利用专性噬菌体提升生防菌防控土传青枯病的方法技术

本发明专利技术公开了一株青枯病生防菌YL

【技术实现步骤摘要】
利用专性噬菌体提升生防菌防控土传青枯病的方法


[0001]本专利技术属于微生物
，涉及利用专性噬菌体提升生防菌防控土传青枯病的应用，具体涉及一株生防菌YL
‑
Ste
‑
01，一株专性靶向宿主细菌YL
‑
Ste
‑
01的裂解性噬菌体YL
‑
Ste
‑ꢀ
01P，一株进化后的生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo，以及生防菌YL
‑
Ste
‑
01或生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo或生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo协同噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P在防控番茄土传青枯病的应用。

技术介绍

[0002]由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum，简称青枯菌)引起的土传青枯病严重制约了农业的可持续发展，常年来给农户造成了严重的损失。物理和化学防控方式虽然见效快，但易诱导病原菌的耐药性，且使用过程中因靶向性不强，杀灭青枯菌的同时也破坏了微生物群落。利用根际微生物防控土传病害已经成为新型环保的生防手段
[1]，如有益生防菌、噬菌体、原生动物等。其中，噬菌体是一种专性侵染细菌的病毒，有研究表明青枯菌的专性噬菌体在防控土传青枯病的过程中发挥重要作用。根际除了病原菌专性噬菌体，还存在大量生防菌的噬菌体。但根际生防菌的专性噬菌体影响生防菌消减效率的研究相对较少。作为细菌的专性“杀手”，噬菌体可以有效调控根际生防菌的种群密度、生理和行为；同时作为细菌进化的重要驱动力，噬菌体在诱导宿主细菌抗性进化的同时也会改变宿主细菌的其他生活史特征，如生防菌的生长、运动和代谢等
[2]，进而影响生防菌的根际定殖、竞争能力。是否可以利用生防菌的专性噬菌体来定向驯化生防菌，增强其消减土壤青枯菌生物障碍的效率尚不清楚，有待进一步研究。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于从番茄植株根际分离得到一株可以抑制青枯菌的生防菌YL
‑
Ste
‑
01，并筛选得到一株专性侵染生防菌YL
‑
Ste
‑
01的噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P，专利技术人发现：噬菌体胁迫下，生防菌YL
‑
Ste
‑
01发生进化，对青枯菌抑制能力增强且对噬菌体的抗性增强，从而进一步筛选得到一株抑制青枯菌的生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo，通过温室盆栽实验表明，施用进化菌株 YL
‑
Ste
‑
01evo可以显著提高防控番茄青枯病的效果。
[0004]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0005]一株青枯病生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)，于2022年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2022939。
[0006]一株青枯病生防菌YL
‑
Ste
‑
01，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)，于2022年3月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 2022324。
[0007]一株裂解性噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P，属于有尾噬菌体目，长尾噬菌体科，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体(Stenotrophomonas maltophilia phage)，于2022年4月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2022460。
[0008]专性裂解性噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P能够胁迫生防菌YL
‑
Ste
‑
01进化得到生防菌YL
‑
Ste
‑ꢀ
01evo，与生防菌YL
‑
Ste
‑
01相比，生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo的抗病原菌能力和噬菌体抗性均显著增强。一种噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P胁迫生防菌YL
‑
Ste
‑
01进化得到青枯病生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo 的方法：采用NA液体培养基培养得到处于对数生长期的YL
‑
Ste
‑
01菌液，用无菌水将菌液 OD
600
值调整至0.5；用无菌水调节噬菌体滴度为1
×
108PFU/mL，按照最佳感染复数(MOI 1～10)置于OD
600
值为0.5的YL
‑
Ste
‑
01菌液中，在温度30～33℃下、以转速160～180rpm 振荡培养24h，涂布筛选得到进化后抗噬菌体能力以及抑制青枯菌能力最强的的生防菌菌株 YL
‑
Ste
‑
01evo。
[0009]本专利技术的另一个目的是提供一种含生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo的菌剂，菌剂的浓度为1
×
108～ 5
×
108CFU/mL。
[0010]一种含生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo的菌剂的制备方法，包括：挑取生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo单菌，接种于NA液体培养基，在温度30～33℃下、以转速160～180rpm振荡培养，得到对数生长期的YL
‑
Ste
‑
01evo菌液，用无菌水调整菌液的OD
600
值至0.45～0.55，即为浓度 1
×
108～5
×
108CFU/mL的菌剂。
[0011]本专利技术的另一个目的是提供一种含生防菌YL
‑
Ste
‑
01的菌剂，菌剂的浓度为1
×
108～ 5
×
108CFU/mL。
[0012]一种含生防菌YL
‑
Ste
‑
01的菌剂的制备方法，包括：将生防菌YL
‑
Ste
‑
01接种于NA液体培养基，在温度30～33℃下、以转速160～180rpm振荡培养，得到对数生长期的YL
‑
Ste
‑ꢀ
01菌液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株青枯病生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，于2022年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2022939。2.一种含有权利要求1所述的生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo的菌剂，菌剂的浓度为1
×
108～5
×
108CFU/mL。3.一株青枯病生防菌YL
‑
Ste
‑
01，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，于2022年3月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2022324。4.一种含有权利要求3所述的生防菌YL
‑
Ste
‑
01的菌剂，菌剂的浓度为1
×
108～5
×
108CFU/mL。5.一株裂解性噬菌体YL
‑
Ste
‑
01P，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体(Stenotrophomonas maltophilia phage)，于2022年4月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2022460。6.权利要求1所述的生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo或权利要求3所述的生防菌YL
‑
Ste
‑
01或权利要求1所述的生防菌YL
‑
Ste
‑
01evo协同权利要求5所述的噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦中，王孝芳，侯如娇，杨可铭，徐阳春，沈其荣，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：