一种特利加压素的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种特利加压素的制备方法，包括如下步骤：(1)将树脂与9个被保护的氨基酸依次进行反应，得到线性多肽树脂；(2)将步骤(1)的线性多肽树脂通过碘固相氧化环合，得到氧化环合后的多肽；(3)将步骤(2)中的氧化环合后的多肽与被保护的甘氨酸或被保护的三甘肽反应，得到特利加压素

【技术实现步骤摘要】
一种特利加压素的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种多肽药物合成方法，特别涉及特利加压素的制备方法。

技术介绍

[0002]特利加压素是一种血管加压素类似物，主要作用是收缩内脏血管平滑肌，减少内脏血流量，从而减少门静脉血流、降低门静脉压，其为人工合成的多肽。特利加压素在体内被氨基肽酶水解三甘氨酰基后转化为活性代谢产物，具有释放缓慢、无需持续静脉给药的特点，目前主要用于食管静脉曲张破裂出血、门静脉高压以及肝肾综合征的治疗。在医药领域中具有广泛的应用。
[0003]由于医药领域对特利加压素的需求很大，通过优化特利加压素的工艺，提升其品质，降成本是很有必要的，目前合成特利加压素的方法有很多，如专利CN1865282B以RinkAmide 树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，以TBTU或HBTU/HOBt为缩合剂，依次逐个接上氨基酸，最后一个肽链采用Boc
‑
G1y
‑
OH；然后加入切肽试剂进行切肽，加入乙醚沉淀，获得还原型粗品，加入碱性物质，在pH为7.5～10.0的条件下通空气氧化，获得氧化型粗品，最后采用C
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(或C8)柱进行分离纯化，获得目标产物。但是，该方法的收率偏低，总收率仅为：21％。
[0004]专利文献CN102408471A使用了保护氨基酸片段G1y
‑
Gly
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G1y为原料，避免了杂质的产生。方法包括固相多肽法制特利加压素线性肽树脂、酸解得到特利加压素线性肽粗品、在液相中氧化后得到特利加压素粗品、纯化得特利加压素纯品，其中固相多肽法为：氨基树脂通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应片段的Fmoc
‑
保护氨基酸，制备特利加压素线性肽树R
‑
X
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Cys(R2)
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Tyr(tBu)
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Phe
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Gln(R3)
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Asn(R3)
‑
Cys(R2)
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Pro
‑
Lys(Boc)G1y
‑
树脂，其中，X片段为Gly
‑
GlyG1y，接入X片段时仅用1次固相偶联合成反应。但是该方法步骤繁琐，且杂质含量较高。
[0005]专利文献CN110172086A公开了一种通过固相氧化法制得赖氨加压素的方法：1)由 Fmoc
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Gly
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OH与RinkAmide树脂出发，得到替代度在某一范围内的Fmoc
‑
Gly
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RinkAmide树脂；2)将Fmoc
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Gly
‑
RinkAmide树脂采用逐一偶联的方式合成得到线性赖氨加压素
‑
RinkAmide 树脂；3)将线性赖氨加压素
‑
RinkAmide树脂采用固相氧化合成赖氨加压素
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RinkAmide树脂； 4)对赖氨加压素
‑
RinkAmide树脂进行裂解，所制得的赖氨加压素粗肽再经过高压液相纯化、冻干得到赖氨加压素。其中氧化剂用量为101.6g固体碘/200ml乙腈水，氧化4小时。但是，在该技术中，水不适合作为固相合成的溶剂，容易水解，并且碘用量大，另外，氧化时间偏长。
[0006]因此，亟需进一步开发一种兼顾操作简便，步骤简单，收率高、杂质含量少的特利加压素的制备方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种特利加压素的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0008](1)将氨基树脂与9个被保护的氨基酸依次进行反应，得到线性多肽树脂；
[0009](2)将步骤(1)的线性多肽树脂通过碘固相氧化环合，得到氧化环合后的多肽；
[0010](3)将步骤(2)中氧化环合后的多肽与被保护的甘氨酸或被保护的三甘肽反应，得到特利加压素
‑
树脂；
[0011](4)使特利加压素脱离步骤(3)中的特利加压素树脂，即得特利加压素。
[0012]本专利技术的特利加压素分子结构如下：
[0013][0014]线性特利加压素含有两个半胱氨酸，半胱氨酸的两个巯基通过分子内氧化环合，形成二硫键，形成特利加压素。若在特利加压素合成过程中，两分子线性特利加压素间的巯基形成二硫键，则得到的是特利加压素二聚体，并且由于分子间形成二聚体的位置的不同，特利加压素可能存在两种二聚体杂质。分子间的二硫键是一种不可逆的化学键，一旦形成后二聚体后，不能转化回分子内氧化环合。因此二聚体的存在，极大的影响了特利加压素制备的收率和产品的含量和纯度。并且由于二聚体分子结构与特利加压素相似，因此在后续的纯化中也很难去除。
[0015]本专利技术在完成半胱氨酸链接后，立即构建分子内二聚体，并通过控制氧化环合条件增加分子内二硫键形成的效率，避免了后续工艺过程中，由于副反应的存在增加了二聚体等杂质的产生。
[0016]进一步的，所述步骤(1)中，被保护的氨基酸的侧链可被保护基团保护，所述保护基团包括：Boc，Trt，Acm或tBu中的一种或多种。
[0017]进一步的，所述步骤(1)中树脂包括RinkAmide树脂、RinkAmide
‑
MBHA树脂、 RinkAmide
‑
BHA树脂、RinkAmide
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AM树脂或Sieber树脂，优选为RinkAmide
‑
AM树脂。
[0018]进一步的，所述步骤(1)中，被保护的氨基酸为α氨基酸。
[0019]进一步的，所述步骤(1)中，所述被保护的氨基酸为Fomc
‑
保护氨基酸；
[0020]优选的，所述Fmoc
‑
保护氨基酸包括Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Lys(R1)
‑
OH、Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(R2)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(R3)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(R4)
‑
OH、Fmoc
‑
Phe
‑
OH和Fmoc
‑
Tyr(R5)
‑
OH，其中R1为Boc，R2为Trt或Acm，R3为Trt，R4为Trt，R5为tBu。
[0021]优选的，所述Fmoc
‑
保护氨基酸依次为：Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Pro
‑
OH、 Fmoc
‑
Cys(Tr本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特利加压素的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将氨基树脂与9个被保护的氨基酸依次进行反应，得到线性多肽树脂；(2)将步骤(1)的线性多肽树脂通过碘固相氧化环合，得到氧化环合后的多肽；(3)将步骤(2)中氧化环合后的多肽与被保护的甘氨酸或被保护的三甘肽反应，得到特利加压素
‑
树脂；(4)使特利加压素脱离步骤(3)中的特利加压素
‑
树脂，即得特利加压素。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，被保护的氨基酸的侧链可被保护基团保护，所述保护基团包括：Boc，Trt，Acm或tBu中的一种或多种。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述被保护的氨基酸为Fomc
‑
保护氨基酸；优选的，所述Fmoc
‑
保护氨基酸包括Fmoc
‑
Gly
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OH、Fmoc
‑
Lys(R1)
‑
OH、Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(R2)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(R3)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(R4)
‑
OH、Fmoc
‑
Phe
‑
OH和Fmoc
‑
Tyr(R5)
‑
OH，其中R1为Boc，R2为Trt或Acm，R3为Trt，R4为Trt，R5为tBu。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：(1
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1)加入脱保护试剂溶液，使氨基树脂脱保护，之后加入Fmoc
‑
Gly
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OH、缩合试剂、活化试剂和第一溶剂，使Fmoc
‑
Gly
‑
OH与树脂发生缩合反应，生成Fmoc
‑
Gly
‑
树脂；(1
‑
2)按照步骤(1
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1)的方法，将Fmoc
‑
Gly
‑
树脂依次连接Fmoc
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Lys(R1)
‑
OH、Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(R2)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(R3)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(R4)
‑
OH、Fmoc
‑
Phe
‑
OH、Fmoc
‑
Tyr(R5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈阳，张磊，周玓，孙银玲，张硕，张丽美，郭阳，
申请(专利权)人：远大生命科学辽宁有限公司，
类型：发明
国别省市：