【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物快速繁育，具体公开一种银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法。
技术介绍
1、银杏(ginkgo biloba l.)是银杏科、银杏属植物，为第四纪冰川灾难后仅存最古老的孑遗植物，被认为是植物界的“活化石”。银杏不仅具有观赏、材用及生态防护等多种功能，还是一种古老的药食两用植物，在制作具有抗菌、抗氧化、抗心血管疾病和其他生物活性的药物中发挥了至关重要的作用。银杏市场应用开发前景广阔，具有较高的研究价值。
2、银杏原产于中国，后传入日本、韩国等国家。目前主要分布在中国的温带和亚热带气候区，遍及我国22个省(自治区)，其中主要在浙江、江苏等省份。
3、银杏为雌雄异株植物，生长缓慢，其叶片和果实的采摘受季节限制，且实生苗的种植，要20-30年才能结果，难以满足市场需求。银杏传统的育苗方法为实生繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖等，这些方法存在繁殖系数低、遗传稳定性差、生产周期长等问题。
4、利用植物组织培养技术进行银杏萌蘖芽离体种苗繁殖，可以缩短育种周期、提高繁殖系数并保持品种原有的优良性状。然而，上述树种的离体再生技术尚未成熟，技术难点：(1)无菌材料获得困难；(2)繁殖系数低；(3)成活率低。
技术实现思路
1、针对现实需要和存在问题，本专利技术通过无菌系建立、直接不定芽发生、不定根诱导等离体培养技术研究，建立银杏的萌蘖芽离体种苗繁殖体系，以期量化生产富含药用有效成份的银杏芽苗，生长周期短，原材料采收不受季节限制。
2、本专利技术提供一
3、(1)外植体材料的制备：取4-6cm银杏萌蘖芽幼嫩枝条作为起始外植体并消毒；
4、(2)定芽诱导：将第(1)步获得的无菌外植体，切取3-4cm的茎节，基部蘸取适量浓度的1-3mg/l 6-ba+0.1-0.3mg/lnaa+0.5-2mg/l iba的植物激素溶液，接种于定芽诱导培养，其为wpm0、1/2ms、yx+0-1mg/l6-ba+0-0.1mg/l naa的定芽诱导培养基中；
5、(3)不定芽诱导：将第(2)步获得的伸长定芽，切取一个茎节，接种于不定芽诱导培养基，其为yx+0.5-3mg/l 6-ba+0.01-0.05mg/l kt+0.2g/l脯氨酸中，培养8-10周，每3-5周转接一次；
6、(4)不定芽伸长：将第(3)步获得的不定芽转接至不定芽伸长培养基中，所述伸长培养基为yx+0.5-2mg/l 6-ba+0.05-0.2mg/l naa+0.01-0.05mg/lga3，培养3-5周；
7、(5)生根培养：将第(4)步中伸长的芽接种至生根培养基中，培养至生根，获得完整的植株；
8、上述步骤中的培养基均添加蔗糖30g/l，琼脂粉5.0g/l，调节培养基ph值为5.80。
9、在具体实施时，所述培养条件为25±2℃，光照强度2000-3000lx，光照16h/d。
10、进一步地，还包括第(6)步即炼苗与移栽：挑选第(5)步中已生根且长势健壮的瓶苗进行炼苗后进行移栽。
11、优选实施方式中，第(1)步的消毒具体是：用洗涤剂清洗表面，而后置于流水下冲洗2h，将洗净后的材料放入无菌三角瓶中，转至超净工作台，使用75％乙醇溶液处理30-60s，含50％植物组培抗菌剂ppm和1％苯扎溴铵混合液的pb消毒液处理6-10min，最后用无菌水漂洗3-5次。
12、在另外的优选实施方式中，第(2)步中的定芽诱导培养基为wpm0、1/2ms、yx+0-0.5mg/l 6-ba+0-0.05mg/l naa。
13、在进一步优选的实施方式中，第(3)步中的不定芽诱导培养基为yx+0.5-2mg/l 6-ba+0.01-0.03mg/l kt+0.2g/l脯氨酸。
14、更进一步优选地，第(4)步中的伸长培养基为yx+0.5-1mg/l 6-ba+0.05-0.1mg/lnaa+0.01-0.03mg/lga3。
15、在一个实施方式中，第(5)步中的生根培养基为wpm+0.1-2mg/l iba+0.2％ ac；优选地，第(5)步中的生根培养基为wpm+0.5 -1.5mg/l iba+0.2％ ac。
16、在一个具体实施方式中，第(6)步中炼苗方法为：将培养瓶盖打开，注入0.5-1cm清水，置于室温、自然光照下，静置2-3天，将瓶苗掏出，将基部附着的培养基洗净，准备移栽；
17、另外的实施方式中，第(6)步中移栽的移栽基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石＝3：1：1，移栽前将基质连盆浸入水中使其完全润湿，移栽后套袋保湿，湿度不够时使用喷壶喷洒植株表面，待苗生长强健后除去套袋，正常养护。
18、其中，所述银杏培养基(yx)的制备方法为：按照表1配制基本培养基，ph 5.80，121℃灭菌15-25分钟。
19、表1银杏培养基(yx)的组成成分一览表
20、 编号 成分 浓度(mg/l) 1 <![cdata[kno<sub>3</sub>]]> 1425 2 <![cdata[nh<sub>4</sub>no<sub>3</sub>]]> 1237.5 3 mgso4·7h2o 370 4 <![cdata[cacl<sub>2</sub>]]> 249.2 5 <![cdata[kh<sub>2</sub>po<sub>4</sub>]]> 170 6 <![cdata[mnso<sub>4</sub>]]> 16.9 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种银杏（Ginkgo bilobaL.）萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，所述培养条件为25±2℃，光照强度2000-3000lx，光照16 h/d。
3.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，还包括第（6）步即炼苗与移栽：挑选第（5）步中已生根且长势健壮的瓶苗进行炼苗后进行移栽。
4.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（1）步的消毒具体是：用洗涤剂清洗表面，而后置于流水下冲洗2 h，将洗净后的材料放入无菌三角瓶中，转至超净工作台，使用75%乙醇溶液处理30-60 s，含50%植物组培抗菌剂PPM和1%苯扎溴铵混合液的PB消毒液处理4-12 min，最后用无菌水漂洗3 - 5次。
5.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（2）步中的定芽诱导培养基为YX+0-0.5mg/L 6-BA+0-0.05mg/L NAA，接种至腋芽开始出现萌动。
6.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗
7.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（4）步的培养中每3-5周转接一次。
8.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（4）步中的伸长培养基为YX+0.5-1mg/L6-BA+0.05-0.1mg/LNAA+0.01-0.03mg/L GA3。
9.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（5）步中的生根培养基为WPM+0.5-1.5 mg/L IBA+0.2% AC。
10.如权利要求3所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（6）步中炼苗方法为：将培养瓶盖打开，注入0.5-1 cm清水，置于室温、自然光照下，静置2-3天，将瓶苗掏出，将基部附着的培养基洗净，准备移栽；第（6）步中移栽的移栽基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，移栽前将基质连盆浸入水中使其完全润湿，移栽后套袋保湿，湿度不够时使用喷壶喷洒植株表面，待苗生长强健后除去套袋，正常养护。
...【技术特征摘要】
1.一种银杏（ginkgo bilobal.）萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，所述培养条件为25±2℃，光照强度2000-3000lx，光照16 h/d。
3.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，还包括第（6）步即炼苗与移栽：挑选第（5）步中已生根且长势健壮的瓶苗进行炼苗后进行移栽。
4.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（1）步的消毒具体是：用洗涤剂清洗表面，而后置于流水下冲洗2 h，将洗净后的材料放入无菌三角瓶中，转至超净工作台，使用75%乙醇溶液处理30-60 s，含50%植物组培抗菌剂ppm和1%苯扎溴铵混合液的pb消毒液处理4-12 min，最后用无菌水漂洗3 - 5次。
5.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于，第（2）步中的定芽诱导培养基为yx+0-0.5mg/l 6-ba+0-0.05mg/l naa，接种至腋芽开始出现萌动。
6.如权利要求1所述的银杏萌蘖芽离体种苗繁殖方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱木兰，谢雨玫，闫学彤，郑珂媛，周慧晶，
申请(专利权)人：上海辰山植物园，
类型：发明
国别省市：
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