靶向肝癌细胞的基因药物及其制备方法及应用技术

本发明专利技术实施例公开了一种靶向肝癌细胞的基因药物及其制备方法及应用。一种靶向肝癌细胞的基因药物，在载体上构建报告基因HSV1

【技术实现步骤摘要】
靶向肝癌细胞的基因药物及其制备方法及应用


[0001]本专利技术实施例基因治疗
，具体涉及一种靶向肝癌细胞的基因药物及其制备方法及应用。

技术介绍

[0002]癌症已逐渐成为世界范围内一种重大的疾病，全球范围内每年大约有70万人因肝癌去世，其中约55％发生在中国，仅次于肺癌。但通过手术、放化疗后容易再复发或不能取得理想的疗效以及传统抗癌药物普遍存在药效短、需要多次给药等问题使得肿瘤治疗遇到很多难题，而基因治疗的出现打破了这种局限性，为肝癌诊疗开拓了一种新的方法并有望提升肝癌患者的生存率。
[0003]然而，缺乏肿瘤靶向性和目的基因在体表达比较低是传统肿瘤基因治疗临床转化所面临的主要问题，所以寻找安全、可靠的高肿瘤靶向性载体是目前肿瘤基因治疗研究的重中之重。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种靶向肝癌细胞的基因药物及其制备方法及应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
[0006]根据本专利技术实施例的第一方面，提供了一种靶向肝癌细胞的基因药物，在载体上构建报告基因HSV1
‑
TK和治疗基因Kallistatin。
[0007]进一步地，所述载体为自身互补重组腺相关病毒scrAAV3载体。
[0008]根据本专利技术实施例的第二方面，提供了如上所述的靶向肝癌细胞的基因药物的制备方法，包括如下步骤：
[0009](1)以含CAG启动子的pdsAAV为载体质粒，将报告基因HSV1
‑
TK和治疗基因Kallistatin插入多克隆位点，构建重组质粒pdsAAV
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin；
[0010](2)以pdsAAV
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin作为重组穿梭质粒，与自身互补重组腺相关病毒骨架质粒共转染293T细胞，包装生成自身互补重组腺相关病毒重组体。
[0011]进一步地，所述自身互补重组腺相关病毒重组体为scrAAV3
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin。
[0012]根据本专利技术实施例的第三方面，提供了一种包含如上所述的基因药物的生物制剂。
[0013]根据本专利技术实施例的第四方面，提供了如上所述的基因药物、或如上所述的生物制剂在制备治疗抗肝癌药物中的应用。
[0014]本专利技术实施例具有如下优点：
[0015]本专利技术首次利用肝癌靶向载体scrAAV3连接报告基因和治疗基因用于非侵入性监测肝癌基因治疗。本专利技术的ATK基因药物能够有效转染HepG2细胞，并对其增殖产生抑制作
用。肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤PET/CT成像表明scrAAV3载体具有明显的肝癌靶向性，ATK基因药物可用作靶向和非侵入性监测肝癌基因治疗。本专利技术的基因药物将为人们研究肝癌诊断治疗途径及致病机理和建立有效的靶向治疗监测体系提供新的方向，为临床诊疗一体化提供有力工具。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0017]图1为scrAAV3
‑
EGFP转染293T细胞后荧光照片及明场照片，A.荧光照片，B.明场照片；
[0018]图2为ATK转染HepG2细胞后报告基因与治疗基因的表达水平，其中，A.RT
‑
qPCR检测各组间HSV
‑1‑
TK和Kallistatin的mRNA表达情况，B.Western Blot检测各组间HSV
‑1‑
TK和Kallistatin的蛋白表达情况(*P＜0.05；n.s.P＞0.05)；
[0019]图3为MTS检测细胞的增殖能力(*P＜0.05)；
[0020]图4为裸鼠肝癌皮下移植瘤PEC/CT显像；
[0021]图5为
18
F
‑
FHBG在裸鼠皮下移植瘤模型中的生物分布；
[0022]图6为HepG2皮下移植瘤HE染色，其中，A.ATK组，B.对照组；
[0023]图7为HepG2皮下移植瘤免疫荧光染色；
[0024]图8为ATK组与对照组中HSV1
‑
TK和Kallistatin的表达情况，其中，A.RT
‑
qPCR检测ATK组与对照组中HSV1
‑
TK和Kallistatin的mRNA表达情况，B.Western Blot检测ATK组与对照组中HSV1
‑
TK和Kallistatin的蛋白表达情况。(*P＜0.05)。
具体实施方式
[0025]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]实施例1重组体scrAAV3
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin(ATK)的制备和鉴定
[0027]重组体ATK的制备方法：含CAG启动子的pdsAAV为载体质粒，将报告基因HSV1
‑
TK和治疗基因Kallistatin插入多克隆位点，构建重组质粒pdsAAV
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin，以pdsAAV
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin作为重组穿梭质粒，与自身互补重组腺相关病毒骨架质粒共转染293T细胞，包装生成自身互补重组腺相关病毒重组体scrAAV3
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin(ATK)，以scrAAV3
‑
EGFP为无效对照病毒。
[0028]重组体ATK的鉴定：将对照病毒scrAAV3
‑
EGFP转染至293T细胞，显微镜下观察荧光表达及细胞形态。
[0029]最终得到ATK病毒重组体的病毒滴度为5.2
×
10
11
v.g./mL，对照病毒scrAAV3
‑
EGFP的病毒滴度为3.5
×
10
10
v.g./mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向肝癌细胞的基因药物，其特征在于，在载体上构建报告基因HSV1
‑
TK和治疗基因Kallistatin。2.根据权利要求1所述的靶向肝癌细胞的基因药物，其特征在于，所述载体为自身互补重组腺相关病毒scrAAV3载体。3.权利要求1所述的靶向肝癌细胞的基因药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以含CAG启动子的pdsAAV为载体质粒，将报告基因HSV1
‑
TK和治疗基因Kallistatin插入多克隆位点，构建重组质粒pdsAAV
‑
HSV1
‑
TK
‑
Kallistatin；(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘旭昇，裴之俊，高燕，
申请(专利权)人：十堰市太和医院湖北医药学院附属医院，
类型：发明
国别省市：