GCK基因突变的细胞模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术技术领域，尤其是涉及一种GCK基因突变的Hela细胞模型及其构建方法和应用，其中，构建方法包括以下步骤：针对GCK基因需要突变的目的基因位点，设计gRNA靶点；根据gRNA靶点合成插入片段，并构建敲除质粒；将敲除质粒转染至Hela细胞，得到GCK基因突变的Hela细胞模型；其中，所述gRNA靶点的序列如SEQ ID No.1所示。经活性检测及测序鉴定得到的GCK基因突变的Hela细胞模型，为一稳定可靠的模型，可用于由GCK基因突变所致的单基因糖尿病的诊断和精确分型，进而实现个体化治疗，给予患者最优化治疗方案的基础，对于疾病进程、预后的判断及对家族遗传指导具有重要的意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
GCK基因突变的细胞模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物技术
，尤其是涉及一种GCK基因突变的Hela细胞模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种受遗传和环境等因素影响的慢性代谢性疾病，糖尿病及其并发症给我国的经济发展和人民健康带来沉重负担。
[0003]在糖尿病患者中，约1
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4％的患者为单基因糖尿病，这类患者的糖尿病是由单个基因异常改变而引起胰岛β细胞功能失常所致，且单基因糖尿病的发生几乎不受环境的影响。单基因糖尿病主要包括新生儿糖尿病(NDM)和青少年发病的成人型糖尿病(MODY)。其中，青少年发病的成人型糖尿病是一组常染色体显性遗传病，MODY家系中携带突变基因的健康成员的患病风险高达95％，且同一家系的患者临床表现高度相似。
[0004]在欧洲，MODY占总糖尿病人群的1％
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2％。内分泌学界认为，至少有6种不同基因中的一种突变导致了MODY，包括编码葡萄糖激酶(glucokinase，GCK)的基因(MODY2)和编码5个转录因子的基因：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种GCK基因突变的Hela细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、针对GCK基因需要突变的目的基因位点，设计gRNA靶点；S2、根据gRNA靶点合成插入片段，并构建敲除质粒；S3、将敲除质粒转染至Hela细胞，得到GCK基因突变的Hela细胞模型；其中，所述gRNA靶点的序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的GCK基因突变的Hela细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述gRNA靶点对应的正向引物GCK
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g3
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FP的序列如SEQ ID No.2所示，所述gRNA靶点对应的反向引物GCK
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g3
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RP的序列如SEQ ID No.3所示。3.根据权利要求2所述的GCK基因突变的Hela细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述插入片段具体包括：利用正向引物GCK
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g3
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FP和反向引物GCK
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g3
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RP合成的引物合成引物二聚体。4.根据权利要求3所述的GCK基因突变的Hela细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述构建敲除质粒具体包括：使用DNA ligase将酶切好的pU6
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gRNA
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cas9质粒与引物二聚体连接起来，得到敲除质粒。5.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊高威，王清涛，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：