一种从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法技术

本申请公开了一种从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法。筛选生长旺盛、松脆易碎的颗粒状愈伤组织通过液体培养基悬浮培养，经过持续继代同时筛除大颗粒愈伤组织以建立菠萝胚性悬浮细胞系。所述菠萝胚性细胞悬浮系中，细胞形状及细胞团大小均一，细胞分散性好，细胞生长增殖迅速，可直接用于原生质体的分离、培养、杂交、基因转移和次生代谢物的生产等，作为遗传转化材料能有效避免嵌合体现象产生，大幅提升菠萝生物育种的成功率和效率。大幅提升菠萝生物育种的成功率和效率。大幅提升菠萝生物育种的成功率和效率。

【技术实现步骤摘要】
一种从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法


[0001]本专利技术涉及植物细胞培养
，具体涉及一种从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法。

技术介绍

[0002]植物胚性悬浮细胞系是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养的胚性细胞系，有细胞形状及细胞团大小均一，细胞分散性好，细胞生长增殖迅速等特点，可直接用于原生质体的分离、培养、杂交、基因转移和次生代谢物的生产等，是作为遗传转化的良好材料。胚性细胞悬浮系的建立受植物品种、外植体、愈伤组织、培养基及环境因素等多种因素的影响，且植物细胞更易团聚，对剪切力更敏感，种种因素制约着植物胚性悬浮细胞系的建立。目前国内外已有多种植物建立了较为完善的悬浮细胞系，并直接使用悬浮细胞作为材料进行遗传转化操作、进行原生质体培养和体细胞杂交等研究，但在菠萝生物育种方面，鲜少见悬浮细胞相关的研究与应用。
[0003]菠萝是我国重要的热带水果，主要的选育种方式有杂交育种、芽变选种、诱变育种以及基因工程育种。传统杂交育种、芽变选种耗时耗力、工作量大，育种效率较低，诱变育种和基因工程育种多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取外植体，采用愈伤组织培养基进行培养，挑选生长旺盛、松脆易碎的颗粒状愈伤组织作为悬浮细胞培养的材料，避免选择出现褐化、发白现象以及水样化的愈伤组织；(2)将颗粒状愈伤组织放入容器中夹碎，向容器中加入悬浮细胞培养基，在摇床上进行恒温振荡培养；(3)将培养后的悬浮培养物中的大颗粒愈伤组织筛除，静置，待细小颗粒培养物沉淀后吸去上层液体培养基，再加入新鲜的悬浮细胞培养基，在摇床上进行恒温振荡培养；(4)筛除大颗粒愈伤组织，重复步骤(3)的操作，在恒温摇床上进行恒温振荡培养；(5)对悬浮培养物进行继代，同时定期取培养物进行显微观察，直至观察到的悬浮细胞呈大小均一的圆形或者椭圆形，为单细胞和小细胞团组成，无其他不规则形状的细胞和大细胞团，即完成菠萝胚性细胞悬浮系的建立。2.根据权利要求1所述的从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法，其特征在于，步骤(1)中挑选的愈伤组织为以冠芽、裔芽、吸芽或块茎芽为外植体诱导5周至6周的愈伤组织。3.根据权利要求2所述的从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法，其特征在于，所述外植体为吸芽。4.根据权利要求1所述的从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法，其特征在于，步骤(1)中使用的愈伤组织培养基为：MS培养基中添加13μM/L 6
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BA、1μM/L NAA和7g/L琼脂，pH＝5.8；愈伤组织培养条件为恒温28℃，暗培养。5.根据权利要求1所述的从菠萝愈伤组织建立菠萝胚性细胞悬浮系的方法，其特征在于，步骤(2)中所述悬浮细胞培养基含有：氯化铵500～600mg/L、硝酸钾2000～3000mg/L、氯化钙400～500mg/L、七水硫酸镁300～400mg/L、磷酸二氢钾150～200mg/L、碘化钾0.5～1.0mg/L、硼酸6～7mg/L、硫酸锰22～26mg/L、硫酸锌1.5～2.0mg/L、钼酸钠0.2～0.3mg/L、硫酸铜0.02～0.03mg/L、氯化钴0.02～0.03mg/L、乙二胺四乙酸二钠35～40mg/L、硫酸亚铁25～30mg/L、谷氨酰胺1000～1200mg/L、干酪素水解物500～600mg/L、精氨酸100...

【专利技术属性】
技术研发人员：王悠，常胜合，舒海燕，李科明，詹儒林，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院海口实验站，
类型：发明
国别省市：