一种沔城藕的鉴定方法技术

一种沔城藕的鉴定方法，包括以下步骤：1)取沔城藕，取样干燥，提取标准基因组；2)使用引物对对标准基因组进行PCR扩增，得到标准PCR产物，3)将标准PCR产物在6％聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，银染后拍照记录，统计电泳条带得到标准图谱；4)取待鉴定藕样品，取样干燥，提取样品基因组；5)使用步骤2)引物对样品基因组进行PCR扩增，得到样品PCR产物；6)样品PCR产物在6％聚丙烯先凝胶中进行电泳，银染后拍照记录，统计电泳条带得到样品图谱；7)样品图谱和步骤3)得到的标准图谱进行比较，若包含标准图谱，待鉴定藕样品为沔城藕，否则为其他藕。本发明专利技术可以实现快速、高效鉴定沔城藕的目的。高效鉴定沔城藕的目的。高效鉴定沔城藕的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种沔城藕的鉴定方法


[0001]本专利技术涉及生物鉴定领域，特别涉及一种沔城藕的鉴定方法。

技术介绍

[0002]莲(Nelumbo nucifera)属于莲科(Nelumbonaceae)，处于双子叶系统发育的基部，在植物进化研究上具有重要地位。莲藕是我国重要的水生经济植物，其地下茎是人们喜爱的蔬菜，其叶、茎、莲籽还是不可多得的药用和加工用轻工原料，极具开发前景。莲藕在我国广泛种植，湖北、江苏、浙江、湖南、江西、福建、安徽、上海、四川、广东、广西等省市均有种植。其中湖北、江苏两省种植面积较大，均在100万亩左右。而湖北省素有“千湖之省”、“鱼米之乡”的美誉，湖北省莲藕已经从整体上形成了一个富有地方特色和优势的品牌，莲藕产业已经成为湖北省农业的支柱产业之一。莲藕在生长过程中受到品种、生长环境及成熟度等因素影响，个体在感官品质、营养品质和加工品质等方面都表现出较大差异。沔城盛产莲藕，素有莲乡藕城之称。沔城莲藕，粗壮肥大，肉质松脆，纹理细腻，味道鲜美。吃生的，甜津津，凉丝丝；吃熟的，粉朴朴，香喷喷。真乃“生吃如秋梨般清甜，熟食如板栗般粉扑”。莲子则甘甜爽口，且有清心健脾、补气益中之功效，因而被人们誉为“白璧莲参”，具有极大的市场开发应用潜力。而在开发应用过程中，品种权的保护具有重要意义。
[0003]目前，对沔城藕的鉴定主要依靠形态学标记、细胞学标记和生物化学标记等对遗传多样性进行分析，这些标记均有各种缺点。
[0004]因此，如何设计一种准确、高效的沔城藕鉴定方法，是本领域技术人员亟待解决的问题。r/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种沔城藕的鉴定方法，实现快速、高效鉴定沔城藕的目的。
[0006]本专利技术的技术方案是：一种沔城藕的鉴定方法，包括以下步骤：
[0007]1)取沔城藕，取样干燥，提取标准基因组；
[0008]2)使用如下引物对对标准基因组进行PCR扩增，得到标准PCR产物，
[0009]NL
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P8F:5'
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CTTCGCAGAGTTCATCCACA
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3'
[0010]NL
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P8R:5'
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TCTTGTCAGGCTAACGCAAG
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3'
[0011]NL
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P35F:5'
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TTTGAACTGAGTCGTGTCCG
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3'
[0012]NL
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P35R:5'
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CTCCAGTCGGTGCCATATTT
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3'
[0013]NL
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P23F:5'
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AGAACGTTGATGGGAAGGTG
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3'
[0014]NL
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P23R:5'
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CCGACTACGATACCGGAAAA
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3'
[0015]NL
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15F:5'
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CACCCTTCAACGGTTCCTAA
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3'
[0016]NL
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15R:5'
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TTCAGTTGTGCCTATCGCTG
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3'
[0017]NL
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2F:5'
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GCAGACGAACTGCCTCTACC
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3'
[0018]NL
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2R:5'
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AACTTCCCTCCGCCATTTTA
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3'
[0019]NL
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71F:5'
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TACCAACATAGGTGGGTGGG
‑
3'
[0020]NL
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71R:5'
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TTGGTAAGCGGAATTTGGAC
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3'；
[0021]3)将标准PCR产物在6％聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，银染后拍照记录，统计电泳条带得到标准图谱；
[0022]4)取待鉴定藕样品，取样干燥，提取样品基因组；
[0023]5)使用步骤2)引物对样品基因组进行PCR扩增，得到样品PCR产物；
[0024]6)样品PCR产物在6％聚丙烯先凝胶中进行电泳，银染后拍照记录，统计电泳条带得到样品图谱；
[0025]7)样品图谱和步骤3)得到的标准图谱进行比较，若包含标准图谱，待鉴定藕样品为沔城藕，否则为其他藕。
[0026]进一步的，步骤1)所述取样，为沔城藕的嫩叶片，所述干燥，为将样品置于装有变色硅胶的自封袋中保存至少七天。
[0027]进一步的，步骤1)使用TIANGEN
‑
305型试剂盒提取标准基因组。
[0028]进一步的，步骤2)PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，变性、退火、延伸重复循环35次，72℃延伸10min，PCR扩增反应体系为：模板DNA 1μL，双蒸水3μL，前引物、后引物各0.5μL，2
×
Taq Master mix 5μL。
[0029]进一步的，步骤3)标准图谱中有条带记为1，无条带记为0，缺失记为2，用EXCLE进行整理。
[0030]进一步的，步骤4)所述取样，为待鉴定藕样品的嫩叶片，所述干燥，为将待鉴定样品置于装有变色硅胶的自封袋中保存至少七天。
[0031]进一步的，步骤4)使用TIANGEN
‑
305型试剂盒提取样品基因组。
[0032]进一步的，步骤5)PCR扩增的反应程序和反应体系同步骤2)。
[0033]进一步的，步骤6)样品图谱中有条带记为1，无条带记为0，缺失记为2，用EXCLE进行整理。
[0034]采用上述技术方案具有以下有益效果：
[0035]1、本专利技术设计了6对特定序列的引物，利用PCR扩增技术，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环，将目的片段进行扩增放大，从而确定沔城藕特有的分子信息，并通过电泳的形式得到沔城藕特有的电泳谱图，再通过相同特定序列引物与待鉴定样品结合得到的PCR扩增产物的电泳谱图进行比对判断，可快速确定待鉴定样品是否为沔城藕，整个鉴定过程高效、快速，且成本较低，不受外界环境干扰，是一种可靠的鉴定方法。
[0036]2、本专利技术PCR扩增程序中，通过94℃预变性5min，94℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，变性、退火、延伸重复循环35次，72℃延伸10min，可将待扩目的基因扩增放大几百万倍，满足电泳制备电泳谱图的需求。
[0037]3、本专利技术标准图谱和样品图谱中条带记为1，无条带记为0，缺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种沔城藕的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取沔城藕，取样干燥，提取标准基因组；2)使用如下引物对对标准基因组进行PCR扩增，得到标准PCR产物，NL
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P8F:5'
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CTTCGCAGAGTTCATCCACA
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3'NL
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P8R:5'
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TACCAACATAGGTGGGTGGG
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3'NL
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71R:5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王壮，刁英，黄登艳，
申请(专利权)人：重庆福林农业生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：