一种核酸提取试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种核酸提取试剂盒，涉及生物技术领域。试剂盒包含裂解液1、裂解液2、结合液、漂洗液、洗脱液和磁珠，采用半自动化提取得到洗脱核酸，通过紫外分光光度计进行质量检测。该试剂盒能够有效提高核酸得率，缩短核酸纯化时间，其中的核酸提取试剂可在室温下稳定储存2年以上。储存2年以上。储存2年以上。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸提取试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种核酸提取试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]核酸是生物的主要遗传物质。在分子生物学和医学检测等领域中以DNA为研究对象或目标的研究甚是广泛。而从不同生物样本(如：排泄物、组织、体液、病原体等)中获得高质量的核酸则是开展相关研究实验的基础。当前，针对核酸提取纯化的手段大致可分为如下几类：醇类沉淀、硅胶基质柱吸附、磁性材料的修饰基团吸附等。其中磁珠法作为可应用自动化的核酸提取方法，基本原理是基于磁珠在高盐溶液中可以对核酸进行特异性吸附，经过多次漂洗去除蛋白质和多糖等杂质，最后通过在低盐溶液中洗脱，从而获得适用于后续研究的核酸产物。
[0003]当前，在核酸纯化质量方面，不同的核酸提取试剂获得的核酸质量有着显著的差异。由于外源及内源性核酸酶的存在及其酶活性稳定等原因，使得提取高质量的核酸较为困难。目前常用的核酸提取技术存在提取流程复杂、时间长、核酸降解严重、得率较低或重复性不佳等无法同时兼顾的问题，使得其无法完全满足临床检测的需求，尤其在核酸载量较低的微小残留病检测、早期复发监测等领域尤为迫切。因此研发出一种快速高效、高得率的核酸提取试剂显得尤为重要。
[0004]中国专利技术专利CN112195177A公开了一种核酸提取方法及试剂盒，包括裂解液、抑制成分去除液、蛋白质去除剂、结合缓冲液、漂洗液、离子洗涤液。其中，裂解液为异硫氰酸胍、N
‑
月桂酰肌氨酸钠盐，抑制成分去除液包括十二水合硫酸铝铵和PVPP的混合液以及乙酸铵，此方法采用所述核酸化学裂解液化学裂解样本，再经杂质去除、核酸吸附、洗涤、洗脱后，收集得到核酸。
[0005]中国专利技术专利CN101792756A公开了一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法，其中裂解缓冲液的组成为三羟甲基氨基甲烷、EDTA和氯化钠。此方法将裂解缓冲液加入待测材料中，将材料研碎，加入蛋白酶K，孵育离心，得脱氧核糖核酸溶液。此方法的优点在于能够一步法提取DNA，不需要酶解和长时间孵育，一次性裂解材料，材料范围广，操作时间短。
[0006]但目前的核酸提取方法虽然能够有效地获取DNA，但针对特定样本的核酸得率较低，试剂盒提取稳定性不佳，部分方法存在核酸纯化质量较低，不能用于后续的qPCR和二代测序分析的问题。
[0007]针对现有的核酸提取试剂盒存在的稳定性差，核酸得率较低等问题，应寻找一种稳定性好、核酸得率高、能稳定存储的试剂盒，使得该试剂盒能够实现更好的核酸提取功能。

技术实现思路

[0008]本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种试剂盒。该试剂盒能够有效提高核酸得率，缩短核酸纯化时间，其中的核酸提取试剂可在室温下稳定储存2年以上。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]一方面，本专利技术提供了一种试剂盒，包括裂解液1、裂解液2、结合液、漂洗液、洗脱液和磁珠。
[0011]所述的裂解液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷、EDTA和Triton X
‑
100；
[0012]所述的裂解液2包括蛋白酶K和SDS；
[0013]所述的结合液包括盐酸胍、Tris
‑
HCl和异丙醇；
[0014]所述的漂洗液包括乙醇和Tris
‑
HCl；
[0015]所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl和EDTA；
[0016]所述的磁珠选自超顺磁性二氧化硅磁珠、二氧化钛磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠中的至少一种；
[0017]所述的裂解液1，以质量体积份计，包括15
‑
50份异硫氰酸胍，0.3
‑
4份三羟甲基氨基甲烷，1
‑
7份EDTA和0.8
‑
1.2份Triton X
‑
100。
[0018]优选地，所述的裂解液1还包括盐酸胍和脱氧胆酸钠。
[0019]进一步优选地，所述的裂解液1，以质量体积份计，还包括35
‑
50份盐酸胍和0.1
‑
0.5份脱氧胆酸钠。
[0020]优选地，所述的裂解液2中蛋白酶K的浓度为10mg/mL，SDS的浓度为20mg/mL。
[0021]优选地，所述的结合液，以质量体积份计，包括30
‑
50份盐酸胍。
[0022]优选地，所述的结合液，以体积份计，包括0.6
‑
4份的Tris
‑
HCl和30
‑
50份的异丙醇。
[0023]进一步优选地，所述的Tris
‑
HCl的浓度为1mol/L，pH为8.0。
[0024]进一步优选地，所述的结合液，以质量体积份计，还包括1
‑
4份月桂酰基氨酸钠。
[0025]更进一步优选地，所述的结合液，以体积份计，还包括5
‑
10份的EDTA。
[0026]更进一步优选地，所述的EDTA的浓度为0.5mol/L。
[0027]优选地，所述的漂洗液，以体积份计，包括70
‑
80份乙醇、1
‑
2份Tris
‑
HCl。
[0028]进一步优选地，所述的Tris
‑
HCl的浓度为1mol/L，pH为7.5
‑
8.0。
[0029]优选地，所述的洗脱液，以体积份计，包括1
‑
2份Tris
‑
HCl和1
‑
2份EDTA。
[0030]进一步优选地，所述的Tris
‑
HCl的浓度为1mol/L，pH为8.0。
[0031]进一步优选地，所述的EDTA的浓度为0.5mol/L。
[0032]优选地，所述的磁珠为超顺磁性二氧化硅磁珠。
[0033]又一方面，本专利技术提供了一种核酸提取的方法。
[0034]具体地，所述的方法使用上述任一技术方案所述的试剂盒进行核酸提取。
[0035]具体地，所述的方法包括以下步骤：
[0036]步骤S1：对生物样品进行前处理，得待测样本；
[0037]步骤S2：向待测样本中加入裂解液1，混匀，离心后加入裂解液2，混匀，离心后孵育，得混合液；
[0038]步骤S3：将混合液进行提取，得洗脱核酸；
[0039]步骤S4：对洗脱核酸进行核酸质量检测。
[0040]具体地，所述的步骤S1中生物样品为细胞保存液；所述的细胞保存液主要用于保存宫颈、肠道等组织脱落细胞以及商业化培养的人源细胞系。
[0041]具体地，所述的步骤S1中前处理的步骤包括组织脱落细胞直接从细胞保存液中提取，人源细胞系通过胰蛋白酶细胞消化、细胞收集、PBS重悬后进行提取。
[0042]具体地，所述的步骤S2为：取离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其特征在于，包括裂解液1、裂解液2、结合液、漂洗液、洗脱液和磁珠；所述的裂解液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷、EDTA和Triton X
‑
100；所述的裂解液2包括蛋白酶K和SDS；所述的结合液包括盐酸胍、Tris
‑
HCl和异丙醇；所述的漂洗液包括乙醇和Tris
‑
HCl；所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl和EDTA；所述的磁珠选自超顺磁性二氧化硅磁珠、二氧化钛磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠中的至少一种；所述的裂解液1，以质量体积份计，包括15
‑
50份异硫氰酸胍，0.3
‑
4份三羟甲基氨基甲烷，1
‑
7份EDTA和0.8
‑
1.2份Triton X
‑
100。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的裂解液1，以质量体积份计，还包括35
‑
50份盐酸胍和0.1
‑
0.5份脱氧胆酸钠。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的结合液，以质量体积份计，包括30
‑
50份盐酸胍。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的结合液，以体积份计，包括0.6
‑
4份的Tris
‑
HCl和30
‑
50份的异丙醇。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的结合液，以质量体积份计，还包括1
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【专利技术属性】
技术研发人员：韩亮，冯涛，邹浩，许诗怡，
申请(专利权)人：苏州颐坤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：