一种体外扩增及活化γδ-T细胞的方法技术

本发明专利技术是关于一种体外扩增暨活化γδ

【技术实现步骤摘要】
一种体外扩增及活化
γδ
‑
T细胞的方法
[0001]本申请是申请日为2020年5月29日提交的申请号为202010475465.8的专利技术专利的分案申请，原申请的专利技术名称为“一种体外扩增及活化γδ
‑
T细胞的方法”，通过引用将其全部内容结合到本申请。


[0002]本专利技术是关于一种体外扩增暨活化γδ
‑
T细胞的方法。本专利技术另关于一种包含γδ
‑
T细胞的医药组合物。

技术介绍

[0003]免疫细胞治疗是将病人本身的免疫细胞在体外增殖和活化后，再回输至体内的一种治疗方式。目前免疫细胞治疗已逐渐被应用于癌症治疗上，成功的关键在于了解各类免疫细胞的特性和功能，并根据癌症患者的状况及基因特性来选择最合适的免疫细胞类型，例如NK细胞、T细胞等。
[0004]人体免疫系统中的T细胞大致上分为二大类:Alpha
‑
Beta T细胞与Gamma
‑
Delta T(γδ
‑
T)细胞。γδ
‑
T细胞存在于外围血液中，其数量只占外围血液中所有T细胞的1％～5％。它是藉由辨识细胞表面的异戊烯基焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)分子来区分正常与异常细胞。IPP是细胞代谢的一个中间产物，它在癌细胞内的产量会增加，尤其是当癌细胞的p53基因突变时。识别IPP的γδ
‑
T细胞会增殖和活化并会增强攻击肿瘤细胞的力量，此为γδ
‑
T细胞的特殊功能，如果其他免疫细胞没有侦测到癌细胞标志的话，γδ
‑
T细胞还是可以发现癌细胞，并加以攻击。以一般情况来说，异常的细胞会拥有和其他正常细胞不同的分子，γδ
‑
T细胞将这些作为癌细胞标志来识别并进行攻击。除了IPP分子之外，γδ
‑
T细胞也能透过MIC A/b、HMB
‑
PP、细胞间粘附分子
‑
1，CD166等标记物来进行辨识。因此，γδ
‑
T细胞能辨识与杀死多种癌细胞。
[0005]γδ
‑
T细胞有一个很重要的特征，即在辨识异常细胞时不需要HLA，因此与个体的HLA型别无关。这个特征使得γδ
‑
T细胞可使用在任何人身上而不会产生移植物抗宿主病(graft
‑
versus
‑
host disease,GVHD)。目前在美国、欧洲与日本已有许多细胞疗法的人体临床应用是使用γδ
‑
T细胞来进行的，这些临床应用皆证实γδ
‑
T细胞的使用是安全无虞的。
[0006]由于γδ
‑
T细胞在血液中数量稀少且其增生能力因人而异，因此以γδ
‑
T细胞进行细胞疗法的挑战在于是否能够于体外大量且快速的扩增并活化γδ
‑
T细胞。近几年发现，使用唑来膦酸(Zoledronic acid)能使γδ
‑
T细胞大量增殖，其技术也已经确立。唑来膦酸除了使用在培养γδ
‑
T细胞之外，将唑来膦酸注射到癌症患者体内可以发现癌细胞更大量表现IPP，藉此可以提高γδ
‑
T细胞对癌细胞的灵敏度。然而，唑来膦酸是一种治疗骨质疏松症的药物，用于培养细胞或注射至病患体内仍存在一定疑虑，因此仍极需要开发出一种方便、有效、安全的体外扩增暨活化γδ
‑
T细胞的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术于一方面，提供一种体外扩增暨活化γδ
‑
T细胞的方法，其包含以下步骤：自一血液检体分离出外周血单个核细胞；自该外周血单个核细胞分离出γδ
‑
T细胞；将该γδ
‑
T细胞悬浮于一培养基并置于一细胞培养盘中培养；以及持续对该细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予一可见光波刺激或一可听声波刺激，培养12至16天。
[0008]在一具体实施例中，前述可见光波的波长是介于400nm～700nm；在一较佳实施例中，前述可见光波的波长是介于550nm～700nm。
[0009]在一具体实施例中，前述可听声波的波形为正弦波、三角波或方波；在一较佳实施例中，前述可听声波的频率为110Hz，强度为70分贝。
[0010]于本专利技术的一些具体实施方式中，前述培养基包含一自体树突细胞外泌体(autologous dendritic cell exosome)；在一较佳实施例中，前述自体树突细胞外泌体的浓度为25μg/ml。在一较佳实施例中，前述培养基另包含唑来膦酸(zoledronic acid)；在另一较佳实施例中，前述培养基另包含基础培养基以及细胞激素。
[0011]本专利技术于另一方面，提供一种根据前述方法所制得的细胞。
[0012]本专利技术于再一方面，提供一种用于抑制肿瘤细胞增殖的医药组合物，其包含前述的细胞及医药上可接受的赋形剂。
[0013]前面的概述，以及本专利技术以下的详细描述，在结合图式一起阅读时将可以被更好地理解。为了说明本专利技术，所附图式示出一些，但不是所有的，可替代的具体实施例。然而，应该理解的是，本专利技术并不限于所示的精确安排和手段。这些图式，其被并入并构成说明书的一部分，有助于解释本专利技术的原理。
附图说明
[0014]图1是本专利技术的γδ
‑
T细胞体外扩增暨活化方法流程图。
[0015]图2A是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波长可见光波刺激后的细胞扩增倍数分析。
[0016]图2B是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波长可见光波刺激后，γδ
‑
T细胞对Daudi细胞的毒杀效率分析。
[0017]图2C是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波长可见光波刺激后，γδ
‑
T细胞对A549细胞的毒杀效率分析。
[0018]图2D是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波长可见光波刺激后，以流式细胞仪进行细胞分析的结果。
[0019]图3A是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波形可听声波刺激后的细胞扩增倍数分析。
[0020]图3B是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波形可听声波刺激后，γδ
‑
T细胞对Daudi细胞的毒杀效率分析。
[0021]图3C是本专利技术持续对细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予不同波形可听声波刺激后，γδ
‑
T细胞对A549细胞的毒杀效率分析。
[0022]图4A是本专利技术于培养基中加入自体树突细胞外泌体后的γδ
‑
T细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外扩增暨活化γδ
‑
T细胞的方法，其包含以下步骤：(a)自一血液检体分离出外周血单个核细胞；(b)自该外周血单个核细胞分离出γδ
‑
T细胞；(c)将该γδ
‑
T细胞悬浮于一培养基并置于一细胞培养盘中培养；以及(d)持续对该细胞培养盘中的γδ
‑
T细胞施予一可听声波刺激，培养12至16天。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中该可听声波的波形为正弦波、三角波或方波。3.如权利要求4所述的方法，其特征在于，其中该可听声波的频率为110Hz，强度为70dB。4.如权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，其中该培养基包含一自体树突细胞外泌体。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，其中该培养基另包含唑来膦酸。6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，其中该培养基另包含基础培养基以及细胞激素。7.一种体外扩增暨活化γδ
‑
T细胞的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张顺浪，林杰良，杨智雅，孙境新，刘威廷，唐晓艳，
申请(专利权)人：乾境生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：