一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法技术

本发明专利技术公开了一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，其技术方案是：包括以下步骤：S1，在操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；S2，将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清液颜色为无色或者淡黄色，弃除上清，得到胎盘组织；S3，将离心所得胎盘组织匀浆并且过滤，得到滤液a和沉淀物a；S4，将滤液a进行冷冻和室温融化，反复冻融多次；本发明专利技术的有益效果是：通过清洗、离心、过滤、冻融、沉淀、离心、酶解、离心、冻融、混合过滤得到人胎盘间充质干细胞外泌体，步骤简单清晰，操作方便，设备使用成本较低，制取周期较短，更加方便实际操作制备，取得的干细胞外泌体纯度较高，杂质极少，更加符合研究需要。符合研究需要。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法


[0001]本专利技术涉及干细胞外泌体提取领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法。

技术介绍

[0002]近年来，干细胞已经成为再生医学领域中具有广阔应用前景的一类细胞，且已经有一些干细胞新药获批上市。除了干细胞本身，源自于干细胞的外泌体也成为了医学界关注的热点，为疾病的治疗带来了新思路，但是目前来看，干细胞的外泌体的提取方法依然不容乐观，提取操作复杂且效率不高，难以制备纯净的干细胞外泌体。
[0003]为此，专利技术一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法很有必要。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，以解决提取操作复杂且效率不高，难以制备纯净的干细胞外泌体的问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，包括以下步骤：
[0006]S1，在操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；
[0007]S2，将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清液颜色为无色或者淡黄色，弃除上清，得到胎盘组织；
[0008]S3，将离心所得胎盘组织匀浆并且过滤，得到滤液a和沉淀物a；
[0009]S4，将滤液a进行冷冻和室温融化，反复冻融多次；
[0010]S5，将所得沉淀物a酶解，得酶解液A；
[0011]S6，将酶解液A离心，取得沉淀物b，并将沉淀物b加生理盐水后再离心，得沉淀A，向沉淀A中添加由胶原酶II、DNase和透明质酸酶组成的混合酶溶液，37℃酶解100min后，终止酶解，得酶解液B；
[0012]S7，将酶解液B滤液离心，得沉淀B；
[0013]S8，向沉淀B中添加注射用水，并且将混合溶液冷冻和室温融化，反复冻融多次，再将混合溶液离心，得到上清液A；
[0014]S9，将滤液a和上清液A混合，过滤，即得人胎盘间充质干细胞外泌体。
[0015]优选的，所述S4中冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3
‑
4次。
[0016]优选的，所述S5中酶解所用酶为胶原酶。
[0017]优选的，所述S6中沉淀A与混合酶的比例为5：1。
[0018]优选的，所述S6中混合酶包括：胶原酶II0.3％+DNA酶50U/ml+透明质酸钠酶400U/ml。
[0019]优选的，所述S7中离心转速为2000rpm并且离心时间为5min。
[0020]优选的，所述S8中注射用水为50
‑
500ml。
[0021]优选的，所述S8中冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3
‑
4次。
[0022]优选的，所述S8中离心转速为5000rpm并且离心时间为5min。
[0023]优选的，所述S1中操作台为无菌操作台。
[0024]本专利技术的有益效果是：
[0025]本专利技术通过清洗、离心、过滤、冻融、沉淀、离心、酶解、离心、冻融、混合过滤得到人胎盘间充质干细胞外泌体，步骤简单清晰，操作方便，设备使用成本较低，制取周期较短，更加方便实际操作制备，取得的干细胞外泌体纯度较高，杂质极少，更加符合研究需要。
具体实施方式
[0026]以下结合各个实施例对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0027]实施例1：
[0028]本专利技术提供的一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，包括以下步骤：
[0029]S1，在无菌操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；
[0030]S2，将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清液颜色为无色或者淡黄色，弃除上清，得到胎盘组织；
[0031]S3，将离心所得胎盘组织匀浆并且过滤，得到滤液a和沉淀物a；
[0032]S4，将滤液a进行冷冻和室温融化，反复冻融多次；
[0033]S5，将所得沉淀物a酶解，得酶解液A；
[0034]S6，将酶解液A离心，取得沉淀物b，并将沉淀物b加生理盐水后再离心，得沉淀A，向沉淀A中添加由胶原酶II、DNase和透明质酸酶组成的混合酶溶液，37℃酶解100min后，终止酶解，得酶解液B；
[0035]S7，将酶解液B滤液离心，得沉淀B；
[0036]S8，向沉淀B中添加注射用水，并且将混合溶液冷冻和室温融化，反复冻融多次，再将混合溶液离心，得到上清液A；
[0037]S9，将滤液a和上清液A混合，过滤，即得人胎盘间充质干细胞外泌体；
[0038]S4中冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3次；
[0039]S5中酶解所用酶为胶原酶；
[0040]S6中沉淀A与混合酶的比例为5：1，混合酶包括：胶原酶II0.3％+DNA酶50U/ml+透明质酸钠酶400U/ml；
[0041]S7中离心转速为2000rpm并且离心时间为5min；
[0042]S8中注射用水为50ml，冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3次，离心转速为5000rpm并且离心时间为5min。
[0043]实施例2：
[0044]本专利技术提供的一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，包括以下步骤：
[0045]S1，在无菌操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；
[0046]S2，将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清液颜色为无色或者淡黄色，弃除上清，得到胎盘组织；
[0047]S3，将离心所得胎盘组织匀浆并且过滤，得到滤液a和沉淀物a；
[0048]S4，将滤液a进行冷冻和室温融化，反复冻融多次；
[0049]S5，将所得沉淀物a酶解，得酶解液A；
[0050]S6，将酶解液A离心，取得沉淀物b，并将沉淀物b加生理盐水后再离心，得沉淀A，向沉淀A中添加由胶原酶II、DNase和透明质酸酶组成的混合酶溶液，37℃酶解100min后，终止酶解，得酶解液B；
[0051]S7，将酶解液B滤液离心，得沉淀B；
[0052]S8，向沉淀B中添加注射用水，并且将混合溶液冷冻和室温融化，反复冻融多次，再将混合溶液离心，得到上清液A；
[0053]S9，将滤液a和上清液A混合，过滤，即得人胎盘间充质干细胞外泌体；
[0054]S4中冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3次；
[0055]S5中酶解所用酶为胶原酶；
[0056]S6中沉淀A与混合酶的比例为5：1，混合酶包括：胶原酶II0.3％+DNA酶50U/ml+透明质酸钠酶400U/ml；
[0057]S7中离心转速为2000rpm并且离心时间为5min；
[0058]S8中注射用水为200ml，冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3次，离心转速为5000rpm并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，在操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；S2，将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清液颜色为无色或者淡黄色，弃除上清，得到胎盘组织；S3，将离心所得胎盘组织匀浆并且过滤，得到滤液a和沉淀物a；S4，将滤液a进行冷冻和室温融化，反复冻融多次；S5，将所得沉淀物a酶解，得酶解液A；S6，将酶解液A离心，取得沉淀物b，并将沉淀物b加生理盐水后再离心，得沉淀A，向沉淀A中添加由胶原酶II、DNase和透明质酸酶组成的混合酶溶液，37℃酶解100min后，终止酶解，得酶解液B；S7，将酶解液B滤液离心，得沉淀B；S8，向沉淀B中添加注射用水，并且将混合溶液冷冻和室温融化，反复冻融多次，再将混合溶液离心，得到上清液A；S9，将滤液a和上清液A混合，过滤，即得人胎盘间充质干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，其特征在于：所述S4中冷冻温度为
‑
80℃，冻融次数为3
‑
4次。3.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞外泌体提取方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋涛，吴少雄，虞焰志，刘晓莉，董欣，贾海生，
申请(专利权)人：安徽国祯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：