一株牛病毒性腹泻病毒BVDV-SDJN01及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株牛病毒性腹泻病毒BVDV

【技术实现步骤摘要】
一株牛病毒性腹泻病毒BVDV
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SDJN01及其应用


[0001]本专利技术涉及一株牛病毒性腹泻病毒BVDV
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SDJN01及其应用，属于牛病毒性腹泻病毒疫苗试剂领域。

技术介绍

[0002]牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的以犊牛腹泻、生长迟缓和继发感染其他疾病等为主要特征的一种急性、热性、接触性传染病。 BVDV可以感染多种宿主，在世界范围内广泛存在。根据BVDV 5
′
UTR、Npro 等基因序列的差异，可将BVDV分为2 种基因型，即BVDV1 和BVDV2型，BVDV1又分别进一步分为21个基因亚型（1a
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1u），BVDV2又分为4个基因亚型（2a
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2d）1a和1c亚型是我国近年流行的主要亚型，17省份已检出1c亚型，包括东部5省份。从生物学角度每个基因型可分为致细胞病变（CP）和不致细胞病变型（NCP）。BVDV 感染后机体可表现出典型的临床症状， 主要表现为发烧、腹泻、持续性感染、免疫抑制性疾病、呼吸系统疾病、生殖障碍和粘膜病等。BVDV 持续性感染牛后，可使牛终身带毒并排毒，形成了重要传染源，增加了BVD 诊断与防治的难度。目前，国际上用于BVD 的防控措施主要有两个，一是鉴别和扑杀持续性感染动物，其次是疫苗免疫。有研究显示，接种BVDV 疫苗后可以有效降低对生殖造成的不良影响，比如怀孕母牛的流产、降低持续性感染牛的产生等。因此筛选合适的疫苗是当下的研究重点。

技术实现思路

[0003]针对现阶段牛病毒性腹泻的治疗存在的问题，本专利技术对实验室分离的牛病毒性腹泻病毒BVDV
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SDJN01进行了鉴定，该毒株为BVDV1c亚型，是临床上常见的基因亚型，以该病毒为抗原制备出BVDV1c灭活疫苗，免疫原性较好，可刺激机体产生较高水平的中和抗体，该病毒株为我国牛病毒性腹泻病的有效防治提供一种有效的疫苗候选株。
[0004]本专利技术的技术方案如下：一株牛病毒性腹泻病毒，所述的病毒为牛腹泻病毒BVDV
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SDJN01，于2022年6月30日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：CCTCC NO: V202255。
[0005]上述牛病毒性腹泻病毒在制备治疗牛病毒性腹泻疫苗上的应用。
[0006]优选地，上述应用，包括以下步骤：（1）取纯化病毒接种于牛肾细胞将病毒扩大培养，收集病毒液，经甲醛灭活得到灭活的病毒液；（2）将灭活病毒液与氢氧化铝佐剂混合，制备灭活铝胶疫苗。
[0007]进一步地，将步骤（2）替换为：以灭活病毒液为水相，以白油、司盘80、硬脂酸铝为油相，制备油乳剂灭活疫苗为油乳剂疫苗或铝胶疫苗。
[0008]本专利技术的另一目的，保护一种牛病毒性腹泻病毒病灭活疫苗，采用上述牛病毒性腹泻病毒制备而成。
[0009]进一步地，所述的灭活疫苗中病毒含量≥106TCID50/m。
[0010]保藏信息保藏时间：2022
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06
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30保藏单位：中国典型培养物保藏中心保藏编号：CCTCC NO:V202255。
[0011]保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号分类命名：牛病毒性腹泻病毒
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1（Bovine viral diarrhea virus 1）。
[0012]本专利技术的有益效果牛病毒性腹泻病毒BVDV
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SDJN01株具有良好的免疫原性，应用其制备的灭活油乳剂疫苗安全可靠，免疫后能够产生较强免疫力，能够有效的预防牛病毒性腹泻病毒的流行和传播，降低本病造成的经济损失，有着广阔的应用前景。
附图说明
[0013]图1为BVDV
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SDJN01株接种MDBK细胞96h后的细胞病变（左图为接种BVDV
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SDJN01株96h后，与对照相比细胞无明显病变，右图为对照）；图2为BVDV
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SDJN01株 RT
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PCR鉴；其中M: DL2000 DNA Maker；1
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3: BVDV
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SDJN01株；图3为BVDV
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SDJN01全基因组核苷酸序列的系统进化分析。
具体实施方式
[0014]实施例1细胞培养用培养基，即含10%胎牛血清的DMEM培养基；其配制：取500ml液体DMEM培养基，按照10%的体积加入胎牛血清，充分混匀后备用。
[0015]1.1 BVDV的分离纯化及传代方法从山东省某大型牛场送检的犊牛腹泻粪便中，收集BVDV检测结果为阳性的样本，加入PBS，12000r/min离心2min，取上清，0.22μm滤膜过滤。将过滤后上清按照1 ml/10cm2培养皿的比例接种MDBK细胞，感作1.5h后，加入10ml培养基，置于37℃，5%CO2的培养箱中培养约72
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120h，无明显细胞病变（图1）。将含病毒的细胞培养物及上清反复冻融两次，PCR鉴定阳性（图2）后分装后于
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80℃保存。阳性病毒培养物有限稀释法纯化病毒，3
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5代后，收获病毒，该病毒为本专利技术的BVDV
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SDJN01株。
[0016]1.2 BVDV
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SDJN01株序列测定1.2.1引物设计：根据BVDV参考毒株（GenBank登录号MT079816.1）序列，将该病毒基因组分为9个片段进行扩增，引物序列如下：引物名称 序列（5
’‑3’
）BVDV
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1F GGAAAACACTCGTGTAC，如SEQ ID NO.2所示；BVDV
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1R TTGTACCAGTTGCACCAACC，如SEQ ID NO.3所示；BVDV
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2F CAAGTGAAAAGACCAACTAC，如SEQ ID NO.4所示；BVDV
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2R CCAAGGATACAGTCGTGG，如SEQ ID NO.5所示；BVDV
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3F GACACAACTGTAGTACAGA，如SEQ ID NO.6所示；BVDV
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3R ACCAGTTAAGCTCTACAAGTG，如SEQ ID NO.7所示；
BVDV
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4F ATGTATTACATGCACAGG，如SEQ ID NO.8所示；BVDV
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4R TATTGGTAGACAGACTCTGC，如SEQ ID NO.9所示；BVDV
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5F CAGTGATAGAGGAGATAG，如SEQ ID NO.10所示；BVDV
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5R TCTGTGATCATTGGGACATG，如SEQ ID NO.11所示；BVDV
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6F ATGG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一株牛病毒性腹泻病毒，其特征在于，所述的病毒为牛腹泻病毒BVDV
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SDJN01，于2022年6月30日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：CCTCC NO: V202255。2.权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒在制备治疗牛病毒性腹泻疫苗上的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）取纯化病毒接种于牛肾细胞将病毒扩大培养，收集病毒液，经甲醛灭活得到灭活的病毒液；（2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨少华，张亮，刘清政，陈玖，张伟，杨宏军，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：