一种乳腺癌多维度免疫压力CRISPR文库筛选方法技术

本发明专利技术公开了两套CRISPR文库(MiTCL

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺癌多维度免疫压力CRISPR文库筛选方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗领域，具体涉及一种乳腺癌多维度免疫压力CRISPR文库筛选方法。

技术介绍

[0002]肿瘤治疗中最为关注的是肿瘤免疫治疗，其中最成功的是免疫检查点阻断治疗。然而，免疫检查点的阻断不能在大多数患者中实现持续的临床反应，肿瘤细胞可以表达更多其他的基因来调节它们对肿瘤免疫的逃避或抵抗，因此需要探索肿瘤免疫过程中其他的免疫治疗靶点以及治疗策略。
[0003]三阴性乳腺癌(TNBC)因其缺乏有效的治疗靶点，是当今乳腺癌治疗的难点之一。免疫治疗作为TNBC的新型疗法已展示出良好的应用前景，但同时其也存在着靶点单一、疗效局限等挑战。虽然免疫治疗药物在三阴性乳腺癌领域获批，但目前仍有许多亟待解决的临床问题。例如PD
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L1的表达虽然已作为预测免疫检查点抑制剂疗效的生物标志物，但在常规临床试验中仍存在担忧：PD
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L1是一个动态标记物，表达可能随时间而变化；一些PD
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L1检测阳性的患者可能对治疗无反应，而其他检测阴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.sgRNA文库，其特征在于，所述sgRNA文库为MiTCL
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L和/或MiTCL
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S；所述MiTCL
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L包含靶向选自表1中2796个基因的sgRNA，所述MiTCL
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S包含靶向选自表2中273个基因的sgRNA。2.根据权利要求1所述的sgRNA文库，其特征在于，所述MiTCL
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L的靶标序列选自表1；所述MiTCL
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S的靶标序列选自表2。3.权利要求1或2所述的sgRNA文库在筛选肿瘤免疫相关的基因中的应用。4.权利要求1或2所述的sgRNA文库在制备筛选肿瘤免疫相关的基因的试剂盒中的应用。5.一种乳腺癌多维度免疫压力CRISPR文库筛选方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：a)MiTCL
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L质粒文库的构建；b)利用MiTCL
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L文库进行首轮基于不同免疫压力小鼠模型的CRISPR筛选；c)利用生物信息学分析MiTCL
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L免疫文库筛选结果，鉴定出三阴性乳腺癌免疫逃逸和免疫监视相关的候选基因；d)根据MiTCL
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L文库筛选结果，进行次轮筛选MiTCL
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S质粒文库的制备；e)基于MiTCL
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S文库的次轮免疫筛选；f)利用生物信息学分析MiTCL
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S免疫文库筛选结果,鉴定出免疫逃逸相关基因。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤a)MiTCL
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L质粒文库的构建使用权利要求1或2所述的MiTCL
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L sgRNA文库。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中sgRNA与lentiGuide
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Puro质粒连接、扩增构成MiTCL
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L质粒文库。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡欣，邵志敏，吉芃，龚悦，骆红，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：