一种胎生睡莲的快速繁殖方法技术

一种胎生睡莲的快速繁殖方法，本发明专利技术以胎生芽作为外植体，后期经过不定芽、增殖培养与分化、生根，极大地提升了胎生芽的繁殖系数，缩短了胎生苗的发育周期，在短期内获得大量与母体遗传性状一致的睡莲幼苗，打破了气候和地域条件对睡莲胎生发育的限制，对于种植资源利用提供了保障，有利于繁殖名优睡莲品种，同时规模化生产能满足国内外市场需求。模化生产能满足国内外市场需求。模化生产能满足国内外市场需求。

【技术实现步骤摘要】
一种胎生睡莲的快速繁殖方法


[0001]本专利技术属于睡莲植物组织培养
，具体涉及一种胎生睡莲的快速繁殖方法。

技术介绍

[0002]睡莲是睡莲科(Nymphaeaceae)睡莲属(Nymphaea)的多年生草本花卉，睡莲科植物在系统进化上具有极高的研究价值。睡莲植物类群众多，分布广泛，花色丰富，花叶俱美，在园林水景中扮演重要角色。同时，睡莲属植物富含黄酮、生物碱等多种活性成分，具有抗菌消炎、降血糖和降血压等多种功效；睡莲的根能吸附水中重金属，净化水体；睡莲的花香成分可以用来制作香水，在美容行业中也发挥了一定的作用。此外，睡莲在文学、艺术等社会科学领域都具有重要地位。
[0003]睡莲的繁殖方式多样，兼具有性繁殖和无性繁殖。传统的睡莲繁育通常采用种子、块茎或球茎组织进行繁殖，然而，大多数睡莲结实率低，种子小且实生苗在早期长势较弱，容易遭藻类或蚊虫破坏。长期采用块茎和球茎进行的无性繁殖容易造成病原菌的积累，导致睡莲资源的品质下降、品种退化，同时无性繁殖也受气候条件影响大，尤其是热带睡莲在秋冬季节种质资源严重缺乏，无性繁殖效率低，难以满足市场需求。
[0004]叶片胎生作为一种特殊的无性繁殖方式，在部分睡莲种的叶片叶脐部位产生胎生芽进而分化形成独立植株，胎生苗完全由母体叶片提供营养。然而，胎生芽还未分化形成完整的独立植株时，母叶就已经开始发黄腐烂，胎生苗的生长受温度光照等多种因素影响，尤其在秋冬季节仍有多数胎生芽发育受阻，最终并未能产生真正胎生苗。此外，胎生苗必须尽早接触土壤生根保证营养供给，然而受水中浮力作用，脱离母体的胎生苗经常漂浮在水面，营养供给不充分，长势弱最终发黄腐烂。尤其到了冬季，受气候条件影响，即便是长在温室的胎生睡莲，其叶片胎生芽也基本处于发育停滞状态。
[0005]中国专利201810858776.5公开了“一种睡莲胎生块茎诱导无菌芽的培养基及其培养方法”，该专利中以
‘
蓝鸟
’
睡莲块茎为材料进行无菌芽诱导的方法，此方法以块茎作为外植体培养，睡莲块茎作为外植体数量极其有限，导致繁殖系数偏低。
[0006]中国专利201710212711.9公开了“一种利用睡莲组织快速育种的方法”，该方法在睡莲叶茎交汇处用植物生长精激活因子激活处理，从而提高睡莲的繁殖系数。
[0007]中国专利202210146030.8公开了“一种热带睡莲叶脐胎生体的快速繁育方法”，热带睡莲
‘
鲁比
’
和
‘
黑美人
’
胎生体通过施肥移栽实现快速育苗的方法，这两个方法都是直接利用池塘里睡莲母株作为研究材料，通过喷施激素或者施肥管理来进行繁殖育苗，缺点是母株繁殖系数低，对环境温度要求高，培养周期长，仅适合热带和亚热带地区生长，没有考虑睡莲的生态差异，尤其是热带睡莲在温带地区越冬繁殖问题存在巨大限制，胎生芽产量低且发育受阻，以上专利均未提及这一现实问题。
[0008]目前有关睡莲叶片胎生特性方面的研究较少，胎生苗的生长发育受季节影响极大，水域环境和生长空间也影响母体植株长势，导致叶片胎生的繁殖系数和发育周期不稳
定，难以满足市场和科研需要。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种胎生睡莲的快速繁殖方法，通过组织培养的方式实现胎生睡莲的快速繁殖，操作简便、所需时间短、繁殖系数高，能有效解决耐寒睡莲在秋冬季节胎生发育缓慢、资源缺乏等问题，减少了气候环境对睡莲发育的影响，提高了胎生睡莲的繁殖率。
[0010]为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0011]一种胎生睡莲的快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0012]1)外植体取材和消毒
[0013]将成熟睡莲叶脐部位带有1～3mm的胎生芽连同叶柄切下来作为外植体，用清水冲洗，并在体视显微镜下将外植体表面棉毛去除，用刀片切除周围多余组织，经清洗和消毒后备用；
[0014]2)不定芽诱导
[0015]在无菌条件下，将消毒后的外植体接种于诱导培养基中，直至外植体分化产生3～5片叶原基；
[0016]其中，所述的诱导培养基为固液双层培养基，其下层为固体培养基，上层为液体培养基，且上层培养基与下层培养基配方相同；
[0017]所述诱导培养基包括：MS培养基，TDZ：1.0～3.0mg/L，IAA： 0.5～3.0mg/L；
[0018]3)增殖培养与分化
[0019]取步骤2)获得的组织接种于增殖培养基中，培养15～20天，直至新生叶片叶脐部分诱导产生新的胎生芽，将带有胎生芽的叶片从叶柄处单独切下，放入增殖培养基中培养，获得带有多于10个叶片的簇状胎生苗；
[0020]其中，所述增殖培养基为固体培养基，具体包括：MS基本培养基， TDZ：1～3mg/L，IAA：0.1～0.5mg/L；
[0021]4)生根与移栽
[0022]将步骤3)获得的簇状胎生苗直接移栽到泥土中，加水并使簇状胎生苗完全浸没在水中，培养10～15天后基部产生若干细长白根。
[0023]优选的，所述MS培养基包括：MS：4～5g/L，蔗糖：20～30g/L，琼脂：5～10g/L，pH5.7～5.8。
[0024]进一步，步骤1)中，切除外植体周围多余组织后的清洗消毒步骤为：先用自来水冲洗至少30min，接着将其转入70～75％乙醇中浸泡处理45～ 60s后，再用无菌水清洗3～5min，随后用15～20％次氯酸钠溶液浸泡处理10～15min，浸泡过程中晃动不少于三次，最后用无菌水清洗三至五次，每次3～5min。
[0025]如无特殊说明，本专利技术所述的单位mg/L或g/L是指在1升培养基中各组分的含量。
[0026]本专利技术以成熟睡莲叶脐部位带有1～3mm的胎生芽连同叶柄切下来作为外植体，我们前期观察到，胎生芽既具有极强的分化潜力，能持续发育产生新的植物组织和器官，它又保留了物种的遗传特性，是研究睡莲胎生特性的关键组织。同时，在提高繁育系数方面，胎生芽相较于基部根茎组织而言，数量众多，具有取材更加方便、快捷容易的优点，对植物的
伤害也最小。
[0027]外植体清洗过后，需要在体视显微镜下用镊子将外植体表面的棉毛去除。附着在胎生芽上的毛状结构对于早期胎生芽的发育具有保护作用，同时毛状物具有一定锁水功能，使胎生芽处于湿润环境，这对于水生植物而言十分重要。然而棉毛结构容易粘附众多杂质和菌类物质，极易导致外植体的污染，大量棉毛附着在胎生芽表面也影响了对芽组织发育过程的观察，因此，要尽可能去掉棉毛。外植体上少量短小棉毛的存在影响不大，消毒彻底并不会导致后续的污染。
[0028]本专利技术在不定芽诱导过程中采用固液双层培养基进行培养，能较快的诱导外植体产生叶原基，减轻外植体的褐化程度，并且产生的叶原基数量多，叶柄短而壮。
[0029]此外，本专利技术在增殖培养后，将获得的带有多个叶片的簇状胎生苗直接移栽在泥土中，一周后，发现其开始产生大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胎生睡莲的快速繁殖方法，包括以下步骤：1)外植体取材和消毒将成熟睡莲叶脐部位带有1～3mm的胎生芽连同叶柄切下来作为外植体，用清水冲洗，并在体视显微镜下将外植体表面棉毛去除，用刀片切除周围多余组织，经清洗和消毒后备用；2)不定芽诱导在无菌条件下，将消毒后的外植体接种于诱导培养基中，直至外植体分化产生3～5片叶原基；其中，所述的诱导培养基为固液双层培养基，其下层为固体培养基，上层为液体培养基，且上层培养基与下层培养基配方相同；所述诱导培养基包括：MS培养基，TDZ：1.0～3.0mg/L，IAA：0.5～3.0mg/L；3)增殖培养与分化取步骤2)获得的组织接种于增殖培养基中，培养15～20天，直至新生叶片叶脐部分诱导产生新的胎生芽，将带有胎生芽的叶片从叶柄处单独切下，放入增殖培养基中培养，获得带有多于10个叶片的簇状胎生苗；其中，所述增殖培养基为...

【专利技术属性】
技术研发人员：安向婕，张大生，杨宽，田代科，吉琴，刘青青，刘凤栾，于银凤，
申请(专利权)人：上海辰山植物园，
类型：发明
国别省市：