修饰核苷单体、包含修饰核苷酸的siRNA、药物组合物和缀合物制造技术

一种修饰核苷单体、包含修饰核苷酸的siRNA、药物组合物和siRNA缀合物。该修饰核苷单体具有如式(1)所示的结构。由该修饰核苷单体制备得到的siRNA缀合物生物利用度高，具有较好的活性，并具有较低的毒性。并具有较低的毒性。并具有较低的毒性。

【技术实现步骤摘要】
修饰核苷单体、包含修饰核苷酸的siRNA、药物组合物和缀合物


[0001]本公开涉及一种修饰核苷单体、以及由该核苷单体制备得到的包含修饰核苷酸的siRNA、药物组合物与siRNA缀合物。本公开还涉及该修饰核苷、siRNA、药物组合物和siRNA缀合物的制备方法和用途。

技术介绍

[0002]siRNA作为药物活性成分已为公众所知。近年来，在siRNA成药方面取得了相当程度的进展。本领域技术人员公知的是，目前siRNA的制备方法主要是通过由不同的核苷单体按照亚磷酰胺固相合成法逐一连接来进行。其中，核苷亚磷酰胺单体作为该合成方法的重要反应原料，与所制备的siRNA的结构和性能直接相关，具有非常重要的作用。为了提高所制备的siRNA的活性、体内稳定性和药代动力学性能，本领域技术人员经常会选择对siRNA中特定的核苷酸进行化学修饰，为此，实现该化学修饰的通常手段是，在siRNA制备方法的相应步骤中使用修饰的核苷亚磷酰胺单体。然而，siRNA药物的开发中的另一问题是siRNA本身的安全性，即如何尽量降低siRNA的毒性。而对于如何获得同时具有良好的药学活性和低毒性的siRNA，以及如何获得能够使得所制备的siRNA毒性降低的修饰的核苷亚磷酰胺单体，本领域中仍需要进一步深入探索，并且在实际研发中仍然存在相关未解决的需求。

技术实现思路

[0003]本公开的专利技术人意外发现，对核苷单体的核糖5
’
位以及核糖碱基进行修饰，获得修饰的核苷单体可用于siRNA的制备。由该修饰的核苷单体制备得到的包含修饰的核苷酸的siRNA、药物组合物与siRNA缀合物生物利用度高，具有较好的目标基因表达的mRNA的抑制活性，并具有较低的毒性。
[0004]在一方面，本公开提供了一种化合物，所述化合物具有如式(1)所示的结构。
[0005][0006]其中：
[0007]每个J1独立地为C1
‑
C6烷基或取代的C1
‑
C6烷基；
[0008]E
101
为O或S；
[0009]R
203
为具有式(2)所示结构的亚磷酰胺官能团：
[0010][0011]其中，每个B1独立地选自取代或未取代的C1
‑
C5烃基；B2选自C1
‑
C5的烷基、氰乙基、氰丙基和氰丁基中的一种；
[0012]D0为式(D1)
‑
(D4)表示的二价连接基团中的一种：
[0013][0014]P1和P2各自独立地为H、卤素、C1
‑
C6烷基、取代的C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、取代的C1
‑
C6烷氧基、C2
‑
C6烯基或取代的C2
‑
C6烯基；
[0015]P3为O或S；
[0016]Bm为苯基或取代苯基，所述取代苯基是指苯基上的至少一个氢原子被取代基取代而形成的基团，每个所述取代基独立地选自F、Cl、CH3、CH2F或CF3；
[0017]Z0为H、经保护的羟基、OCH3、F或OCH2CH2OCH3；
[0018]表示基团共价连接的位点。
[0019]在另一方面，本公开提供了一种siRNA，所述siRNA包含正义链和反义链，所述正义链和反义链包含14
‑
30个修饰或未修饰的核苷酸，正义链和反义链的一部分反向互补形成双链区，其中，在所述反义链的5
’‑
末端核苷酸具有式(5)所示的结构：
[0020][0021]其中：
[0022]R
201
和R
202
各自独立地为OH或OJ1，J1为C1
‑
C6烷基或取代的C1
‑
C6烷基；
[0023]每个E
101
各自独立地为O或S；
[0024]D0为具有下式(D1)
‑
(D4)所示结构表示的二价连接基团之一的基团：
[0025][0026][0027]P1和P2各自独立地为H、卤素、C1
‑
C6烷基、取代的C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、取代的C1
‑
C6烷氧基、C2
‑
C6烯基或取代的C2
‑
C6烯基；
[0028]Bm为苯基或取代苯基，所述取代苯基是指苯基上的至少一个氢原子被取代基取代而形成的基团，每个所述取代基独立地选自F、Cl、CH3、CH2F或CF3；
[0029]Z为H、OH、OCH3、F或OCH2CH2OCH3；
[0030]表示基团共价连接的位点；
[0031]所述反义链与目标基因表达的mRNA中的一段长度与所述反义链相同的核苷酸序列基本上反向互补或实质上反向互补。
[0032]在又一方面，本公开还提供了一种药物组合物，该药物组合物含有本公开的siRNA以及药学上可接受的载体。
[0033]在又一方面，本公开提供还提供一种siRNA缀合物，所述siRNA缀合物含有本公开的siRNA以及缀合连接至该siRNA的缀合基团，所述缀合基团包含接头和药学上可接受的靶向基团和/或递送辅助基团，并且，所述siRNA、所述接头和所述靶向基团或者所述递送辅助基团依次共价或非共价连接，每个所述靶向基团选自能够和细胞表面受体结合的配体，每
个递送辅助基团选自能够增加所述siRNA缀合物在递送目标器官或组织中的生物相容性的基团。
[0034]在又一方面，本公开还提供了本公开的siRNA、药物组合物和/或siRNA缀合物在制备用于治疗和/或预防与目标基因表达的mRNA水平相关的疾病或症状的药物中的用途。
[0035]在又一方面，本公开还提供了一种治疗和/或预防与目标基因表达的mRNA水平相关的疾病或症状的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予本公开的siRNA、药物组合物和/或siRNA缀合物。
[0036]在又一方面，本公开还提供了一种抑制细胞中目标基因表达水平的方法，所述方法包括将有效量的本公开的siRNA、药物组合物和/或siRNA缀合物与所述细胞接触。
[0037]此外，本公开还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含本公开的siRNA、药物组合物和/或siRNA缀合物。
[0038]以引用的方式并入
[0039]本说明书中提及的所有出版物、专利以及专利申请均以引用的方式并入本文，其程度与每一单独的出版物、专利或专利申请均专门并且单独地以引用的方式并入本文的程度相同。
[0040]有益效果
[0041]由本公开的修饰核苷单体制备获得的、包含修饰的核苷酸的siRNA、药物组合物和/或siRNA缀合物在保持良好的稳定性，较好的目标基因表达调节活性的同时，显示出明显较低的毒性。具体说明如下：
[0042]第本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化合物，所述化合物具有式(1)所示的结构：其中：每个J1独立地为C1
‑
C6烷基或取代的C1
‑
C6烷基；E
101
为O或S；R
203
为具有式(2)所示结构的亚磷酰胺官能团：其中，每个B1独立地选自取代或未取代的C1
‑
C5烃基；B2选自C1
‑
C5的烷基、氰乙基、氰丙基和氰丁基中的一种；D0为具有下式(D1)
‑
(D4)所示结构表示的二价连接基团之一的基团：P1和P2各自独立地为H、卤素、C1
‑
C6烷基、取代的C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、取代的C1
‑
C6烷氧基、C2
‑
C6烯基或取代的C2
‑
C6烯基；Bm为苯基或取代苯基，所述取代苯基是指苯基上的至少一个氢原子被取代基取代而形成的基团，每个所述取代基独立地选自F、Cl、CH3、CH2F或CF3；Z0为H、经保护的羟基、OCH3、F或OCH2CH2OCH3；
表示基团共价连接的位点。2.如权利要求1所述的化合物，其中，每个所述取代基独立地为F、Cl或CH3。3.如权利要求2所述的化合物，其中，Bm选自于式(G1)
‑
(G12)中任意一种所示的基团：(G12)中任意一种所示的基团：4.如权利要求1所述的化合物，其中，D0为式(D1)或(D2)所示的二价连接基团，且P1和P2各自独立地为H，或者D0为式(D4)所示的二价连接基团。5.如权利要求1所述的化合物，其中，每个J1为乙基，E
101
为O。6.如权利要求1所述的化合物，其中，Z为OCH3或OCH2CH2OCH3。7.如权利要求1所述的化合物，其中，每个B1独立地选自异丙基或异丁基，B2选自氰乙基或氰丙基。8.如权利要求7所述的化合物，其中，所述亚磷酰胺官能团具有式(4)所示的结构：
9.如权利要求1所述的化合物，该化合物具有式(101)
‑
(113)中任意一个所示的结构：
10.一种siRNA，所述siRNA包含正义链和反义链，所述正义链和反义链各自包含14至30个修饰或未修饰的核苷酸，正义链和反义链的一部分反向互补形成双链区，其中，所述反义链的5
’‑
末端核苷酸具有式(5)所示的结构：其中：R
201
和R
202
各自独立地为OH或OJ1；J1为C1
‑
C6烷基或取代的C1
‑
C6烷基；每个E
101
各自独立地为O或S；D0为具有下式(D1)
‑
(D4)所示结构表示的二价连接基团之一的基团：
P1和P2各自独立地为H、卤素、C1
‑
C6烷基、取代的C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、取代的C1
‑
C6烷氧基、C2
‑
C6烯基或取代的C2
‑
C6烯基；Bm为苯基或取代苯基，所述取代苯基是指苯基上的至少一个氢原子被取代基取代而形成的基团，每个所述取代基独立地选自F、Cl、CH3、CH2F或CF3；Z为H、OH、OCH3、F或OCH2CH2OCH3；表示基团共价连接的位点；所述反义链与目标基因表达的mRNA中的一段长度与所述反义链相同的核苷酸序列基本上反向互补或实质上反向互补。11.如权利要求10所述的siRNA，其中，所述取代苯基是指苯环上的至少一个氢原子独立地被F、Cl或CH3取代。12.如权利要求11所述的siRNA，其中，Bm选自于式(G1)
‑
(G12)中的任意一种所示的基团：
13.如权利要求10所述的siRNA，其中，D0为式(D1)或(D2)所示的二价连接基团，且P1和P2各自独立地为H；或者D0为式(D4)所示的二价连接基团。14.如权利要求10所述的siRNA，其中，R
201
和R
202
均为OH。15.如权利要求10所述的siRNA，其中，每个E
101
均为O，或者至少一个E
101
为S。16.如权利要求10所述的siRNA，其中，式(5)所示基团具有式(201)
‑
(213)中任意一个所示的结构：
17.如权利要求10所述的siRNA，其中，所述正义链包含核苷酸序列I，所述反义链包含核苷酸序列II，所述核苷酸序列II的5
’
末端核苷酸具有式(5)所示的结构；所述核苷酸序列I和核苷酸序列II均由19个核苷酸组成，且所述核苷酸序列II与所述核苷酸序列I部分反向互补构成双链区，所述核苷酸序列II部分与第一段核苷酸序列反向互补，所述第一段核苷酸序列为目标基因表达的mRNA中的一段长度为19个核苷酸的核苷酸序列；按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列I的第7
‑
9个核苷酸为氟代修饰的核苷酸；将式(5)所示的基团作为1个核苷酸计数，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列II的第2、6、14、16个核苷酸为氟代修饰的核苷酸。18.如权利要求17所述的siRNA，其中，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列I的第7
‑
9个核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述核苷酸序列I其他位置的每个核苷酸独立地为非氟代修饰的核苷酸中的一种；按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列II的第2、6、14、16个核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述核苷酸序列II其他位置的每个核苷酸独立地为非氟代修饰的核苷酸中的一种。19.如权利要求17所述的siRNA，其中，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列II的第2
‑
19位与所述第一段核苷酸序列中的1
‑
18位完全反向互补。20.如权利要求17所述的siRNA，其中，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列II的第2
‑
19位与所述核苷酸序列I的1
‑
18位完全反向互补构成双链区。21.如权利要求17
‑
20所述的siRNA，其中，所述正义链还含有核苷酸序列III，所述反义链还含有核苷酸序列IV，所述核苷酸序列III和所述核苷酸序列IV的每个核苷酸独立地为非氟代修饰的核苷酸中的一种，所述核苷酸序列III的长度为1个、2个、3个或4个核苷酸，所述核苷酸序列IV和所述核苷酸序列III长度相等，并且所述核苷酸序列IV和所述核苷酸序列III实质上反向互补或完全反向互补，所述核苷酸序列III连接在所述核苷酸序列I的5'末端，所述核苷酸序列IV连接在所述核苷酸序列II的3'末端，并且所述核苷酸序列IV与第二段核苷酸序列实质上反向互补或完全反向互补，该第二段核苷酸序列是指...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘国成，李海涛，梁子才，杨志伟，
申请(专利权)人：苏州瑞博生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：