3g，K2HPO
4 0.7g,MgSO
4 0.45g，NaCl 5g，余量为水；所述的补料为：每升含有葡萄糖10g，蛋白胨5g，余量为水。5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，是Paenibacillus relictisesami hw1的发酵液的上清液在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴海洋，吴金川，李清心，
申请(专利权)人：广东省科学院生物与医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：
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