一种高稳定性的慢病毒制剂及其制备方法和其应用技术

本发明专利技术涉及一种高稳定性的慢病毒制剂，所述慢病毒制剂包括滴度为1

【技术实现步骤摘要】
一种高稳定性的慢病毒制剂及其制备方法和其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种高稳定性的慢病毒制剂及其制备方法和其应用。

技术介绍

[0002]慢病毒由人类免疫缺陷病毒(HIV)去除env、vif、vpr、vpu、nef等毒性基因改造而来，并用作治疗性蛋白/多肽等物质的递送载体。慢病毒能感染大部分处于静止期的造血干细胞(HSCs)，用作有效的感染HSCs和基因治疗的工具，并用于造血干细胞移植治疗。慢病毒纯化后至施用之间需要保持一定的病毒量和感染性，这就需要慢病毒载体在长期储存过程中保持较高的病毒滴度。但即使将慢病毒存储在非常低的温度(如
‑
80℃)条件下，慢病毒载体也存在滴度明显下降的问题，且存储期间反复冻融也会使病毒滴度明显下降而失去感染力。现有的慢病毒制剂存在下述缺陷：一是需要加入蛋白(如人血清蛋白、白蛋白)或氨基酸，由此产生生物风险，且容易干扰后续检测；二是在低温储存12个月后病毒滴度会显著降低；三是在0℃以上环境下的热稳定性不佳，容易导致慢病毒变性失活。为此，开发稳定性好的慢病毒制剂成为研究热点，以满足临床需求。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种高稳定性的慢病毒制剂，所述慢病毒制剂包括滴度为1
×
105‑1×
10
12
TU/mL的慢病毒，20
‑
55％(w/v)的糖、0.1
‑
10％(w/v)的金属盐、0.1
‑
10％(w/v)的聚乙二醇PEG。
[0004]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒选自具有感染性的慢病毒病毒体，优选为人免疫缺陷病毒(HIV
‑
1或HIV
‑
2)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、马传染性脑炎病毒(EIAV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)中的任一种或其组合，更优选为LV2
‑
CAR
‑
19慢病毒。
[0005]本专利技术的优选技术方案中，所述糖选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、果聚糖、棉子糖的任一种或其组合。
[0006]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中的糖含量为25
‑
50％(w/v)，优选为30
‑
45％(w/v)。
[0007]本专利技术的优选技术方案中，所述金属盐选自NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2的任一种或其组合。
[0008]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中金属盐的含量为0.2
‑
8％(w/v)，优选为0.3
‑
1.2％(w/v)。
[0009]本专利技术优选的技术方案中，所述PEG的分子量为1000
‑
10000kDa，优选为2000
‑
6000kDa，更优选2000
‑
4000kDa。
[0010]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中PEG的含量为0.25
‑
8％(w/v)，优选为0.5
‑
2％(w/v)。
[0011]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂的pH值为6.5
‑
8.0，优选为7.0
‑
7.5。
[0012]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中包含30
‑
45％(w/v)的海藻糖、0.3
‑
1.2％(w/v)的KCl、0.5
‑
2％(w/v)的PEG。
[0013]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中还包括缓冲液，优选为Tris缓冲液、PBS缓冲液中的任一种或其组合。
[0014]本专利技术优选的技术方案中，所述缓冲液与慢病毒生产过程中纯化过滤步骤所用缓冲液相同。
[0015]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂中缓冲液的浓度为0.01
‑
1M，优选为0.05
‑
0.075M。
[0016]本专利技术优选的技术方案中，所述缓冲液中还含有等渗剂。
[0017]本专利技术优选的技术方案中，所述缓冲液的配置方法为，将0.75
‑
1M的tris缓冲液和1
‑
2M的NaCl溶液按体积比1:1混合后再加水稀释。
[0018]本专利技术优选的技术方案中，所述缓冲液为PBS缓冲液，包含2.5％的蔗糖，2mM的氯化镁和10mM的HFPFS。
[0019]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂是液体制剂或可制成注射用冻干制剂。
[0020]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂在低温
‑
70℃至
‑
80℃稳定至少3个月，优选6个月，更优选12个月。
[0021]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂在4℃和
‑
70℃反复冻融条件下储存3个月后，病毒滴度损失≤15％，优选≤10％，更优选≤5％。
[0022]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂在
‑
70℃冻存条件下储存3个月后，病毒滴度损失≤15％，优选≤10％，更优选≤5％。
[0023]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂在
‑
70℃冻存条件下储存12个月后，病毒滴度损失失≤15％，优选≤10％，更优选≤5％。
[0024]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂在
‑
70℃冻存条件下储存12个月后，病毒颗粒数损失≤15％，优选≤10％，更优选≤5％。
[0025]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒制剂的Tm大于45℃，优选大于50℃。
[0026]本专利技术的目的在于提供一种高稳定性的慢病毒制剂的制备方法，所述慢病毒制剂包括滴度为1
×
105‑1×
10
12
TU/mL的慢病毒，20
‑
55％(w/v)的糖、0.1
‑
10％(w/v)的金属盐、0.1
‑
10％(w/v)的PEG，所述慢病毒制剂的制备方法包括下述步骤：取慢病毒液，加入到含有糖、金属盐、PEG和缓冲液的慢病毒稳定剂中，混合均匀，即得。
[0027]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒液和慢病毒稳定剂的体积比为1:1
‑
5，优选为1:1
‑
3，更优选为1:1
‑
2。
[0028]本专利技术优选的技术方案中，所述慢病毒选自具有感染性的慢病毒病毒体，优选为人免疫缺陷病毒(HIV
‑
1或HIV
‑
2)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、马传染性脑炎病毒(EIAV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)中的任一种或其组合，更优选为LV2
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高稳定性的慢病毒制剂，其特征在于，所述慢病毒制剂包括滴度为1
×
105‑1×
10
12
TU/mL的慢病毒，20
‑
55％(w/v)的糖、0.1
‑
10％(w/v)的金属盐、0.1
‑
10％(w/v)的聚乙二醇PEG。2.如权利要求1所述的慢病毒制剂，其特征在于，所述糖选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、果聚糖、棉子糖的任一种或其组合，所述慢病毒制剂中糖的含量为25
‑
50％(w/v)，优选为30
‑
45％(w/v)。3.如权利要求1
‑
2任一项所述的慢病毒制剂，其特征在于，所述金属盐选自NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2的任一种或其组合，所述慢病毒制剂中金属盐的含量为0.2
‑
8％(w/v)，优选为0.3
‑
1.2％(w/v)。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的慢病毒制剂，其特征在于，所述PEG的分子量为1000
‑
10000kDa，优选为2000
‑
6000kDa，更优选2000
‑
4000kDa，所述慢病毒制剂中PEG的含量为0.25
‑
8％(w/v)，优选为0.5
‑
2％(w/v)。5.如权利要求1
‑
4任一项所述的慢病毒制剂，其特征在于，所述慢病毒制剂中包含30
‑
45％(w/v)的海藻糖、0.3
‑
1.2％(w/v)的KCl、0.5
‑
2％(w/v)的PEG。6.如权利要求1
‑
5任一项所述的高稳定性的慢病毒制剂的制备方法，其特征在于，所述慢病毒制剂包括滴度为1
×
105‑1×
10
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【专利技术属性】
技术研发人员：王歈，李贺平，张松平，杨延丽，孙磊，
申请(专利权)人：北京永泰生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：