一种水产品农药残留生物可给性的评价方法技术

本发明专利技术提供一种水产品农药残留生物可给性的评价方法，该方法包括：对水产品样品模拟口腔咀嚼、模拟胃消化和模拟肠消化，得到消化食糜；分别对所述消化食糜和水产品样品采用气相色谱法进行农药残留检测，计算水产品中农药通过胃肠消化后的生物可给性；还包括进行细胞吸收转运实验，进一步评价水产品中农药跨细胞膜后的生物可给性。本发明专利技术方法简单便捷，可操作性强，能够用来评价水产品中农药残留在人体内的生物可给性，为进一步评估水产品中农药残留的生物利用度提供参考。留的生物利用度提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种水产品农药残留生物可给性的评价方法


[0001]本专利技术涉及食品安全
，尤其涉及一种水产品农药残留生物可给性的评价方法。

技术介绍

[0002]在水产品的养殖过程中为了防止寄生虫等各种病虫害，常常喷洒各种有机农药，如拟除虫菊酯、有机氯、有机磷、氨基甲酸酯类农药等。由于富集效应，有机农药会沿食物链不断地在生物体内累积，最终通过食物摄入而进入人体内。但食物中所含有的有害物质的量并不等于人体消化过程中可能会吸收的有害物质的量。
[0003]在之前的研究中，多通过动物实验评估有害物质在人体的代谢情况，但动物模型周期长、所需费用高，而且涉及到动物伦理等问题。近年来发展起来的体外模型，由于其简单、便捷、易操作等优势，现已被应用到食品、药品等领域。体外模拟消化模型主要包括静态体外消化模型、半动态体外消化模型以及动态体外消化模型。其中半动态体外消化模型以及动态体外消化模型均需要专业的设备，不利于实验室之间的推广。静态体外消化模型由于其可操作性较强，且不需要专业的设备而被广泛使用。但现有的静态体外消化模型有很多，各种消化模型之间均有不同，且没有统一的标准。据此建立一种可以直接评价水产品中某一农药危害成分的方法便尤为重要。生物可给性是评价最大经口生物利用度的指标，是指从消化道的食物基质中释放出来的可被吸收的物质的量。通过测定食物本身所含有的有害物质的量以及消化后的消化液中的有害物质的量，更为直观地反映有害物质在生物体内的吸收情况，评估生物体通过食物摄入某种有害物质的所造成的健康风险。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种水产品农药残留生物可给性的评价方法。该方法简单便捷，可操作性强，能够用来评价水产品中农药残留在人体内的生物可给性，为进一步评估水产品中农药残留的生物利用度提供参考。
[0005]本专利技术提供一种水产品农药残留生物可给性的评价方法，包括：对水产品样品模拟口腔咀嚼、模拟胃消化和模拟肠消化，得到消化食糜；分别对所述消化食糜和水产品样品采用气相色谱法进行农药残留检测，计算水产品中农药通过胃肠消化后的生物可给性；还包括进行细胞吸收转运实验，进一步评价水产品中农药跨细胞膜后的生物可给性。
[0006]本专利技术中，通过采用上述体外模拟消化方法，能够更便捷地评估水产品中农药的生物可给性，尤其是，通过细胞吸收实验，从而进一步评估农药的生物利用度。
[0007]根据本专利技术提供的所述的水产品农药残留生物可给性的评价方法，所述模拟口腔咀嚼采用的模拟唾液pH值为7.0
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0.2，消化时间为0.5～3min；所述模拟胃消化采用向模拟胃液中逐步加入盐酸，消化时间为1.5～3.5h，所述模拟肠消化采用的模拟肠液pH值为7.0
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0.2，消化时间为1.5～3h。
[0008]本专利技术中，通过采用上述口腔
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胃肠模拟消化方法，能够使得食物充分消化，为了
能够更好地模拟体内胃消化过程中食物所处的生理环境，在体外模拟消化的过程中不断地调整胃pH，使之更贴合真实的消化过程。
[0009]根据本专利技术提供的所述的水产品农药残留生物可给性的评价方法，包括：
[0010]1)样品的前处理：将水产品进行预处理，得到水产品样品；
[0011]2)配制电解质溶液：所述电解质溶液选自包含KCl、KH2PO4、NaHCO3、NaCl、MgCl2(H2O)6和(NH4)2CO3中的一种或多种，所述电解质溶液分为口腔电解质溶液、胃相电解质溶液和肠相电解质溶液；
[0012]3)模拟口腔咀嚼：将水产品样品绞成浆状，得到肉糜；将所述肉糜与口腔相模拟消化液混合，于36～38℃下消化1～4min，得口腔相消化产物；所述口腔模拟消化液包括口腔电解质溶液和唾液淀粉酶，若食物中不包含淀粉或淀粉含量极低可不添加淀粉酶。
[0013]本专利技术中，优选将5g肉糜与1mL 5
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的口腔模拟消化溶液混合，添加0.05mL 0.15M的CaCl2(H2O)2溶液，并添加水至1
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浓度的口腔相模拟消化液，混合均匀，于36～38℃下消化1～4min；本专利技术通过采用上述优选食物与口腔模拟消化液的比例，能够更好地进行上述肉糜的模拟口腔咀嚼从而更贴合人体口腔咀嚼过程。
[0014]4)模拟胃消化：将所述口腔相消化产物与所述胃相电解质溶液混合，加入部分盐酸溶液，加入CaCl2(H2O)2溶液、水、胃蛋白酶溶液、胃脂肪酶溶液，再分步依次加入剩余盐酸溶液，加酸完成后，再消化15～40min，得到胃消化食糜；
[0015]本专利技术中，优选取口腔相消化产物10mL，加入2mL的口腔电解质溶液，加入预估盐酸总量20％的盐酸溶液(浓度为1M)，加入0.01mL0.15M的CaCl2(H2O)2溶液，加入预实验过程中预估的需补充加入的水；接着加入1ml猪胃蛋白酶溶液，使猪胃蛋白酶活性达到2000U/mL；加入1ml胃脂肪酶溶液，使胃脂肪酶活性达到60U/mL；开始计时，并立即加入预估盐酸总量10％的盐酸溶液(浓度为1M)，之后每间隔一定时间加入预估盐酸总量10％的盐酸溶液(浓度为1M)，间隔时间根据预估胃消化时长计算；加酸完成后消化15～40min，胃消化结束；本专利技术通过采用上述优选口腔模拟消化液和消化pH设定，能够更贴合人体胃中的生理环境从而更好的进行胃消化模拟。
[0016]5)模拟肠消化：将所述胃消化食糜依次与NaOH溶液、所述肠相电解质溶液混合，加入猪胰酶和胆汁盐的混合溶液，加入CaCl2(H2O)2溶液，滴加NaOH溶液调整pH至7.0
±
0.2，进行肠消化，得到消化食糜；本专利技术中，优选取20mL的胃消化食糜，先加入2ml左右的1M的NaOH溶液，加入4mL的5
×
的eSIF溶液，其次加入上述猪胰酶和胆汁盐的混合溶液，加入0.01mL的CaCl2(H2O)2溶液，滴加1M的NaOH溶液调整pH至7.0
±
0.2；肠消化时间为2h；本专利技术通过采用上述优选消化酶和胆汁盐，能够更贴合人体肠内生理环境，从而更好的进行肠消化模拟。
[0017]6)未消化水产品中农药残留检测；取步骤1)中水产品样品，进行绞碎和前处理，通过色谱学方法进行农药残留检测；
[0018]7)消化水产品食糜中农药残留检测；将步骤6)中的消化食糜按照所述色谱学方法进行农药残留检测；
[0019]8)计算胃肠消化后生物可给性B：根据步骤6)
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7)得到的检测结果进行计算，得到所述生物可给性B，对生物可给性B进行评价；
[0020]9)细胞吸收转运实验：采用NCM460细胞进行细胞活力实验，分析农药对细胞活力的影响；然后通过Transwell进行农药的跨膜转运实验，计算转运试验后NCM460细胞
Transwell下室中农药浓度和上室中农药浓度，得到农药的跨膜转运效率C；
[0021]10)计算水产品中农药残留经胃肠
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细胞消化吸收后的生物可给性A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水产品农药残留生物可给性的评价方法，其特征在于，包括：对水产品样品模拟口腔咀嚼、模拟胃消化和模拟肠消化，得到消化食糜；分别对所述消化食糜和水产品样品采用色谱学方法进行农药残留检测，计算水产品中农药通过胃肠消化后的生物可给性；还包括进行细胞吸收转运实验，进一步评价水产品中农药跨细胞膜后的生物可给性。2.根据权利要求1所述的水产品农药残留生物可给性的评价方法，其特征在于，所述模拟口腔咀嚼采用的模拟唾液pH值为7.0
±
0.2，消化时间为0.5～3min；所述模拟胃消化采用向模拟胃液中逐步加入盐酸，消化时间为1.5～3.5h，所述模拟肠消化采用的模拟肠液pH值为7.0
±
0.2，消化时间为1.5～3h。3.根据权利要求1或2所述的水产品农药残留生物可给性的评价方法，其特征在于，包括：1)样品的前处理：将水产品进行预处理，得到水产品样品；2)配制电解质溶液：所述电解质溶液选自包含KCl、KH2PO4、NaHCO3、NaCl、MgCl2(H2O)6和(NH4)2CO3中的一种或多种，所述电解质溶液分为口腔电解质溶液、胃相电解质溶液和肠相电解质溶液；3)模拟口腔咀嚼：将水产品样品绞成浆状，得到肉糜；将所述肉糜与口腔相模拟消化液混合，于36～38℃下消化1～4min，得口腔相消化产物；所述口腔模拟消化液包括口腔电解质溶液与唾液淀粉酶；4)模拟胃消化：将所述口腔相消化产物与所述胃相电解质溶液混合，加入部分盐酸溶液，加入CaCl2(H2O)2溶液、水、胃蛋白酶溶液、胃脂肪酶溶液，再分步依次加入剩余盐酸溶液，加酸完成后，再消化15～40min，得到胃消化食糜；5)模拟肠消化：将所述胃消化食糜依次与NaOH溶液、所述肠相电解质溶液混合，加入猪胰酶和胆汁盐的混合溶液，加入CaCl2(H2O)2溶液，滴加NaOH溶液调整pH至7.0
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0.2，进行肠消化，得到消化食糜；6)未消化水产品中农药残留检测；取步骤1)中水产品样品，进行绞碎和前处理，通过色谱学方法进行农药残留检测；7)消化水产品食糜中农药残留检测；将步骤5)中的消化食糜按照所述色谱学方法进行农药残留检测；8)计算胃肠消化后的生物可给性B：根据步骤6)
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7)得到的检测结果进行计算，得到所述生物可给性B；9)细胞吸收转运实验：采用NCM460细胞进行细胞活力实验，分析农药对细胞活力的影响；然后通过Transwell进行农药的跨膜转运实验，计算转运试验后NCM460细胞Transwell下室中农药浓度和上室中农药浓度的比值，得到农药的跨膜转运效率C；10)计算水产品中农药残留经胃肠
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细胞消化吸收后的生物可给性A，如下...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪惠，焦亚丹，罗永康，谭雨青，刘春娥，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：