牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质及其制备方法技术

本发明专利技术公开了牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质及其制备方法。本发明专利技术制备方法，包括如下步骤：S1、对奶牛给药阿莫西林，采集含有阿莫西林的牛奶；S2、将空白牛奶和所述含有阿莫西林的牛奶分别进行真空冷冻干燥，得到空白牛奶冻干粉和含有阿莫西林的牛奶冻干粉；S3、将所述空白牛奶冻干粉和所述含有阿莫西林的牛奶冻干粉粉碎后混匀，得到牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质。本发明专利技术还原了阿莫西林在奶牛体内完整的代谢过程，由奶牛的喂养开始制备基体标准物质；本发明专利技术牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质为阿莫西林的检测提供了实物基体标准物质，满足了阿莫西林残留检测中质量控制和方法学验证的需求，为检测结果的溯源性、可靠性和可比性提供保障。比性提供保障。

【技术实现步骤摘要】
牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质及其制备方法


[0001]本专利技术属于基体标准物质
，尤其涉及牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质及其制备方法。

技术介绍

[0002]阿莫西林，是一种最常用的半合成青霉素类广谱β
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内酰胺类抗生素，为一种白色粉末，在酸性条件下稳定。阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强。是目前应用较为广泛的口服半合成青霉素之一。阿莫西林通过抑制细菌胞壁黏肽合成而发挥杀菌作用。对肺炎链球菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌属、流感嗜血杆菌等具有良好的抗菌活性，在家禽家畜养殖过程中应用十分广泛。但过量使用会造成在动物性食品中的残留，会导致敏感人群的过敏反应和细菌耐药性等问题。而且GB
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2019中规定阿莫西林在奶中的最大残留限量仅有4μg/kg，故对于检测动物源性食品中的阿莫西林方法的需求十分迫切。
[0003]标准物质是一种或多种足够均匀、稳定并有特性量值用于评价方法，校准仪器设备，给材料赋值的物质。“基体标准物质”是具有最高计量学特征、用基准方法确定特性量值的标准物质。标准物质是国家或国际的测量标准和量值传递的载体，是建立测量量值溯源体系最有效的工具。标准物质具有均匀性、稳定性、重复性、不确定度和溯源性等特性，在时间上可以保持特性量值，在空间上可以传递和溯源量值。在兽药残留检测中，样品的基质成分十分复杂。单纯采用纯标准品制备的添加样品进行方法评价存在诸多弊端，例如在检测过程中存在明显的基质效应的干扰，运用基体标准物质对检测过程和结果进行质控和校准是最为有效的手段。因此基体标准物质的研制在兽药残留检测过程中具有十分重要的作用。
[0004]目前于国家标准物质资源共享平台上仅可以查询到阿莫西林纯度标准物质，并无涉及到阿莫西林的基体标准品。
[0005]阿莫西林的含量检测方法有紫外分光光度法、荧光光度法、酶联免疫吸附试验、高效液相色谱法以及超高效液相色谱
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串联质谱法。高效液相色谱法和超高效液相色谱
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串联质谱法较为常用，但高效液相色谱法灵敏度较低，若提高灵敏度需要进行衍生化，导致前处理繁琐，样品分析时间长，且流动相需要添加磷酸盐，易造成管路堵塞。因此，需要开发一种用于检测牛奶冻干粉中阿莫西林的分析方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质及其制备方法，牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质可以最大限度克服由于牛奶基质效应所引起的误差，且满足国内外对牛奶中阿莫西林残留实验室的质量控制及方法验证的需求，填补了阿莫西林基体标准物质的空白，为牛奶中阿莫西林残留分析提供了量值溯源的依据。
[0007]本专利技术提供的牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质的制备方法，包括如下步骤：
[0008]S1、对奶牛给药阿莫西林，采集含有阿莫西林的牛奶；
[0009]S2、将空白牛奶和所述含有阿莫西林的牛奶分别进行真空冷冻干燥，得到空白牛奶冻干粉和含有阿莫西林的牛奶冻干粉；
[0010]S3、将所述空白牛奶冻干粉和所述含有阿莫西林的牛奶冻干粉粉碎后混匀，得到牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质。
[0011]上述的制备方法中，所述给药阿莫西林的方式优选为肌肉注射，注射部位具体可为肩胛前部的肌肉和臀部肌肉；
[0012]所述给药阿莫西林的剂量可为60～80mg/kg/天，具体可为71mg/kg/天；可连续给药2～4天，具体可连续给药3天；
[0013]所述采集含有阿莫西林的牛奶的时间可在给药后的10～30分钟，具体可为15分钟。
[0014]所述采集的牛奶在
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80℃冷冻保存。
[0015]上述的制备方法中，所述真空冷冻干燥是一个稳定化的物质干燥过程，是将含水的物质先冻结成固态，而后使其中的水分从固态直接升华变成气态排除，以除去水分而保存物质的方法；
[0016]所述真空冷冻干燥的真空度可为3～50Pa，具体可为10～20Pa；冷肼温度可为
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80℃；时间可为60～96h，具体可为72h；
[0017]所述真空冻干的预冷温度可为
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24～
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40℃，具体可为
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30℃；
[0018]所述真空冻干的样品的厚度为10～20mm，优选15mm。
[0019]上述的制备方法中，所述粉碎的转速可为1500～4000r/min，具体可为2000r/min；所述粉碎的时间可为10～30s，具体可为15s；
[0020]所述粉碎后过筛，粒径可为0.8～1.0mm，具体可为0.9mm；
[0021]所述混匀可为混合机混匀，混匀时间可为1.5～4h，具体可为2h。
[0022]上述的制备方法中，所述牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质中阿莫西林的浓度可为4μg/kg。
[0023]本专利技术进一步提供了上述的制备方法制备得到的牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质。
[0024]本专利技术还提供了一种奶粉或牛奶冻干粉中阿莫西林的分析方法，包括如下步骤：
[0025](1)将待检测的奶粉或牛奶冻干粉和水混匀使所述奶粉或牛奶冻干粉还原为牛奶；将所述还原的牛奶脱脂后添加阿莫西林同位素内标，混匀；在所述混匀后的混合液中加入提取试剂进行提取，得到提取液；
[0026](2)将所述提取液通过固相萃取柱进行净化，收集洗脱液；
[0027](3)将所述洗脱液浓缩并定容后进行液相色谱
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质谱/质谱分析。
[0028]上述的分析方法中，步骤(1)中，所述脱脂的条件具体可为10000rpm离心10min；
[0029]步骤(1)中，所述阿莫西林同位素内标的浓度可为10mg/L；
[0030]步骤(1)中，所述提取试剂可为无水乙醇；
[0031]所述提取可为依次进行涡动、离心，收集上清液；
[0032]所述涡动的时间具体可为5min；
[0033]所述离心的温度可为4℃，转速具体可为3500rpm，时间具体可为15min；
[0034]步骤(2)中，所述固相萃取柱可为HLB固相萃取柱；通过所述HLB固相萃取柱后可用体积分数为90％乙腈的水溶液进行洗脱。
[0035]上述的分析方法中，所述阿莫西林以[M+H]+365.90>113.70为定量离子，[M+H]+365.90>207.70为定性离子；
[0036]所述阿莫西林同位素内标为阿莫西林
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d4；所述阿莫西林
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d4以[M+H]+369.90>114.00为定量离子。
[0037]上述的分析方法中，所述定容的步骤如下：每0.4mL浓缩液用水定容至1mL；完成定容后每1mL定容液添加3μL甲酸；
[0038]所述液相色谱
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质谱/质谱分析中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质的制备方法，包括如下步骤：S1、对奶牛给药阿莫西林，采集含有阿莫西林的牛奶；S2、将空白牛奶和所述含有阿莫西林的牛奶分别进行真空冷冻干燥，得到空白牛奶冻干粉和含有阿莫西林的牛奶冻干粉；S3、将所述空白牛奶冻干粉和所述含有阿莫西林的牛奶冻干粉粉碎后混匀，得到牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述给药阿莫西林的方式为肌肉注射；所述给药阿莫西林的剂量为60～80mg/kg/天，连续给药2～4天；所述采集含有阿莫西林的牛奶的时间在给药后的10～30分钟。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述真空冷冻干燥的真空度为3～50Pa，时间为60～96h；所述真空冷冻干燥的预冷温度为
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24～
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40℃；所述真空冷冻干燥的样品的厚度为10～20mm。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述粉碎的转速为1500～4000r/min，时间为10～30s；所述粉碎后过筛，粒径为0.8～1.0mm；所述混匀为仪器混匀，混匀时间为1.5～4h。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质中阿莫西林的浓度为4μg/kg。6.权利要求1
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5中任一项所述的制备方法制备得到的牛奶冻干粉阿莫西林基体标准物质。7.一种奶粉或牛奶冻干粉中阿莫西林的分析方法，包括如下步骤：(1)将待检测的奶粉或牛奶冻干粉和水混匀使所述奶粉或牛奶冻干粉还原为牛奶；将所述还原的牛奶脱脂后添加阿莫西林内标，混匀；在所述混匀后的混合液中加入提取试剂进行提取，得到提取液；(2)将所述提取液通过固相萃取柱进行净化，收集洗脱液；(3)将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏曦，李晓薇，杜静静，王成飞，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：